cytochroom oxidase en NADH cytochroom c reductase activiteiten werden biochemisch geanalyseerd gingiv.il hiops & gt; specimens verkregen van 22 mannelijke patiënten (leeftijd 23-72) ondergaat parodontale behandeling. Histologisch. 13 exemplaren tentoongesteld lichte ontsteking, terwijl 9 vertoonden ernstigere ontstekingsreacties. Cytochroom oxidase activiteit significant groter in het licht ontstoken dan sterk ontstoken weefsel monsters. NADH cytochroom c reductase activiteit daarentegen niet significant gewijzigd door de toenemende mate van ontsteking. De mogelijke implicatie van het effect van ontsteking op oxidatieve enzymen besproken met betrekking tot degeneratieve en proliferatieve veranderingen in beide typen weefsels.
Introductie
cytochroom oxidase (E.C1.9.3.1 .) en NADH reductase cytochroom C (ECI, 6. 2. I) werden bepaald in hoofdzaak normale humane gingiva (Eichel & amp; Sharhrik 1964), maar deze parameters niet zijn geanalyseerd met betrekking tot de uit gingivitis effecten. Endogene ademhaling studies is gebleken dat de QOj wordt gestimuleerd in een milde tandvleesontsteking, en depressief in sterk ontstoken tandvlees (Glickman el al 1949 Manhold & amp;. Volpe 196,1). Aan de andere kant recente polarographie studies (Zajieck & amp; Kindlova 1972) is gebleken dat de eerste QO_. waarden bleven constant menselijke gingiva en werd niet significant beïnvloed door de mate van ontsteking. In het licht van deze uiteenlopende standpunten, willen we verslag uit over de gevolgen van de ontsteking op cytochroom oxidase en NADH cytochroom c reductase activiteiten in de totale homogenaten van menselijke tandvlees.
Methods and Materials
Tissue Voorbereiding
Human tandvlees biopten werden verkregen Irom 22 mannelijke patiënten (leeftijd 23-72), parodontale behandeling ondergaan. Regionale anesthesie werd toegediend aan infiltratie van het weefsel te voorkomen. Het weefsel werd chirurgisch verwijderd en in twee delen waarvan werd bereid voor histologisch onderzoek snijden. De andere werd gewassen met koude 0,075 M fosfaatbuffer pH 7,0. om vast te houden bloed te verwijderen en snel ingevroren bij - 70 & deg; C op droog ijs. Het weer /nl tandvlees monsters voor hun enzymatische activiteit werden geanalyseerd binnen één dag na de opheffing ervan. Gingivale homogenaten werden bereid door een modificatie van de methoden (Hoober & amp; Bernstein 1966) gebruikt tor de homogenisering van de huid van ratten. Het bevroren gingivale weefsel (25 -5U mg nat gew.) Werd ondergedompeld in vloeibare N, (-270'C) gedurende 3 minuten en verpulverd om kleine korrels fragmenten. Het tandvlees fragmenten werden gehomogeniseerd in koude buffer in Ten Broeck ingeslepen homogenisatoren die werden gemalen aan te passen met een speling tolerantie o ((1,1-0,15 mm. De enzymatische activiteiten werden onmiddellijk bepaald na weefsel homogenisering.
Enzym Analyse
cytochroom oxidase (EC 1. 9. 3. 1.) (Wainio et al 1951.) werd bepaald spectrofotometrisch hy na de oxidatie van dithioniet verminderd cytochroom c * bij I al 25 & deg; C in een Gilford Model 2400 spectrofotometer. in nihil experimenten de auto-oxidatie van lerrocytoehrome C vóór de toevoeging van het enzym was verwaarloosbaar. de E.VHI '', absorptiewaarden voor homogenaat bezinking waren grotendeels verwaarloosbaar (0,0% in 16 monsters), en indien ontdekt ze varieerden van 0, (12-13,0;. van de enzymatische waarde de gemiddelde waarde was 2,5 bezinken & plusmn;. 0,9 ci voor de 22 monsters die werden geanalyseerd schikking werden bepaald door het opnieuw reduceren van de reactie media met een overmaat dithioniet, resuspenderen het homogenaat in de reactie media, en naar aanleiding van de wijziging in de optische absorptie bij Ejaonni VS-tijd grafisch. De afwikkeling waarden werden afgetrokken van de totale waargenomen extinctie in het getroffen enzymtesten en de specifieke activiteiten werden bepaald uit de gecorrigeerde waarden. Het reactiemengsel bevatte: 75 mm KH..PO | -Na, .HPO4 buffer pH 6,75. 5,6 uM en cytochroom c (25-150) jig eiwit (homogenale) in een eindvolume van 300 u. Cytochroom c concentratie werd bepaald uit de millimolaire extinctiecoëfficiënt van cytochroom c H - ,, -,,, t] s = 18,5 mm 'cm' voor de verminderde minus geoxideerde cvtoehrome c
NADH cytochroom c reductase.. NADH cytochroom c reductase (E.C. 1. 6. 2. 1.) (Jeng et al. 1968) werd bepaald door de reductie van cytochroom c op Er ,, Tnm bij 25 ° C. De millimolair extinctiecoëfficiënt gebruikt voor cytochroom c in het cytochroom oxidase bepaling werd gebruikt voor deze test. Het testsysteem bevatte: 33 mm KHiPOi-NaoHPO, pH 7,75 buffer, S.2 FTM cytochroom c, 3.0mm KCN, 85 /LIM NADH ** en (25-150) ^ g eiwit (homogenaat) in de uiteindelijke volume van.. 300 II.
Specifieke activiteiten
Specifieke activiteiten zijn uitgedrukt als nanomoies van cytochroom c geoxideerd (cytochroom oxidase) of verminderd (NADH cytochroom c reductase) per mg eiwit per min.
eiwitbepaling
Weefselhomogenaten (10-20 /A) werden verteerd in 0,05 N NaOH (eindconcentratie) gedurende één uur bij 25 & deg; C en geanalyseerd op eiwit volgens de methode van Lowry et al .. ( 1951). Kristallijn albumine *** werd gebruikt als een standaard.
Statistieken
Het gemiddelde, de standaarddeviatie en standaardfout werden bepaald voor elke groep. Waarden die de limieten & plusmn; 1,96 SD werden weggegooid. Het verschil tussen elke fractie werd geanalyseerd met de "student t" test en alle waarden p. verpulvering van de (afgifte, ontdooien en daaropvolgende homogenisering lijkt voldoende verstoren van de cellen. Bewijs voor deze interpretatie ligt in de waarneming dat de verdeling van NADH cytochroom c reductase zowel licht ontstoken en sterk ontstoken gingiva niet significant verschillen. Als de daling cytochrome oxidase werd beïnvloed door onze weefsel bereidingstechnieken dienen overeenkomstige resultaten worden waargenomen in de NADH cytochroom c reductase verdelingen. de hoeveelheid vestigen in ons testsysteem verwaarlozen waren grotendeels te zijn en kon niet verklaren de sterke achteruitgang cytochroom oxidase activiteit waargenomen in sterk ontstoken tandvlees.
de verhoogde cylochiomc oxidase activiteit waargenomen in onze studie valt samen met de opmerkingen van Manhold en Volpj (1963) in hun endogene QCK ademhaling studies van licht ontstoken en prolifererende menselijke tandvlees. de toename van QOL & gt en cytochroom oxidase in gingiva kunnen houden met een verhoogde mitochondriale hoogenergetische binding (ATP) synthese, die nodig is om de sterk synthelic processen geassocieerd met DNA-synthese, mitose, alsook cellulaire proliferatie ondersteunen. Verder bewijs voor de verhoogde bioencrgelic redenen van pre-prolifererende en proliferatieve fasen van celontwikkeling is de waarneming dat QOL toegenomen. (Endogene ademhaling) (Glickman el al. 1949) en cytochroom oxidase (schone 197 (1) bereikt activiteitspieken op een moment dat veel extra personeel mitolic index en proliferatie (epitheiialization) voorkomen in regenereren gingivale en huidwonden. Op anderzijds IHE scherpe daling van cytochroom oxidase en endogene Qoo waargenomen in sterk ontstoken (Manhold & amp;. Volpe 1963 Giickman et al 1949) gtngiva lijken reflecties van de veranderingen die zich in de mitochondriën, alsmede andere subcellulaire componenten tijdens belangrijke tandvlees vernietiging . We kunnen een toename cytochrome oxidase in sterk ontstoken en prolifererende gingiva DELETE. stijgingen in de endogene QO. werd gedetecteerd door Giickman et al. (1949) in dit type gingiva pathologie. het is echter denkbaar lhal ontsteking afneemt, een preproliferatieve fase (S-fase van mitose) plaatsvindt binnen de migrerende cellen aan de wondrand toenamen ATP-synthese vereist. Vervolgens wordt een verhoging van endogene QOL. wordt ook waargenomen. Onze cytochrome oxidase gegevens en de gerapporteerde endogene ademhaling QOj data niet samenvallen met de polarografische QO. opmerkingen van Zajieek en Kindlova (1972), die thai de initiële QO_ & gt gemeld; waarden bleven constant menselijke gingiva en werd niet significant beïnvloed door de mate van ontsteking.
NADH cytochroom c reductase activiteit niet wezenlijk veranderd door de mate van ontsteking in humane tandvlees. Onze gegevens voor menselijke gingiva parallel aan de opmerking van Eichel en Shahrik (1964), voor de menselijke niet-ontstoken tandvlees. NADH cylochrome c reductase activiteit bleek significant groter dan cytohrome oxidase in onze studies, die correleert met de opmerking van Eiehcl en Shahrik
zijn