Abstract achtergrond
Het is algemeen bekend dat het gebruik van de prothese reinigingsmiddelen Candida albicans kan verminderen
biofilm accumulatie; De werkzaamheid van citroenzuur prothese reinigingsmiddelen onzeker. Bovendien is de effectiviteit op lange termijn van deze prothese reiniger niet vast, en hun effect op residuale biofilms is onbekend. Dit in vitro
studie evalueerde de werkzaamheid van citroenzuur prothese reinigingsmiddel behandeling op C. albicans
biofilm herkolonisatie op poly (methyl methacrylaat) (PMMA) oppervlak.
Methods
C. albicans
biofilms ontwikkeld voor 72 uur op PMMA hars monsters (n = 168), die willekeurig werden ingedeeld in 1 van 3 behandelingen reiniging (CT) gedurende de nacht (8 uur). TI's opgenomen gezuiverd water als controle (CTC) en twee experimentele groepen die ofwel een 1 gebruikt: 5 verdunning van citroenzuur prothese reinigingsmiddel (CT5) of een 1: 8 verdunning van citroenzuur prothese reinigingsmiddel (CT8). Overblijvende biofilms zich te houden aan de monsters werden verzameld en gekwantificeerd op twee tijdstippen: onmiddellijk na de CT (ICT) en na reiniging en achtergebleven biofilm herkolonisatie (RT). Residuele biofilms werden geanalyseerd door het kwantificeren van de levensvatbare cellen (CFU /ml) en biofilm architectuur werd geëvalueerd door confocale laser scanning microscopie (CLSM) en scanning elektronenmicroscopie (SEM). Kunstgebit cleanser behandelingen en perioden evaluatie werden beschouwd studie factoren. De gegevens werden geanalyseerd met behulp van twee-weg ANOVA en Tukey's Eerlijk Significant Difference (HSD) -test (α = 0,05).
Resultaten
Onmiddellijk na behandelingen, citroenzuur prothese reiniging oplossingen (CT5 en CT8) verminderde het aantal levensvatbare cellen in vergelijking met de controlegroep (p & lt; 0,01). Echter, na 48 uur, CT beide groepen (CT5 en CT8) toonde biofilm herkolonisatie (p & lt; 0,01). Residuele biofilm herkolonisatie werd gedetecteerd door CLSM en SEM-analyse, die een hogere biomassa en biofilm gemiddelde dikte van de CT8 groep (p & lt; 0,01) geopenbaard.
Conclusie
Citroenzuur prothese reinigingsmiddelen kan C. albicans verminderen
biofilm accumulatie en levensvatbaarheid van de cellen. Echter, deze CT niet voorkomen biofilm herkolonisatie
Sleutelwoorden
biofilm Kunstgebit hygiëne Kunstgebit Cleansers Candida albicans
Poly (methyl methacrylaat) Elektronische aanvullend materiaal
De online versie van dit artikel (doi:. 10. 1186 /1472-6831-14-77) bevat aanvullend materiaal, dat beschikbaar is voor geautoriseerde gebruikers is. achtergrond
Candida
spp. is een van de belangrijkste causatieve organismen van prothese geïnduceerde stomatitis, die vooral vanwege zijn vermogen tot hechten en vormen biofilms op mondholte weefsel en prothese oppervlakken, alsmede vanwege zijn weerstand tegen antischimmelmiddelen [1-4]. Deze biofilm groeit uitgebreid over acrylhars prothese materiaal en de effectieve verwijdering is een belangrijke uitdaging zowel door chemische en mechanische methoden [2-5].
Veel chemische prothese reinigingsmiddelen die enzymen bevatten, natriumhypochloriet, alkalische peroxide en zure oplossingen zijn beschikbaar voor gebruik bij mechanisch borstelen het residuele biofilm verbonden prothese oppervlakken [5-8] verwijderen. Kunstgebit reiniging oplossingen hebben antimicrobiële eigenschappen, zoals blijkt uit vele studies [7-12]; Geen van deze werkwijzen lijken effectief te verwijderen van de biofilm en rekolonisatie voorkomen op de prothese oppervlak [6, 7].
ander type prothese reinigingsmiddel bevat citroenzuur en is beschikbaar als een geconcentreerde oplossing, die dagelijks worden gebruikt ( 1: 5 verdunning) of wekelijks (1: 8 verdunning) na juiste verdunning (zoals aangegeven door de fabrikant). Dit reinigingsmiddel werkt als een chemotherapeutisch middel dat effectief biofilms kan verstoren door een sequestrerend mechanisme calciumionen [13]. Dit mechanisme maakt citroenzuur calcium bruggen breken en vervolgens verstoren de biofilm matrix, die kan leiden tot anti-biofilm activiteit [14, 15] zijn.
Citroenzuur oplossingen geëvalueerd op hun vermogen om implantaatoppervlakken decontamineren [16], waaruit een vermindering van het aantal pathogene species. Hoewel citroenzuur oplossingen zijn ook effectief tegen Streptococcus mutans
biofilms en biofilms afgeleid van verschillende soorten die ontwikkelen titanium oppervlakken [16], het effect van citroenzuur reinigingsmiddelen tegen Candida
biofilms op oppervlakken prothese nog niet gemeld.
Hoewel continu gebruik van citroenzuur reinigingsmiddelen gedurende 3 maanden toonde bijwerkingen met een grotere ion afgifte uit Co-Cr legeringen [17, 18], hebben geen schadelijke effecten aangetoond met prothese materialen in het algemeen [19]. Daarentegen andere prothese reinigingsmiddelen, vooral die met natriumhypochloriet, kan oppervlakteruwheid verhogen hardheid verminderen, en uiteindelijk de kleur van acrylharsen en prothese bekledingen [19-21]. Daarom kan citroenzuur reinigingsmiddelen geschikt voor uitneembare prothesen en orthodontische apparatuur en voor het verwijderen van biofilms en het voorkomen van hun herkolonisatie zijn.
Daarom, gezien de schaarste aan studies naar de effectiviteit van citroenzuur reinigingsmiddelen voor het verwijderen van biofilms uit kunstgebit materialen, de huidige studie evalueerde de werkzaamheid van citroenzuur reinigingsmiddelen op Candida albicans
biofilm herkolonisatie op poly (methyl methacrylaat) (PMMA).
Methods
Proefopzet Inloggen Deze in vitro
studie gebruik gemaakt van een gerandomiseerde, geblindeerde ontwerp . C. albicans
biofilms werden ontwikkeld voor 72 uur op PMMA hars monsters (n = 168) en vervolgens willekeurig toegewezen aan 1 van 3 behandelingen reiniging (CT): gezuiverd water, gebruikt als controle (CTC); 1: 5 verdunning van citroenzuur prothese reinigingsmiddel (CT5); of 1: 8 verdunning van citroenzuur prothese reinigingsmiddel (CT8). Overblijvende biofilms die vastzit aan monsters werden verzameld en gekwantificeerd op twee verschillende tijdstippen: onmiddellijk na het reinigen behandelingen (ICT groep) of 48 uur na de reiniging, toen resterende biofilm herkolonisatie (RT-groep) zou optreden. Residuele biofilms werden geanalyseerd door het bepalen van het aantal levensvatbare cellen (CFU /ml). Biofilm architectuur werd geëvalueerd door confocale laser scanning microscopie (CLSM) en scanning elektronenmicroscopie (SEM). De studie factoren waren prothese reinigingsmiddel behandelingen en evaluatie perioden (ICT of RT). De respons variabelen waren het aantal levensvatbare cellen en de architectuur van C. albicans
resterende biofilms. Een schema van de experimentele opzet wordt geïllustreerd in de Extra file 1.
Hars exemplaren
Schijfvormige monsters (10 mm diameter, 2 mm dikte en 219,8 mm
2-gebied) van-magnetron gepolymeriseerd PMMA ( Onda Cryl; Artigos ODONTOLOGICOS Clássico Ltd, São Paulo, Brazilië) werden gefabriceerd volgens de instructies van de fabrikant. Na polymerisatie werden de schijven ondergedompeld in gezuiverd water bij 37 ° C gedurende 48 uur voor restmonomeer afgifte [22]. De PMMA monsters werden vervolgens gemalen met een horizontale polijstmachine (model APL-4; Arotec, São Paulo, Brazilië) en het gebruik van steeds fijnere aluminiumoxide papers (320-, 400- en 600-grit) om oppervlakteruwheid te standaardiseren op 0,34 ± 0,02 urn. Voordat de ontwikkeling van de biofilm, werden de schijven ultrasoon gereinigd (Thornton T 740; Thornton-Inpec Eletrônica Ltda, Vinhedo, Brazilië) met 70% alcohol en gesteriliseerd ultra-gezuiverd water (20 min) om verontreinigingen en voorwerpen uit het oppervlak te verwijderen [23] . De afwezigheid van besmetting werd bevestigd door het onderdompelen van een monster van de monsters in steriele kweekmedium Ondernemingen De monsters werden willekeurig toegewezen aan 1 van de 3 behandelingsgroepen, die verder verdeeld binnen de geëvalueerde tijdstippen:. Onmiddellijk na behandeling (ICT) en 48 uur na reiniging en achtergebleven biofilm herkolonisatie (RT). Het aantal exemplaren in elke groep (n = 12) werd bepaald met de voorlopige tests, die bevestigde de steekproefomvang leverde een voldoende vermogen (80%) voor het detecteren van statistisch significante verschillen.
Speekselklier vlies formatie op specimens
Voor het ontwikkelen de biofilm assays, schoon PMMA monsters werden bekleed met speeksel om de mondholte omgeving nabootsen. Menselijk speeksel werd geschonken door een gezonde vrijwilligers, die mits dit schriftelijk informed consent. Het comité Onderzoek en Ethiek van Piracicaba Dental School, State University of Campinas, goedgekeurd deze studie. Het speeksel monster werd verzameld op hetzelfde tijdstip, voor elk experiment en het verzamelvolume beperkt tot 50 ml per verzamelperiode
Menselijk speeksel werd verzameld door kauw- stimulatie met flexibele folie (Parafilm M;. American Can Co. , Neenah, WI). Speeksel werd geklaard door centrifugeren bij 3800 g
gedurende 10 min bij 4 ° C. Het supernatant werd verzameld en gesteriliseerd door filtratie (22 micrometer) voor onmiddellijk gebruik. Voor elke plaat werd een speeksel vlies gevormd op het oppervlak na incubatie gedurende 30 min bij 37 ° C en 75 tpm in een rondschudapparaat.
Inoculum en groeiomstandigheden
Een lusvol gistcultuur van C. albicans
(ATCC 90.028) werd geactiveerd en gedurende 24 uur bij 37 ° C. Daarna werden de cellen geoogst, gesuspendeerd in Yeast Nitrogen Base (YNB) medium (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ) aangevuld met 100 mM glucose. Celdichtheid werd spectrofotometrisch (Spectronic 20; Bausch & amp; Lomb, Rochester, NY) gestandaardiseerd op een 0,25 optische dichtheid bij 520 nM, hetgeen overeenkomt met 1 x 10 6 CFU /ml inoculum [24]
Biofilm assay.
PMMA-speeksel beklede schijven werden verticaal polystyreen 24-putjes kweekplaten geplaatst. Vervolgens werd 2 ml van de gestandaardiseerde celsuspensie (1 x 10 6 CFU /ml C. albicans
in YNB glucose gesupplementeerd met 100 mM) werd aan elk putje toegevoegd. Biofilm ontwikkeld bij 37 ° C en onder 75 tpm in een rondschudapparaat, voor 72 uur, om biofilm rijping mogelijk. Het medium werd elke 24 uur vervangen. Biofilm assays werden in drievoud uitgevoerd in 3 onafhankelijke experimenten.
Behandelprotocollen
Na de groei biofilm gedurende 72 uur werden de monsters willekeurig toegewezen aan 1 van 3 CT's nachts (8 uur). Citroenzuur reinigingsmiddel (CURADEN BDC 105, Curaprox, Zwitserland) werd opgelost in gezuiverd water, volgens de instructies van de fabrikant, in 1: 5 of 1: 8 oplossingen, die respectievelijk aanbevolen wekelijks of dagelijks gebruik. Elk monster werd in een steriele beker met 8 ml van de behandelingsoplossing.
Na cleanser behandelingen (8 uur), werden monsters verwijderd en tweemaal in 2 ml gesteriliseerde met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) (pH 7,4) gewassen . De resterende biofilms zich te houden aan de monsters werden onmiddellijk opgevangen (ICT) of kunnen groeien onder dezelfde omstandigheden gedurende 48 uur (RT groep) [10].
Levensvatbare cel kwantificering van residuele biofilm
Resterende biofilms werden verstoord en nageleefd micro-organismen in klinische monsters werden verwijderd door sonicatie (7 w 30 s). Gesonificeerd oplossingen werden serieel verdund in PBS en uitgeplaat (20 ui) in drievoud op Sabouraud Dextrose agar. De platen werden geïncubeerd bij 37 ° C onder aerobe condities gedurende 48 uur. CFU werd geteld onder toepassing van een stereomicroscoop en de resultaten worden uitgedrukt in kolonievormende eenheden per ml (CFU /ml)
Biofilm architectuuranalyse. SEM
Exemplaren met bijgevoegde biofilms werden gespoeld met steriele PBS en in 1% osmiumtetroxide gedurende 1 uur. Monsters werden vervolgens in gezuiverd water (bij 10 min 10 min 70%, 95% en 100% gedurende 20 min) gewassen, gedehydrateerd in een reeks van ethanol wassen en aan de lucht gedroogd in een exsiccator sputter coating met goud [24, 25]. Vervolgens werden monsters gemonteerd op aluminium stubs en bekleed met goud. De biofilm oppervlakte-eigenschappen werden gevisualiseerd met SEM (JSM 5600LV, JEOL, Tokyo, Japan) op 1500 × in een high-vacuum modus bij 15 kV
Biofilm architectuur analyse:. CLSM
biofilms gevormd op PMMA oppervlakken werden gekleurd met behulp van live /Dead BacLight levensvatbaarheid kit, bestaande uit SYTO-9 en propidiumjodide (PI). Voordat de CLSM onderzoeken, werden monsters beschermd tegen licht en geïncubeerd bij 37 ° C gedurende 20 minuten [24, 25]. Afbeeldingen van gebrandschilderd biofilms werden opgenomen met een CLSM systeem (LEICA - TCS SP5, Leica Microsystems, Wetzlar, Duitsland). Een reeks beelden werden verkregen bij 1 urn intervallen in de z gedeelte een driedimensionaal aanzicht van de biofilm. Tenminste werden vijf representatieve optische velden onderzocht voor elk specimen.
COMSTAT software werd gebruikt om CLSM-beelden te analyseren. De architectuur eigenschappen van biofilms door COMSTAT analyseerde onder meer de biovolume (um 3 /um 2), gemiddelde dikte (pm), en ruwheid coëfficiënt.
Statistische analyse
De gegevens werden geanalyseerd met behulp van statistische software ( SAS v 9.0;. SAS Institute, Inc., Cary, NC) met een 5% vaste significantie niveau. De veronderstellingen van de gelijkheid van verschillen en de normale verdeling van de fouten werden geëvalueerd voor elke variabele. Toen normaliteit werd geschonden, werden de gegevens logaritmisch getransformeerd. Factoren mengen in de responsvariabelen (C. albicans
levensvatbare cellen CFU /ml), bio-volume (μm3 /pm2), gemiddelde dikte (um) en ruwheidscoëfficiënt) werden geanalyseerd met tweeweg ANOVA (type en evaluatie periode). Post-hoc vergelijkingen werden uitgevoerd met behulp van Eerlijk Significant verschil Tukey's (HSD) te testen.
Resultaten
De two-way ANOVA vergelijkingen toonden aan dat beide studie factoren "behandelingen" (CTC, CT5 en CT8) en "evaluatieperioden" (ICT en RT) beïnvloedde de levensvatbare cel kwantificering (p & lt; 0,01); maar geen statistisch interacties gedetecteerd. Voor biofilm architectuur parameters (bio-volume gemiddelde dikte en ruwheid), de twee-weg ANOVA vergelijkingen toonden een statistisch significante interactie (p & lt; 0,001). Tussen de factoren bestudeerd
Het gebruik van citroenzuur reinigingsmiddelen resulteerde niet in een levensvatbare cellen direct na de behandelingen voor zowel experimentele groepen (CT5 en CT8) (p & lt; 0,01), zoals getoond in tabel 1. echter, 48 uur na de behandelingen, C. albicans
CFU tellingen werden gedetecteerd in de levensvatbare cel kwantificering, waaruit blijkt dat de resterende biofilms het PMMA oppervlak exemplaren kon herkoloniseren. Hoewel citroenzuur TI niet effectief waren binnen 48 h (p & lt; 0,01), die reinigingsoplossingen vertoonden lager aantal CFU tellingen in vergelijking met de controlegroep (p & lt; 0,01) aan beide evaluatietijd points.Table 1 C. albicans levensvatbare cell kwantificering (gemiddelde ± SD) volgens verschillende behandelingen en evaluatieperiode
levensvatbare cellen (106 CFU /ml)
Cleansing behandeling
evaluatie periodes
Onmiddellijk na behandelingen (ICT)
toegestaan om herkoloniseren (RT)
CTC - H2O
1,01 ± 8.59Aa
11,1 ± 12.30Ba
CT5 - 1: 5
0AB
1.92 ± 3.64Bb
CT8 - 1 : 8
0AB
3,63 ± 4.12Bb
Verschillende hoofdletters geven statistisch significante verschillen (p & lt; 0,01) tussen de evaluatie perioden [Onmiddellijk behandeld (ICT ) en men liet herkoloniseren (RT)]. Verschillende kleine letters geven significante verschillen (p & lt; 0,01). Tussen behandelingen (CTC, CT5 en CT8)
Biofilm architectuur analyses zijn weergegeven in Tabel 2. Statistisch significante verschillen werden gedetecteerd evaluatieperioden (p & lt; 0,01) en prothese reinigingsmiddel behandelingen (p & lt; 0,05). Onmiddellijk na behandeling (ICT), biofilms behandeld met CT5 waren getroffen dan behandeld met CT8 en de controlegroepen, die een lagere bio-volume en gemiddelde dikte dan die van de andere groepen (p & lt; 0,05). Bovendien, de CT8 groep een hogere ruwheidscoëfficiënt, waarin de biofilm minder verdicht (p & lt; 0,05). Na de herkolonisatie periode (RT), biofilms behandeld met dagelijkse reinigingsoplossing (CT8) werd een verhoogde bio-volume en gemiddelde dikte in vergelijking met die voor de 1: 5 verdunning (CT5) en controle (water) behandeling (p & lt 0,05) .Hoewel er geen statistische verschillen in de architectuur van biofilms behandeld met water of CT5 (p & gt; 0,05) verschillen in biofilms gevisualiseerd met SEM en CLSM gedetecteerd onder groepen (figuren 1 en 2). Zoals de cijfers suggereren, biofilms van de controle en citroenzuur vertoonden verschillende metabole niveaus na elke CT's voor zowel de evaluatie periods.Figure 1 geeft representatieve SEM beelden van biofilms behandeld met gezuiverd water, CT5 en CT8 bij de ICT- en RT evaluatie perioden. Ten aanzien van de controle behandeling (gezuiverd water), werden er geen substantiële veranderingen in de biofilm structuur ontdekt. Hyfen werden onmiddellijk waargenomen na citroenzuur behandelingen (Figuur 1B en C). Wij namen een drastische vermindering van het aantal cellen voor de CT8 groep onmiddellijk na behandeling (figuur 1C). Daarnaast zagen we een lichte afname van celaantallen voor CT5 op beide tijdstippen (figuur 1B en E), vergeleken met de controlegroep. Biofilms gesignaleerd bij alle groepen na de herkolonisatie periode (figuur 1D, E en F) en groter aantal cellen waargenomen voor de groep CT8 bij kamertemperatuur (Figuur 1F) .table 2 Bio-volume (3 um /um 2), gemiddeld dikte (pm), en ruwheid coëfficiënt (gemiddelde ± SD) van C. albicans biofilms volgens verschillende behandelingen en evaluatieperiode
Bio-volume
gemiddelde dikte
ruwheidscoëfficiënt
Behandelingen
Evaluatie periodes
Evaluatie periodes
Evaluatie periods
ICT
RT
ICT
RT
ICT
RT
CTC
10.77 ± 1.5AA
1.30 ± 1.2Ba
12,25 ± 2.1Aa
1,53 ± 1.4Ba
0,11 ± 0.1Aa
1,41 ± 0.4Ba
CT5
12.61 ± 3.1Aa
1,14 ± 0.6Ba
11.97 ± 3.1Aa
1,04 ± 0.6Ba
0.21 ± 0.2Aa
1,73 ± 0.1Ba
CT8
3.87 ± 2.8Ab
9.71 ± 2.7Bb
4.88 ± 3.7Ab
11.69 ± 3.3Bb
1,17 ± 0.3Ab
0.30 ± 0.2Bb
Verschillende hoofdletters geven statistisch significante verschillen (p & lt; 0,01) tussen de evaluatie termijnen behandelingen [Onmiddellijk behandeld (ICT); en Mag herkoloniseren (RT)]. Verschillende kleine letters geven statistisch significante verschillen (p & lt; 0,05). Tussen behandelingen (CTC, CT5 en CT8) binnen een periode van evaluatie
Figuur 1 vertegenwoordiger scanning elektronenmicroscoop (SEM) foto's (1500 x) van C. albicans biofilms volgens verschillende behandelingen en periodes evaluatie: Een CTC groep (ICT); B, CT5 groep (ICT); C, CT8 groep (ICT); D, CTC groep (RT); E, CT5 groep (RT); F, CT8 groep (RT). Let op de hyfen (pijlen) vormen onmiddellijk nadat beide citroenzuuroplossing behandelingen ICT en de herkolonisatie na 48 uur (KT).
Figuur 2 Representatieve confocale laser scanning microscopie (CLSM) van C. albicans biofilms volgens verschillende behandelingen en evaluatie perioden in de onderzochte behandelingen en perioden: Een CTC groep (ICT); B, CT5 groep (ICT); C, CT8 groep (ICT); D, CTC groep (RT); E, CT5 groep (RT); F, CT8 groep (RT). Bars vertegenwoordigen 12,5 urn. Opmerking lagere celdichtheid in ICT, zowel CT5 en CT8 groepen (B en C), vergeleken met controle (A). Let op de lagere celdichtheid voor de CT5 groep in vergelijking met de CT8 groep in RT. Discussion lichte afname celdichtheid voor de controlegroep kan het gevolg zijn biofilm over-rijping.
In de onderhavige studie hebben we onderzocht de werkzaamheid van citroenzuur prothese reinigingsmiddel voor het verwijderen of het doden van C. albicans
biofilm gevormd op het oppervlak van PMMA specimens. Een lange termijn effect van andere prothese reinigingsoplossingen werd aangetoond in eerdere studies [7, 9], waarin ook de evaluatie van de gouden standaardoplossing (natriumhypochloriet). In de onderhavige studie werd slechts gezuiverd water als de controle gebruikt. Aangezien het bekend is dat natriumhypochloriet is effectief tegen Candida
biofilms onze studie gericht verschillen vertonen, indien aanwezig, tussen citroenzuur prothese reinigingsmiddel en de afwezigheid van chemische behandeling. Deze studie toonde aan dat het citroenzuur behandeling effectiever dan zonder behandeling was; maar vergelijkingen met een gouden standaard oplossing nog worden getest. Ondernemingen De citroenzuur gebit reinigingsmiddel gebruikt in de onderhavige studie was een mengsel van ultra-zuiver water en citroenzuur in niet-toxische, in water oplosbare, lage viscositeit chemische oplossing, die calcium-ion bruggen die dienen als chemische bindingsplaatsen verbinden van de EPS polymeerketens te breken [13]. Op basis van de literatuur, citroenzuur is het chemotherapeutische middel met het grootste potentieel voor het verwijderen van biofilms door verontreinigde titanium oppervlakken in vitro
, hoewel het wel opheffen [14, 16] bereikten.
In de onderhavige studie hebben we neemt een biofilm herkolonisatie fenomeen in beide experimentele groepen als gereinigd specimens 48 uur meer in een kweekmedium aangevuld met glucose werden gehandhaafd. Daarom vonden we dat citroenzuur maakte de biofilms, maar hen niet helemaal te verwijderen. Deze bevinding leidt tot de veronderstelling dat deze prothese reinigingsmiddel een effectieve aanvullende methode voor biofilms kan zodra het mogelijk het afval gemakkelijker worden verwijderd van de prothese oppervlak. Aldus wordt verwacht dat citroenzuur bevat een consistent effect op biofilms wanneer geassocieerd met een mechanische werkwijze, zoals borstelen, de mature biofilm van kunstgebitten volledig te verwijderen [14, 16, 26].
Hoewel het aantal levensvatbare cellen was nul onmiddellijk na behandeling met hetzij citroenzuur reinigingsmiddelen, zij opgemerkt dat het aantal levensvatbare cellen geïdentificeerd door CFU assay heeft een lage gevoeligheid wanneer een klein aantal cellen levensvatbaar. In een poging om deze resultaten te verklaren, gebruikten we CLSM als hulpstof werkwijze voor CFU bepaling door analyse van de biofilms met hun driedimensionale structuren behouden, wat ook bleek levensvatbaar. Daarom is de aanwezigheid van achtergebleven biofilm werd bevestigd door SEM en CLSM analyse en kon men denken levensvatbare cellen en biofilm structuren observeren ICT. Deze overgebleven biofilms bijgedragen tot herkolonisatie oppervlak na 48 uur, zoals bij RT werd waargenomen Ondernemingen De onderhavige studie evalueerde de 1:. 5 en 1: 8 verdunningen van citroenzuur reinigingsmiddel om de wekelijkse en dagelijks gebruik simuleren. Deze oplossingen waarschijnlijk niet volledig invloed op de basale lagen van de biofilms. Dit verschijnsel kan worden veroorzaakt door de aanwezigheid van een extracellulaire matrix die de biofilm beschermd tegen het reinigingsmiddel en het denken cellen metabolische rusttoestand, goed voor de herkolonisatie na 48 h [1, 27]. . Derhalve één blootstelling aan citroenzuur prothese reinigingsmiddel niet kan Candida
biofilms te verwijderen, of de herkolonisatie voorkomen
vergelijking van de resultaten van levensvatbare cellen kwantificering en biofilm architectuuranalyse, we vonden dat behandelingen met 1: 5 en 1: 8 verdunningen van citroenzuur oplossingen kan een vertraagd effect op de biofilm cellen. Hoewel veel levensvatbare cellen werden waargenomen in de CLSM beelden werden deze niet gedetecteerd door levensvatbare cellen assessment. Dit kan worden verklaard door het fenomeen dat bekend staat als Post-Antifungale Effect (PAFE), waarin stoffen opgeslagen in vacuoles de cellen zou doden na verloop van tijd [4].
Volgens PAFE, citroenzuur opname door Candida
cellen tijdens de behandelingen bijgedragen tot de afwezigheid van de CFU's in levensvatbare cellen evaluatie en de vermindering celdichtheid voor de 1: 5 en 1: 8 groepen, vergeleken met de controlegroep. Wat de biofilms gevisualiseerd kamertemperatuur werd een sterke groei waargenomen voor de CT8 groep dan de groep CT5. Dit verschil kan worden gerelateerd aan verschillen in de schade veroorzaakt door de twee reinigingsmiddelen in RT, waardoor CT8 behandeling mag hoger biofilm herkolonisatie op kamertemperatuur evaluatieperiode.
Volgens de PAFE en de resultaten verkregen met de CLSM afbeelding biofilms behandeld de 1: 5 groep toonde grotere schade dan de 1: 8 aan. Basale lagen van de biofilms behandeld met 1: 5 verdunning lijkt een grotere gevoeligheid bij ICT tonen. Dit komt omdat de 1,5 verdunning behandeling resulteerde in een lagere biofilm bio-volume en gemiddelde dikte bij kamertemperatuur. Bovendien heeft de 1: 8 verdunning leverde behandeling grote invloed biofilms, waardoor hun uitgebreid herkolonisatie na 48 uur Ondernemingen De resultaten van deze studie tonen aan dat citroenzuur gebit reinigingsmiddel is effectief in het verminderen van C. albicans
cellevensvatbaarheid in. een volwassen biofilm onmiddellijk na behandelingen. Echter, deze reinigingsoplossing niet volledig verwijderen van de biofilm en verhindert niet dat de herkolonisatie na 48 uur. Daarom is deze studie geeft belangrijke bevindingen ten aanzien van de anti-biofilm effect van citroenzuur prothese reinigingsmiddel. Ondernemingen De resultaten van deze studie moet worden geïnterpreteerd als gevolg van de in vitro
aard van de 72 h gevormd biofilm niet volledig overeenkomen met de omgeving van de mondholte. Ook tijdens de eerste 72 uur na aanvankelijke biofilmvorming, gebruikt voor een volwassen biofilm simuleren, zouden er verscheidene microbiële opeenvolgingen in de tijd, die enigszins een beperking van deze studie zijn. Echter, de resultaten leveren belangrijke informatie over de manier waarop de C. albicans
biofilm gedraagt zich met dagelijkse en wekelijkse behandelingen met citroenzuur prothese reinigingsmiddel gebruikt in de klinische praktijk. Nader onderzoek nodig met andere Candida species
in een enkele of gemengde biofilm, die steeds betrokken bij langdurige prothese stomatitis. Ook moet deze biofilms worden gebruikt voor vergelijkingen tussen de lange termijn effectiviteit van dergelijke behandelingen met citroenzuur en een gouden standaardoplossing (natriumhypochloriet), die baat zouden hebben de klinische behandelmethoden.
Conclusie
Binnen de beperkingen van deze studie hebben we vastgesteld dat citroenzuur prothese reinigingsmiddelen verminderde levensvatbaarheid van de cellen, maar kon niet verhinderen dat biofilm herkolonisatie binnen 48 uur.
verklaringen
Dankwoord
De auteurs danken São Paulo State Research Ondersteunende Foundation (Fundação de Amparo een Pesquisa doen Estado de São Paulo) voor de opdracht gegund aan YWC en MMB beurzen (processen 12 /07436-6 en 12 /21011-8)
Electronic aanvullend materiaal
12903_2014_404_MOESM1_ESM.pdf Extra file. 1: regeling van de experimentele opzet uitgevoerd in de huidige studie. (PDF 727 KB) Authors 'originele ingediende dossiers voor afbeeldingen
Hieronder staan de links naar de auteurs oorspronkelijke ingediende dossiers voor afbeeldingen. 'Originele bestand voor figuur 1 12903_2014_404_MOESM3_ESM.tif Authors' 12903_2014_404_MOESM2_ESM.tif Auteurs originele bestand voor figuur 2 Concurrerende belangen Ondernemingen De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende belangen. Bijdragen
Authors '
FF, LRP, WJS, en AADBC bedacht en ontwierp de studie. FF, LRP, en WJS verzamelde de gegevens. YWC en MMB geïnterpreteerd en de gegevens geanalyseerd. FF, YWC, MMB, en LRP opstellers van het manuscript. WJS en AADBC voerde de laatste herziening van het manuscript. Alle auteurs gelezen en goedgekeurd de definitieve versie van dit manuscript.
