Abstract achtergrond
Pathologische veranderingen in periodontale weefsels worden bemiddeld door de interactie tussen micro-organismen en de gastheer immuun-ontstekingsreactie. Hyperglykemie kunnen interfereren met dit proces. Het doel van deze studie was het niveau van 27 inflammatoire moleculen in de creviculaire vloeistof (GCF) patiënten vergelijking met type 2 diabetes, met of zonder chronische periodontitis en chronische periodontitis personen zonder diabetes. Een vermeende correlatie tussen hemoglobineglycaat (HbA1c) en het niveau van de inflammatoire moleculen werd ook onderzocht
Methodes Ondernemingen De onderzoekspopulatie bestond uit een totaal van 108 individuen, gestratificeerd in:. 54 met type 2 diabetes en chronische parodontitis (DM + CP), 30 met chronische periodontitis (CP) en 24 met type 2 diabetes (DM). Deelnemers werden geïnterviewd met behulp van gestructureerde vragenlijst. Parodontale parameters (tandplak, bloeden op indringende en parodontale pocket diepte) werden geregistreerd. GCF de niveaus van de 27 inflammatoire moleculen werden gemeten met multiplex micro-bead immunoassay. Een hemoglobineglycaat (HbA1c) test werd uitgevoerd bij patiënten met diabetes door boronaat affiniteitschromatografie.
Resultaten
Na correctie voor potentiële confounders, de DM + CP groep had hogere niveaus van IL-8 en MIP-1β, en lagere niveaus van TNF-α, IL-4, INF-γ, RANTES en IL-7 in vergelijking met de CP groep. Bovendien DM + CP groep had lagere niveaus van IL-6, IL-7 en G-CSF in vergelijking met de groep DM. De DM groep hadden hogere niveaus van IL-10, VEGF, en G-CSF in vergelijking met de CP groep. De niveaus van MIP-1α en FGF lager bij diabetespatiënten (ongeacht de periodontale status) dan bij chronische periodontitis personen zonder diabetes. Diabetes patiënten (DM + CP en DM) hadden hogere Th-2 /Th-1 ratio ten opzichte van de CP-groep. HbA1c correleerde positief met de pro-inflammatoire cytokines (Pearson correlatiecoëfficiënt = 0,27, p-waarde: 0,02)
Conclusie
Type 2 diabetes en chronische periodontitis zo zelfstandig kunnen beïnvloeden de GCF niveaus van inflammatoire moleculen synergistisch ook.. Type 2 diabetes is geassocieerd met een hoge Th-2 /Th-1-ratio en gemoduleerde de lokale expressie van moleculen die betrokken zijn bij de anti-inflammatoire en genezingsprocessen.
Sleutelwoorden
Diabetes mellitus chronische periodontitis ontsteking creviculaire vloeistof Cytokines Achtergrond
Diabetes mellitus is een heterogene groep van metabole aandoeningen waarbij verhoogde bloedsuikerspiegel leiden tot verstoring van koolhydraten, vetten en eiwitmetabolisme [1]. De meest voorkomende vorm is type 2 diabetes [2]. Diabetes is een groot probleem voor de volksgezondheid met 380 miljoen mensen die lijden aan de ziekte wereldwijd, en ongeveer 80% van de patiënten zijn afkomstig uit lage en midden-inkomens landen [3]. De verwachting is dat Afrika het voortouw zal nemen op het vlak van de grootste evenredige toename van volwassenen met diabetes in 2030 [4]. Prevalentie van diabetes in Soedan, net als in veel andere landen met lage inkomens, wordt oplopend tot epidemische proporties [5]. In 2014, de prevalentie van de ziekte in Soedan was ongeveer 18% [3], die behoort Soedan tussen landen met een hoge prevalentie van diabetes in Afrika en de wereld. Het geeft ook de verandering in levensstijl en het complex beweging van de bevolking.
Chronische hyperglycemie is geassocieerd met onomkeerbare complicaties zoals nefropathie, retinopathie, neuropathie, cardiovasculaire aandoeningen, perifere vasculaire ziekten, vertraagde genezing en periodontale ziekten [6]. Parodontale aandoeningen, met inbegrip van de omkeerbare vorm (gingivitis), zijn zeer grote schaal voorkomen en tot 90% van de volwassenen in de wereld [7]. Chronische parodontitis wordt gekenmerkt door apicale migratie van epitheel bevestiging vergezeld van het verlies van bindweefsel en kaakbot [8]. Deze veranderingen worden veroorzaakt door de interactie tussen pathogenen en de gastheer immune ontstekingsreactie [9]. Hoewel periodontale pathogenen initiatief factor van de hals zijn, [10] weefselvernietiging bij chronische periodontitis is het gevolg van de gastheerrespons op deze pathogenen [11]. Ondernemingen De precieze mechanisme waardoor diabetes beïnvloedt periodontale weefsels niet volledig toegelicht [12]. Een veranderde immuun-ontstekingsreactie op bacteriële pathogenen gesuggereerd [11]. Hyperglycemie kan beïnvloeden parodontale weefsels door verhoging van oxidatieve stress als gevolg van de onbalans tussen reactieve zuurstofspecies en antioxidanten, die uiteindelijk kunnen leiden tot ophoping van Advanced Glycation eindproducten (AGE) [13]. De binding van AGE hun receptoren (RAGE) triggers intracellulaire gebeurtenissen die de productie van pro-ontstekingscytokinen, chemokinen en adhesiemoleculen [14] verbeteren. Hyperglycemie kan worden vastgesteld door meten van de concentratie van geglyceerd hemoglobine (HbA1c), waarbij de gemiddelde glucosespiegels de voorgaande weken 8-12 [15] weerspiegelt.
Eén manier onderzoeken de lokale ontstekingsreactie status van de mondholte door analyse van creviculaire vloeistof (GCF), een niet-invasieve benadering voor het beoordelen van de aanwezigheid of afwezigheid van verscheidene inflammatoire moleculen [16]. GCF een transudate of een inflammatoire exsudaat welke vanuit het gingivale spleet rond de tanden. Het bevat bestanddelen bloedcirculatie, lokale weefsels en vooral gastheer afkomstig inflammatoire moleculen [16, 17].
Meeste studies van GCF inflammatoire moleculen in mensen met diabetes hebben doorgaans uitgegaan van kleine monsters onderworpen en onderzoek een beperkt aantal van inflammatoire moleculen, met twijfelachtige resultaten [12]. Multiplexanalyse van inflammatoire moleculen, waardoor een groot aantal inflammatoire moleculen worden onderzocht op hetzelfde moment zou inzicht in het ontstekingsproces betrokken bij zowel diabetes en parodontale aandoeningen vergemakkelijken.
Het doel van deze studie was om het effect te onderzoeken van Type 2 diabetes op de lokale expressie van inflammatoire moleculen betrokken bij periodontale ontsteking en genezing door vergelijking GCF niveaus van 27 inflammatoire moleculen in patiënten met type 2 diabetes, met of zonder chronische periodontitis, en chronische periodontitis personen zonder diabetes. Een vermeende correlatie tussen HbA1c en de moleculen in het kader van het onderzoek werd ook onderzocht. We testten de hypothese dat type 2 diabetes negatieve invloed heeft op de lokale expressie van de inflammatoire moleculen in onderzoek.
Methods
Studie ontwerp en de deelnemers
In totaal werden 108 personen die deelnamen aan de studie, wat neerkomt op een willekeurig gekozen deelverzameling 461 deelnemers geworven voor een eerdere studie door Mohamed et al. [18]. De proefpersonen werden gestratificeerd in drie groepen: 54 met type 2 diabetes en chronische periodontitis (DM + CP), 30 met chronische periodontitis (CP) en 24 met type 2 diabetes (DM). De deelnemers aan de studie waren 24-70 jaar. Diabetes patiënten werden gerekruteerd uit de Jaber Abol'ez Diabetes Center in Khartoum-Sudan. Diabetes werd gediagnosticeerd door gespecialiseerde artsen in het midden op basis van de criteria van de American Diabetes Association [19]. Volbloed monsters verkregen van patiënten met diabetes werden voor HbA1c geanalyseerd door boronaat affiniteitschromatografie met behulp van een in de handel verkrijgbare kit (LabonaCheck
™ A1c analyzer) [20]. De CP groep werd gerekruteerd uit de out-patiënt tandheelkundige kliniek op het Khartoum Dental Teaching Hospital. Werving van deelnemers aan de studie en de criteria voor de inschrijving zijn eerder beschreven [18]. Kort criteria voor inschrijving waren (i) de diagnose van Type 2 diabetes langer dan één jaar bijwonen van een gespecialiseerde diabetes kliniek -voor patiënten met diabetes-(ii) met ten minste 10 resterende tanden (iii) geen antibioticum, geen steroïde en /of niet-steroïdale anti-inflammatoire geneesmiddelen die worden gebruikt tijdens de laatste 3 weken (iv), niet behandeld met immunosuppressieve chemotherapie, geen stroom acute ziekte, geen professionele parodontale behandeling ontvangen tijdens de laatste 6 maanden en geen doorgaande zwangerschap of borstvoeding. Demografische gegevens werden uit de studie deelnemers verkregen door middel van een gestructureerde vragenlijst. Ondernemingen De studie protocol werd goedgekeurd door het Ministerie van Volksgezondheid in Soedan en het Noorse Research Ethics Committee aan de Universiteit van Bergen (2012/1470 /REK Vest) . De deelnemers aan de studie werden ingeschreven tussen juli en december 2012. Schriftelijke toestemming werd verkregen van elke deelnemer na de doelstellingen van het project, was de stappen in het mondeling klinisch onderzoek en de bemonstering procedures uitgelegd. De deelnemers werden op de hoogte van hun tandheelkundige diagnose en verwezen voor een passende tandheelkundige behandeling kan nodig zijn.
Klinisch parodontale onderzoek
Alle klinische evaluaties, toewijzingen groep en sampling-selectie van de locatie werden uitgevoerd door één enkele, gekalibreerde examinator (HGM). De parodontale onderzoek omvatte alle tanden met uitzondering van de 3 rd kiezen met behulp van een kleurcode parodontale sonde (N22, 2-4-6-8-10-12 mm markeringen), een kleurgecodeerde Nabors furcatie sonde (NAB2, 3 -6-9-12 mm markeringen), curette, spiegel, sonde, pincet en katoen rollen. Het klinisch onderzoek omvatte tandplaque evaluatie met de Silness en Loe Index [21], bloeding na sonderen (BOP), gescoord als aanwezig of afwezig zijn, en pocketdiepte (gemeten vanaf de tandvleesrand met de basis van de periodontale pocket in millimeters) en vier plaatsen op elke tand (mesiale, distale, buccale en linguale). Deelnemers werden gediagnosticeerd met chronische periodontitis als ze ten minste twee plaatsen met bloeden zakken van ≥ 4 mm (niet op dezelfde tand) [22, 23]. Het mondeling examen werd herhaald voor 20 deelnemers willekeurig geselecteerde binnen 2 weken. Intra-onderzoeker betrouwbaarheid werd beoordeeld door Cohen's kappa coëfficiënt [24]. Kappa-waarde (κ) was 0,88 voor chronische parodontitis (ja /nee) GCF bemonstering
GCF monsters werden verzameld met behulp van perio-paper strips, (PERIOPAPER® Gingival Fluid Collection Strips, Oraflow Inc., New York, USA.
). Vier monsters, die elk een kwadrant, werden verzameld van elke deelnemer. De strip werd in de mesiobuccale site van de sulcus /zak van de 1 st mol. Als het missen, de 2 nd kies, 2 nd premolaar of 1 st premolaar werd bemonsterd, respectievelijk. Kwadranten zonder gebitselementen werden uitgesloten van de bemonstering. Na de supra-tandvlees biofilm was verwijderd met een steriele katoen pellets, werden de sites gedroogd en geïsoleerd met katoen rollen. Het papier stroken werden ingebracht 2 mm in de sulcus /zak en links in plaats voor 30 s. Strips die visueel werden beoordeeld als besmet met bloed of speeksel werden weggegooid. De 4 stroken werden direct verzameld in een buis, gelabeld en bewaard in vloeibare stikstof voor verdere analyse.
Eiwitextractie en kwantificering
Voor eiwitextractie, Tween buffer (230 pl) werd aan elk van de buizen met de toegevoegde 4 strips. De buizen werden gedurende 30 minuten geschud en daarna gedurende 10 minuten bij 4 ° C en 1400 rpm. Het geëxtraheerde eiwit werd gekwantificeerd onder toepassing van een commercieel verkrijgbare kit en de instructies van de fabrikant (Pierce ™ BCA Protein Assay Kit, Thermo Scientific, Rockford, USA). De absorptie werd gemeten bij 560 nm op een plaatlezer (BMG Fluostar OPTIMA- Labtech, Duitsland). Totaal eiwit per monster (4 strips) werd berekend in microgram (ug).
Analyse en groepering van inflammatoire moleculen
Naar aanleiding van eiwit-extractie, GCF monsters (20 pl elk) werden verwerkt door multiplex immunoassay met fluorescerende geverfd microbolletjes geconjugeerd met monoklonaal antilichaam specifiek voor 27 inflammatoire moleculen (Bio-Plex Human Cytokine Assay, Bio-Rad Inc., Hercules, CA, USA) [25]. De volgende moleculen onderzocht: IL-1β, IL-1ra, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, Eotaxine, basische fibroblastgroeifactor
(FGF), granulocyt kolonie stimulerende factor
(G-CSF), granulocyt-monocyt koloniestimulerende factor
(GM CSF), interferon-γ
(INF-γ), Interferon-induceerbare proteïne 10
