Abstracte achtergrond
probiotische suppletie kan mutans streptococcen (MS) nummers te verminderen. Een van de voorgestelde mechanismen immunomodulatie. Speeksel humaan neutrofiel peptide 1-3 (HNP1-3) niveaus zijn eerder aangetoond dat hoger cariësvrije dan in cariës gevoelige kinderen, suggereert hun preventieve rol tegen cariës. Ons doel was om speeksel HNP1-3 niveaus tussen een interventiegroep met probiotica en een controlegroep te vergelijken.
Methods
Een gerandomiseerd dubbelblind klinisch onderzoek uitgevoerd. Zestig schoolkinderen waren even toegewezen aan ofwel een interventie of controlegroep. Het gebruik van een probiotische stam Lactobacillus paracasei
SD1, blijkt MS nummers vrijwilligers verminderen. In ongestimuleerde speeksel werden HNP1-3 niveaus bepaald onder toepassing van ELISA, en MS en lactobacilli tellingen werden geanalyseerd door kolonies te tellen bij aanvang (T0) en 3 (T3), 6 (T6) en 12 maanden (T12). Het Internationaal cariës Detection and Assessment systeem werd gebruikt om cariës-status te beoordelen.
Resultaten
In de interventiegroep, speeksel HNP1-3 niveaus waren significant hoger dan die in de controlegroep bij T3 en T6 (p
& lt 0,001), terwijl MS tellingen aanzienlijk werden verlaagd (p Restaurant & lt; 0,01). In de interventiegroep, werden positieve en negatieve correlaties gevonden tussen HNP1-3 niveaus en lactobacillen graven en tussen MS en lactobacillen telt, respectievelijk. Echter was er geen significante correlatie tussen verhoogde en verlaagde niveaus HNP1-3 MS nummers. De cariës verhogen van de put en spleet oppervlak, maar niet voor de gladde oppervlakken, is aanzienlijk gedaald in de interventiegroep vergeleken met de controlegroep (p
= 0,01).
Conclusies
Probiotica kan tijdelijk verbeteren speekselklieren HNP1-3 niveaus; . Maar hun actie om nieuwe put en spleet cariës te verminderen gaat waarschijnlijk microbiële interacties
Trial registratie & TCTR20130904001. (Registratie datum: 4 september 2013)
Trefwoorden
Alpha-defensines Cariës mutans streptococcen Probiotica speeksel Electronic aanvullend materiaal
De online versie van dit artikel (doi:. 10 1186 /s12903-015-0003-0) bevat aanvullend materiaal, dat beschikbaar is voor geautoriseerde gebruikers is achtergrond
Dental cariës. is een van de meest voorkomende ziekten bij zowel kinderen als volwassenen wereldwijd [1]. Echter, het succes van alle cariës preventieve programma werd belemmerd door de multifactoriële aard. De ziekte is het gevolg van demineralisatie veroorzaakt door de interactie van cariogene bacteriën, een dieet rijk aan fermenteerbare koolhydraten en gastheercellen componenten, zoals tanden en speeksel eigenschappen [2]. Hoewel veel soorten bacteriën een rol in het cariësproces [3] kan spelen, hebben mutans streptokokken (MS) beschouwd belangrijke pathogene organismen uit de vroege cariës [4]. De belangrijkste virulentie eigenschappen van MS zijn acidogenicity, zuur tolerantie, de vorming van biofilm en tand hechting [5]. Sterke associatie tussen MS hoeveelheden en de pathogenese van tandcariës blijkt uit verschillende eerdere studies, beoordeeld in [6].
Probiotic toediening wordt beschouwd als een mogelijke strategie voor het verbeteren of handhaven van mondhygiëne. Volgens de World Health Organization (WHO), probiotica zijn 'levende micro-organismen die, indien ze in voldoende hoeveelheden worden opgenomen, een positief gezondheidseffect hebben op de gastheer "[7]. Verschillende mechanismen zijn voorgesteld voor de probiotische werking, inclusief de productie van antimicrobiële stoffen, concurrentie met pathogenen door het voorkomen van cellulaire adhesie en invasie, en modulatie van lokale en systemische immuunfunctie [8-11]. In een recente systematische review [12], hebben verschillende klinische onderzoeken van de capaciteit van probiotische suppletie aangetoond dat MS tellingen te verminderen, maar de afnemende effect is variabel en korte levensduur. Bovendien, slechts zeer weinig studies tot op heden onderzochte hoeveelheden lactobacillen (LB) en het voorkomen van nieuwe cariës voorkomen door probiotische supplementen.
Hoewel LB, gewoonlijk als probiotica, zijn geassocieerd met cariës progressie [13], een recente studie is gebleken dat alleen een bepaalde soort, bijv
, Lactobacillus salivarius
, is gerelateerd aan de ontwikkeling van cariës door zijn vermogen om hoge niveaus van zuren [14] produceren. In tegenstelling tot deze cariogene bacteriën,
Lactobacillus paracasei geïsoleerd uit cariësvrije onderwerpen bezit het vermogen om de groei MS [15,16] te onderdrukken. In deze studie werd Lactobacillus paracasei
SD1 geïntroduceerd als een probioticum en gebruikt in de mondholte vanwege de verscheidene eerder aangetoond eigenschappen, waaronder remming van groei MS minder zuurproductie dan andere LB en goede hechting op orale epitheel cellen [17].
Menselijke neutrofielen peptiden 1-3 (HNP1-3) zijn kleine kationische antimicrobiële peptiden die de eerste lijn van afweer bieden tegen een breed spectrum van micro-organismen [18]. HNP1-3 uitgedrukt in ductale epitheliale cellen van submandibulaire speekselklier en uitgescheiden in speeksel [19]. Ze worden ook door neutrofielen en afgegeven aan creviculaire vloeistof [20]. De preventieve rol van HNP1-3 tegen cariës is gesuggereerd door de aanzienlijk hogere speeksel HNP1-3 niveaus in cariës-vrij kinderen dan bij degenen die met cariës aangetoond door Tao et al. [19]. Aangezien een van de probiotische mechanismen voorgesteld betrokken te zijn bij gastheer immuniteit, we derhalve verondersteld dat probiotische supplementen kan helpen voorkomen cariës door vergroting van de lokale host immuniteit via verhoogde productie van speeksel HNP1-3. Het doel van deze studie was om de effecten van probiotische interventie speeksel HNP1-3 niveaus, MS tellingen en LB tellingen onderzoeken en de correlaties tussen de host en microbiële parameters bepalen. Verder zijn er nieuwe gevallen van cariës voor de tweede blijvende molaren tijdens een 12 maanden durende klinische studie werden beoordeeld en vergeleken tussen de controle en interventie groepen.
Methoden
Overzicht van onderzoeksopzet Inloggen Deze studie werd ontworpen als een gerandomiseerd, dubbelblind en placebo-gecontroleerde methode met twee parallelle groepen. De studie protocol werd goedgekeurd door de Human Experimentation commissies van de faculteiten der Tandheelkunde, Chiang Mai University en Prince of Songkla University, Thailand. Geïnformeerde toestemming is verkregen van de ouders of verzorgers van elke deelnemer voor de aanvang van deze studie. Zestig aanmerking komen en gezonde vrijwilligers uit 246 kinderen kregen ook voor een van de twee groepen, de controle en probiotische groepen op eenvoudige randomisatieprocedure via loting (figuur 1). De criteria voor opname en uitsluiting zijn aangegeven in Deelnemers en in figuur 1. Voor de dubbelblinde methode werd de code gehouden door een onafhankelijke monitor. Deze code werd niet onthuld totdat alle gegevens waren geanalyseerd. Geen van de onderzoekers, de artsen, de deelnemers, de docenten, of de statisticus wist of de kinderen kregen controle of tussenkomst melk gedurende het gehele verloop van deze studie. De proef werd geregistreerd bij de http: //www. Clinicaltrials in th /, een van de belangrijkste WHO Registry Networks, Clinical Trials identifier TCTR20130904001... De gehele experimentele periode duurde 12 maanden, en de uitkomst meting van deze studie bestond uit vier parameters: speeksel HNP1-3, MS en LB niveaus op vier verschillende tijdstippen: T0 (baseline), T3 (drie maanden van de interventie), T6 (zes maanden interventie) en T12 (zes maanden na beëindiging van de interventie) en de aanwezigheid van carieuze lesies of gedemineraliseerd op T0 en T12 (figuur 1). De priori
steekproefgrootte berekening werd uitgevoerd met een focus op de gemiddelde verschillen van MS telt tussen twee onafhankelijke groepen met behulp van G Vermogen software [21], met het effect size gelijk is aan 0,8 bij 5% statistische significantie niveau en 90% vermogen van de test . De berekening leverde liefst 28 deelnemers in elke groep. Figuur 1 Een consort stroomdiagram dat het aantal deelnemers aan de controle en het probiotisch groepen aan het begin en de voltooiing van het proces. Out van 246 kinderen die deelnamen aan deze studie, 60 deelnemers bleef in aanmerking te wijten aan de criteria voor opname en uitsluiting. Zestig deelnemers werden eveneens toegewezen aan hetzij de controle of probiotische groeperen op eenvoudige randomisatie in de werkwijzen beschreven. Deelnemers ontvangen melkpoeder met of zonder probiotica tijdens de eerste zes maanden interventie, en speekselmonsters werden verzameld voor analyse van HNP1-3 niveaus, MS en LB telt op vier verschillende tijdstippen: T0, T3, T6 en T12. Mondeling examen voor de evaluatie van ICDAS scores werd uitgevoerd bij T0 en T12.
Bereiding van melkpoeder, aangevuld met probiotica
probiotische stam, Lactobacillus paracasei
SD1, werd geïsoleerd uit cariës-vrije vrijwilligers en is eerder aangetoond de maximale remmende effect op Streptococcus mutans in vitro
[17] uitoefenen. De bacteriële stam werd geïdentificeerd door PCR-RFLP van het 16S ribosomale RNA gen en natrium dodecyl-polyacrylamidegelelektroforese [22]. De probiotische interventie is vervaardigd in de vorm van melkpoeder de sproeidroogtechniek. De kweekomstandigheden en de sproeidrogingstechniek werden uitgevoerd zoals eerder beschreven [23]. Kort samengevat, een cultuur van Lactobacillus paracasei
SD1 werd geïnoculeerd in een mengsel van 1% probiotica en een 3-liter hoeveelheid warmtebehandeling (50 ° C gedurende 30 min) en 20% gereconstitueerde magere melk, en vervolgens gesproeidroogd met een sproeidroger (model B191 Buchi mini sproeidroger; Flawil, Zwitserland). Het eindproduct was geelachtig wit poeder met een vochtgehalte van 3,44 ± 0,85% en levensvatbare tellingen van 7,5 ± 0.20x10
8 cfu /g, die bij 4 ° C werd bewaard. De levensvatbaarheid van Lactobacillus paracasei
SD1 in de geënte melkpoeder was eerder in een zes maanden durende studie onderzocht door het onderzoeken van zijn groei in drievoud Man Rogosa en Sharpe (MRS) pour platen onder anaerobe incubatie gedurende drie dagen bij 37 ° C [23 ]. Er werd aangetoond dat de maximale overleving van Lactobacillus paracasei
SD1 in het magere melkpoeder was 99% wanneer de melkpoeder bij 4 ° C gedurende zes maanden [23] werd opgeslagen. De overlevingskans sterk af indien het melkpoeder bij 25 ° C [23] werd opgeslagen. De melkpoeder algemene uiterlijk zowel probiotische en controlegroepen leek identiek, met uitzondering van de afwezigheid van de probiotische stam in de controlegroep, en is verpakt in dezelfde doorzichtige plastic zakken voorzien van een naam van de deelnemer. De verpakking en het leveren van stappen werden uitgevoerd door een onderzoek assistent die werd verblind door elke stap van bemonstering en analyse
Deelnemers Ondernemingen De inclusiecriteria waren:. (I) een goede mondgezondheid met cariës in twee of minder tanden (ii) aanwezigheid van vier tweede molaren in de mond (iii) afwezigheid van onbehandelde actieve diepe cariës (iv) afwezigheid van parodontitis (v) niet-rokers en (vi) dagelijks tanden poetsen gewoonte gebruik van fluoride tandpasta. De uitsluitingscriteria waren tieners met systemische ziekten, die met systemische antibiotica binnen zes weken, routine consumptie van probiotica of xylitol, allergie voor koemelk, lactose-intolerantie en ernstige voedselallergie. Vóór het begin van de klinische studie werden deelnemers geïnformeerd elk produkt dat probiotica, zoals yoghurt niet te consumeren, drinkyoghurt, kaas, enz., Gedurende de volledige duur van deze studie. De deelnemers in beide groepen werden geïnstrueerd om 5 g melkpoeder mengen in 50 ml water en één keer per dag te drinken, behalve op de dagen van speeksel collectie, gedurende zes maanden onder toezicht van instructeurs. Op de vakantie of het weekend, alle kinderen waren geïnformeerd om hun melk thuis te drinken en de lege plastic zakken terug. De overeenstemming werd gecontroleerd door hun docenten, die elke dag in een logboek vol met informatie over het schoolbezoek van de kinderen en over de vraag of de kinderen had gedronken de melk. Het was duidelijk dat geen kinderen die deelnemen aan deze studie waren afwezig in de klassen door ziekteverzuim tijdens de eerste zes maanden interventie. Alle deelnemers werden gevraagd om eventuele bijwerkingen direct te melden.
Analyses van speeksel HNP1-3 niveaus
Een 2-ml hoeveelheid gestimuleerde hele speeksel werd verzameld en gelijk verdeeld in twee porties, één voor de analyse van HNP1-3 niveaus en de andere voor de analyse van microbiologische niveaus. De eerste portie werd met Nonidet P-40 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) toegevoegd aan de uiteindelijke concentratie van 0,1% (v /v), gecentrifugeerd bij 15.000 rpm bij 4 ° C gedurende 10 minuten [19], en de heldere supernatant werd verzameld en ingevroren voor verdere analyse van HNP1-3 niveaus opgeslagen door een HNP1-3 ELISA-kit (HyCult Biotechnology, Uden, Nederland) volgens de instructies van de fabrikant. Kortom, verdunde speeksel (1: 200) werden op een vooraf beklede plaat in drievoud met de specifiek primair antilichaam HNP1-3 en gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geroerd. Voor een negatieve controle werd verdunningsbuffer zonder toevoeging van de speekselmonsters de vooraf beklede platen toegevoegd. Na vier keer wassen met wasbuffer, werd elk putje geïncubeerd met het gebiotinyleerde tracer antilichaam gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geroerd. Vervolgens werd de streptavidine-peroxidase conjugaat toegevoegd en gedurende 1 uur. Daarna, 3,3 ', 5,5'-tetramethylbenzidine, een chromogeen substraat toegevoegd gedurende 20 min en de reactie werd vervolgens gestopt door toevoeging van 2% oxaalzuur. De concentraties van HNP1-3 in speekselmonsters werden berekend uit een standaardcurve opgesteld door verschillende bekende concentraties van een HNP1-3 standaard, als de ELISA systeembesturing. De concentraties van speeksel HNP1-3 werden vervolgens genormaliseerd door hun totale eiwitgehalte onder toepassing van een BCA proteïne assay (Pierce Inc., Rockford, IL) volgens de instructies van de fabrikant.
Microbiologische tests
de hoeveelheid speeksel MS en LB werden beoordeeld door een typische kolonie telmethode op T0, T3, T6 en T12. De tweede portie van speekselmonsters werd tienvoudig verdund van 1:10 tot 1: 10.000. Elke verdunning (10 pl) werd neergezet op de selectieve agar platen, Mitis Salivarius Bacitracin (MSB) agar voor MS (Difco Laboratories, Detroit, MI) en MRS agar voor LB (Difco Laboratories). De omstandigheden voor incubatie werden anaërobe, 10% H 2, 10% CO 2 en 80% N 2 bij 37 ° C gedurende 48 uur. De kolonie telling werd uitgevoerd onder een microscoop in tweevoud.
International cariësdetectie en Assessment System (ICDAS)
Aan het begin en het einde van dit onderzoek (T0 en T12), werden alle deelnemers onderzocht op de mondgezondheid en tandheelkundige cariës-status door twee ervaren tandartsen (SP en ST) met de Cohen's kappa waarden 0,85 en 0,82 voor de intra- en inter-onderzoeker kalibraties, respectievelijk. Het onderzoek werd uitgevoerd met behulp van een mond spiegel en een air spuit onder een operationele licht. De cariës gegevens voor elk tandoppervlak, met inbegrip van occlusale (put en spleet) en glad oppervlak (buccale, linguale, mesiale en distale) cariës, werden geregistreerd volgens de criteria van het Internationaal Cariës Detection and Assessment System (ICDAS) [24]. De ICDAS codes bestaan uit: 0 = geluid, 1 = eerste visuele verandering in email, 2 = duidelijke visuele verandering in email, 3 = gelokaliseerde email afbraak, 4 = onderliggende dentine schaduw, 5 = duidelijke holte met zichtbare dentine, en 6 = uitgebreid holte binnen zichtbare dentine. Cariësrisico beoordeling in deze studie werd bepaald volgens de gewijzigde criteria eerder beschreven door Nase en medewerkers [25], die zowel cariës klinische status en MS aangevraagde hoeveelheden als volgt. De "hoog risico" deelnemers werden gedefinieerd als het hebben van zowel een ICDAS score & gt; 0 en MS niveaus ≥10 5 kve /ml, terwijl de "matig risico" enen had ofwel een ICDAS score & gt; 0 of MS niveaus ≥10 5 kve /ml en de 'low risk "die had een ICDAS score = 0 en MS niveau & lt; 10 5 kve /ml
statistische analyses
de Mann-Whitney U
. test werd gebruikt om tussen groepen verschillen in speeksel HNP1-3 niveaus analyseren. Verschillen in speeksel HNP1-3 niveaus bij vier verschillende perioden in elke groep werden geanalyseerd met de Kruskal-Wallis test, gevolgd door Mann-Whitney U Electronics Test. Het aantal kolonie telt voor MS en dat voor LB werden gepresenteerd als log kve /ml en geanalyseerd door de onafhankelijke steekproef t
-test. Correlaties tussen elk paar van de gegevens van HNP1-3 niveaus, MS en LB tellingen in elke groep werden getest door de test Pearson correlatie. Regressieanalyse uitgevoerd voor de significante correlatie gegevens. Een odds ratio (OR) voor cariës increment werd berekend door Kruistabel. Het softwarepakket gebruikte was het Statistical Package for Social Sciences (SPSS versie 17.0 Inc., Chicago, IL), en de verschillen werden significant beschouwd als p
-waarden waren minder dan 0,05. . Al deze statistische methoden werden uitgevoerd door een biostatistician (TS)
Resultaten
Demografische gegevens
Een totaal van 60 deelnemers (leeftijd varieert 13-15 jaar; n
= 26 voor mannen en 34 voor vrouwtjes) voltooide deze 12 maanden durende studie (figuur 1). Geen nadelige bijwerkingen van probiotica of melkpoeder instroom in dit cohort werden gemeld. De naleving van de dagelijkse consumptie van melkpoeder in beide groepen werd nauwlettend gevolgd onder begeleiding van leerkrachten en goed gecontroleerd gedurende de eerste zes maanden interventieperiode. De beoordeling voor cariës risico dat is gebleken dat de percentages van de deelnemers ingedeeld in de "hoog risico", de "matig risico" en de "low risk" groepen waren 50, 31,7 en 18,3, respectievelijk. Ofschoon het gerandomiseerde procedure werd uitgevoerd om alle 60 aanmerking deelnemers de bestrijding of probiotische groep toewijzen werd samenvallend dat de percentages van hoge, matige en lage cariësrisico in de controle versus de probiotische groep bijna gelijk als volgt: 50,0 versus 50,0, 33,3 versus 30,0 en 16,7 versus 20,0, respectievelijk.
verhoogde speeksel HNP1-3 niveaus in de probiotische groep
mediane speeksel HNP1-3 niveaus, uitgedrukt in de eenheid ug /mg totale eiwitten, in het probiotische groep waren significant groter dan die in de controlegroep bij T3 (1,0250 ten opzichte van 0,5145 ug /mg; p Restaurant & lt; 0,001) en T6 (1,1470 ten opzichte van 0,5415 ug /mg; p Restaurant & lt; 0,001), maar niet op T0 of T12 (Figuur 2). Wat betreft de kinetiek van speeksel HNP1-3 niveaus in de probiotische groep gedurende de 12 maanden van deze klinische studie werd aangetoond dat de niveaus HNP1-3 tijdelijk verhoogd waren in de zes maanden durende onderzoeksperiode (figuur 2). Met andere woorden, zijn deze niveaus significant verhoogd T3 en T6 (p
& lt; 0,001) en daalde geleidelijk tot T12. Echter, geen significante veranderingen in speeksel HNP1-3 niveaus in de controlegroep op vier tijdstippen (T0, T3, T6 en T12) waargenomen (figuur 2). Figuur 2 Aanzienlijke maar tijdelijke toename van speeksel humaan neutrofiel peptide (HNP) 1-3 niveaus van probiotische suppletie. De y-as van
boxplot grafiek toont speeksel HNP1-3 niveaus genormaliseerd door totale eiwitconcentratie in de eenheid van ug /mg voor de controle (lege dozen) en de probiotische (grijze vakken) groepen uit vier verschillende periodes van speeksel collectie: T0, T3, T6 en T12. * = P
& lt; 0,05; *** = P
& lt; 0.001. De ononderbroken lijnen geven de significante verschillen tussen de twee groepen, terwijl de gestippelde lijnen geven de grote verschillen binnen de probiotica-groep.
Verminderde MS telt in tegenstelling tot LB tellingen steeg met probiotische interventie
De gemiddelde tellingen en de standaard fouten voor speeksel MS en LB op T0, T3, T6 en T12 (log cfu /ml) in de controle- en probiotische groepen worden gedemonstreerd in een lineaire grafiek (figuur 3). Bij aanvang (T0) werd aangetoond dat het gemiddelde speeksel telling LB in de probiotische groep (a doorgetrokken lijn) was niet significant verschillend van die in de controlegroep (gestippelde lijn), met een gemiddeld speeksel MS tellen het probioticum groep was significant hoger dan in de controlegroep (p
& lt; 0,05; figuur 3). Echter, op T3 en T6, een aanzienlijke vermindering van MS telt in de probiotische groep was duidelijk zichtbaar in vergelijking met die in de controlegroep (p = T3
& lt; 0,001 en p = T6
& lt; 0,01), terwijl een aanzienlijke toename van LB tellingen plaats waargenomen (p
& lt; 0,05; figuur 3). In tegenstelling tot de probiotische groep geen significante veranderingen in de gemiddelde tellingen van speeksel MS en LB gevonden in de controlegroep (stippellijnen in figuur 3). Bij T12, de gemiddelde telling voor speeksel MS in de probiotische groep verhoogd en terug bijna de basislijn, terwijl de gemiddelde telling voor speeksel LB in de probiotische groep nog steeds aanzienlijk hoger dan in de controlegroep (p
& lt; 0,01 Figuur 3), wat suggereert het vermogen van LB in de mondholte worden behouden ondanks beëindiging van de probiotische interventie voor zes maanden. Figuur 3 Aanzienlijke maar voorbijgaande vermindering van speeksel mutans streptococcen (MS) telt door probiotische interventie. De lineaire grafiek illustreert betekenen loggen tellingen van MS (open cirkels) en die van lactobacillen (LB, zwarte cirkels) in de eenheid van kve /ml (y
-as) in beide probiotische (vaste lijnen) en controle (stippellijnen ) groepen uit vier verschillende periodes van speeksel collectie (x
-as): T0, T3, T6 en T12. * = P
& lt; 0,05; ** = P
& lt; 0,01; *** = P
& lt; 0.001. Fout balken geven standaardfouten (SE). De waarden van de gemiddelde logwaarde MS en LB tellingen en (SE) worden getoond in de vaste dozen voor de probiotica-groep en in de gestippelde dozen voor de controle groep in elke periode van speeksel collectie.
Aanzienlijke vermindering van de cariës verhogen voor de kuil en spleet oppervlak in de probiotica groep Ondernemingen de percentages van het geluid (ICDAS score = 0) en ondeugdelijke oppervlakken (ICDAS scores = 1-6) van alle vijf de tand oppervlakken, waaronder kuil en spleet, mesiale, distale, buccale, en lingual op T0 en T12 in zowel controle- als probiotische groepen worden weergegeven als gestapelde staven in totaal 100% (Figuur 4A). Het was duidelijk dat de percentages van carieuze lesies in het tweede blijvende molaren in zowel controle- als probiotische groep tijdens deze 12 maanden durende studie in vrijwel alle tandoppervlakken toegenomen en dat de put en spleet cariës in beide groepen was meer voor in ons cohort dan was cariës in de andere vier gladde oppervlakken, zoals mesiale, distale, buccale en linguale (Figuur 4A). Som van de percentages van cariës verhogen voor alle vijf tandoppervlakken, met inbegrip van de put en spleet oppervlak en vier gladde oppervlakken, en om vier gladde oppervlakken in de probiotica-groep ten opzichte van de controlegroep waren 25,5 versus 44,2 en 15,2 versus 21,4, respectievelijk (figuur 4B ). De percentages van cariës verhogen alleen in de put en spleet oppervlak waren 10,3 versus 22,8 (Figuur 4B). Interessant is het percentage nieuwe cariës gebeurtenis voor alle vijf tandoppervlakken (OR = 1,605; 95% CI 1,007-2,557; p
= 0,045) en voor de put en spleet oppervlak (OR = 2,582; 95% CI 1,235-5,400 ; p
= 0,01) significant lager in de probiotische groep dan in de controlegroep, terwijl er geen significant verschil in nieuwe cariës voorkomen tussen twee groepen van vier gladde oppervlakken (OR = 1,506; 95% CI 0.726- 3,126; p
= 0,269). Figuur 4 significante daling van het percentage van cariës verhogen voor de put en spleet oppervlak, maar niet voor de gladde oppervlakken, door probiotische interventie. (A) De 100% gestapelde balken tonen de percentages van het geluid (wit gebied; ICDAS score = 0) en ondeugdelijke (gevulde gebieden; ICDAS scores = 1-6) oppervlakken van alle vijf de tand oppervlakken, waaronder kuil en spleet, mesiale, distale , buccale en linguale, in de controlegroep (bovenste paneel) en de probiotische (onderste paneel) groepen. Opmerking hogere percentages van ondeugdelijke oppervlakken in de put en spleet oppervlak dan in de andere vier oppervlakken. (B) De grafiek toont significante vermindering van de percentages van cariës verhogen in de probiotische groep voor een combinatie van vijf tandoppervlakken en in de put en spleet oppervlak alleen, maar niet voor de gecombineerde vier gladde oppervlakken, zoals mesiale, distale, buccale en linguale oppervlakken. * = P
& lt; 0,05; ** = P = 0,01
.
Ontbreken van correlatie tussen verhoogde HNP1-3 en verminderde aantallen MS
Correlaties tussen elk paar speeksel HNP1-3 niveaus ug /mg totaal eiwit, MS telt en LB tellingen in log kve /ml in zowel controle- als probiotische groepen werden bepaald door de test Pearson correlatie (zie aanvullende bestand 1 voor de gegevens van elke parameter) en bleek dat significante correlatie tussen deze parameters werden alleen gevonden in de probiotica groep, maar niet in de controlegroep (Figuur 5). In het bijzonder werden speeksel HNP1-3 niveaus positief gecorreleerd met LB tellingen (r
= 0,376; p Restaurant & lt; 0,001; figuur 5B) met de vergelijking van de regressieanalyse: y =
0.653x
+ 5,929, waarbij y
is de log LB graaf en x
is het HNP1-3 niveau, terwijl LB tellingen omgekeerd werden geassocieerd met MS tellingen (r
= -0,282; p
= 0,002; Figuur 5F). Er werd echter geen significante correlatie vastgesteld tussen speeksel HNP1-3 niveaus en MS telt in de probiotische groep (Figuur 5D), hetgeen suggereert dat verhoogde niveaus van speeksel HNP1-3 de probiotische interventie worden geassocieerd met een verminderde MS hoeveelheden. Figuur 5 Positieve en negatieve correlaties tussen speeksel humaan neutrofiel peptide (HNP) 1-3 levels en log tellingen van lactobacilli (LB) en tussen log tellingen van mutans streptococcen (MS) en die van LB, respectievelijk in de probiotica-groep. De correlatiecoëfficiënten (r
) en de significantie niveau (p
-waarden) tussen elk paar drie parameters, waaronder HNP1-3 niveaus ug /mg, LB tellingen in log cfu /ml en MS telt log cfu /ml werden bepaald en geïllustreerd voor zowel de controle (A, C en E) en probiotische (B, D en F) groepen. De regressie-analyse kon alleen worden bepaald voor de significante correlatie tussen verhoogde HNP1-3 niveaus en verhoogde LB telt in B, en een regressie lijn werd de vergelijking getrokken: y =
0.653x
+ 5,929; p = 0,003
Discussie
De belangrijkste bevindingen van deze studie bevatten (a) een aanzienlijke maar tijdelijke toename van speeksel HNP1-3 niveaus T3 en T6 in de probiotica-groep.; (B) een aanzienlijke toename van LB telt in tegenstelling tot een voorbijgaande daling MS tellingen tijdens probiotische interventie; (C) positieve en negatieve correlatie gevonden tussen HNP1-3 niveaus en LB telt en tussen LB tellingen en MS telt, respectievelijk in de probiotica groep; en (d) een aanzienlijke vermindering van cariës verhogen voor de put en spleet oppervlak, niet voor de gladde oppervlakken. Onder deze vier belangrijkste bevindingen, de aanzienlijke toename van speeksel HNP1-3 levels door probiotische suppletie tijdens de zes maanden durende interventieperiode is van groot belang, omdat het waarschijnlijk is dat Lactobacillus paracasei
SD1 een immunostimulerend effect kan uitoefenen door verhoogde productie van aangeboren immuuneffectoren vooral HNP1-3 uit ductale epitheelcellen van submandibulaire speekselklier [19], die vervolgens worden uitgescheiden in het speeksel. De mogelijke immunostimulerende effect van Lactobacillus paracasei
SD1 warrants verder onderzoek. Bovendien wordt het aangeboren immuunsysteem activering van Lactobacillus paracasei
SD1 gecorreleerd aan de significante correlatie tussen verhoogde speeksel HNP1-3 niveaus en toegenomen aantallen LB gezien in figuur 5B. Activering van gastheer immuniteit, met name verhoogde productie van secretoire immunoglobuline A (sIgA), is eerder aangetoond dat een van de belangrijkste mechanismen van probiotica in het maagdarmkanaal [26-28] en in de mondholte [29-31] zijn. In deze studie, de reden alleen de speekselklieren onderzoeken HNP1-3 niveaus tijdens probiotische interventie gebaseerd op de waarneming van een eerdere studie die aanzienlijk hogere niveaus in de HNP1-3 speekselmonsters toonden van cariësvrije kinderen dan die uit caries- gevoelige kinderen [19]. Wel moeten de niveaus van speeksel andere immuungerelateerde effector moleculen, vooral andere antimicrobiële peptiden naast HNP1-3, vervolgens bepalen in een toekomstig onderzoek. Opgemerkt wordt dat de niveaus van speeksel HNP1-3 gedetecteerd in ons cohort vergelijkbaar met die gemeten volgens dezelfde ELISA-werkwijze uitgevoerd door Tao en medewerkers [19] was. Interessant, werden de HNP1-3 levels tijdelijk verhoogd tijdens de zes maanden durende interventieperiode en geleidelijk gedaald tot de basisniveaus na beëindiging van de probiotische inname. De tijdelijke inductie van HNP1-3 niveaus was in lijn met de voorbijgaande inductie van sIgA niveaus in het speeksel door probiotische inname [30], wat aangeeft dat de dagelijkse consumptie van probiotica nodig lijkt te hebben voor een duurzame stijging van de gastheer immuunreacties.
Niettemin de verhoogde speeksel HNP1-3 niveaus niet significant gecorreleerd met de verminderde MS telt, maar de LB tellingen werden in plaats omgekeerd gecorreleerd met de MS telt, wat suggereert dat het mechanisme voor probiotische optreden in de mondholte waarschijnlijk de mededinging kan inhouden en /of de interactie tussen twee verschillende micro-organismen zoals eerder getoond door Teanpaisan en Piwat [22] in plaats van verhoogde productie van HNP1-3.
