Abstracte achtergrond
Rapid wondgenezing van orale zacht weefsel kan de kans op infectie en het ongemak van de patiënten te verminderen. Eerdere studies hebben aangetoond dat versterking van angiogenese is een effectieve manier om wondheling versnellen. In deze studie, angiogenese en genezing van wonden palatale verbeteren, dimethyloxalylglycine (DMOG) werd op een rat palatale wondmodel. DMOG is bekend om zuurstof-afhankelijke degradatie van hypoxie induceerbare factor-1 alfa (HIF-1α), wat kan leiden tot opwaartse regulatie van angiogenese markers, begunstiging wondherstel remmen. We hebben ook onderzocht de effecten van DMOG op mobiele migratie en HIF-1α expressie van rat palatinaal (RP) cellen. Verder mRNA en eiwitexpressie van vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF) werden geanalyseerd DMOG RP behandelde cellen.
Methods
Primaire culturen van de rat palatale (RP) cellen werden verkregen van Sprague-Dawley (SD) ratten. Effecten van DMOG op cellevensvatbaarheid en migratie van RP cellen werden geëvalueerd met behulp van een formazan en kweekinsert, respectievelijk. VEGF mRNA werd waargenomen door real-time PCR en VEGF en HIF-1α eiwitten werden gedetecteerd door Western blotting. Voor de dierstudie, excisie wonden, 3 mm in diameter, werden op het middengedeelte van het gehemelte van SD ratten. DMOG met hyaluronzuur zalf werd plaatselijk drie keer toegepast gedurende 1 week, en dan wond sluitingen werden fotografisch en histologisch gekwantificeerd.
Resultaten
DMOG was cytotoxische om RP cellen bij concentraties van meer dan 2 mm en had geen invloed op de celmigratie bij niet-cytotoxische concentraties. mRNA en eiwit expressie van VEGF significant gestimuleerd door DMOG behandeling. Het eiwitgehalte van HIF-1α werd gestabiliseerd RP cellen door DMOG. In de dierstudie groepen behandeld met 1 mg /ml DMOG gestegen met rat palatale wond contracturen.
Conclusies
DMOG snelle wondheling rat palatale mucosa, die waarschijnlijk het gevolg van de angiogene werking van het middel.
Trefwoorden
Dimethyloxalylglycine hypoxia-induceerbare factor 1 alfa vasculaire endotheliale groeifactor palatum Wondgenezing Achtergrond
Oral zachte weefsels worden onvermijdelijk beschadigd tijdens autogene tandvlees enten, parodontale chirurgie, of tandheelkundig implantaat chirurgie. Herstel van zacht weefsel van blessures is afhankelijk van de wond grootte, locatie, toestand van mondhygiëne, en het niveau van immuniteit. Orale toediening of topische toediening van antibiotica wordt aanbevolen als een keuze van orale wondverzorging om bacteriële infectie te voorkomen. Bij grote afmetingen defecten die kan worden veroorzaakt door gingival autogene transplantaten worden verbandmiddelen gebruikt om beschadigde donorplaatsen beschermen en de wondgenezing proces helpen. Beoogde snelle genezing van de wond kan ook de mogelijkheid van besmetting en het ongemak van de patiënten te verminderen. In een eerdere studie, versnelde palatum herstel werd bereikt met een collageen-gelatine scaffold behoud basische fibroblastgroeifactor (bFGF), een krachtige inductor angiogenese [1]. Thymosine β
4 (Tβ 4), een oligopeptide dat kan sekwestreren G-actine monomeren, bevordert ook wondgenezing rat mucosa [2]. Verhoging van de cel migratie en angiogenese wordt waarschijnlijk in wondgenezing te worden betrokken door Tβ 4. Umeki et al. hebben aangetoond dat wondgenezing van mondslijmvlies wordt versneld door leptine, een circulerend anti-obesitas hormoon, via versterking van angiogenese [3]. Deze studies suggereren dat verhoging van angiogenese is een effectieve manier om orale wondheling versnellen.
Angiogenese kan worden gestimuleerd door verschillende groeifactoren zoals fibroblast groeifactor (FGF) [4], vasculaire endotheliale groeifactor (VEFG) [5] , van bloedplaatjes afgeleide groeifactor (PDGF) [6, 7], en transformerende groeifactor β (TGF-β) [8, 9]. Verschillende peptiden zijn ook gemeld angiogenese [10-12] bevorderen. Gezien het belang van angiogenese bij wondheling, is de toepassing van angiogene eiwitten en peptiden wonden wordt naar het herstel van weefselschade orale versnellen wanneer de moleculen aan de daarvoor wondlocaties geleverd. Echter, de stabiliteit en de activiteit van eiwitten en peptiden niet plaats te vinden in orale omgeving waar de temperatuur en pH kunnen worden gewijzigd door eten en drinken. In plaats daarvan kan angiogene kleine moleculen die chemisch stabiel zijn geschikt voor de zware omstandigheden van de mondholte.
Dimethyloxalylglycine (DMOG) met laag molecuulgewicht, een cel-permeabele aspecifieke remmer van prolyl hydroxylasen (PHD) [13 ]. Onder normoxische omstandigheden, is bekend PHD2 specifieke proline residuen in HIF-1α, die vervolgens leidt tot afbraak van HIF-1α de ubiquitineproteasoomroute [14-16] hydroxyleren. Daarom remming van PHD2 door DMOG kan HIF-1α degradatie te voorkomen, waardoor een omgeving die vergelijkbaar is met die in hypoxische cellen. En aantal genen betrokken bij weefselherstel angiogenese zijn opgereguleerd. Een eerdere studie toonde aan dat DMOG verhoogde de productie van VEGF in periodontale fibroblast cellen [17]. Bovendien Botusan et al. aangetoond dat DMOG stabiliseert HIF-1α en verbetert dermale wondgenezing bij diabetische muizen [18]. In deze studie werd het effect van orale DMOG op wondgenezing werd onderzocht in een rattenmodel palatale wondmodel. We hebben ook onderzocht de effecten van DMOG op mobiele migratie en HIF-1α expressie van rat palatinaal (RP) cellen. Verder mRNA en eiwitexpressie van vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF) werden geanalyseerd DMOG RP behandelde cellen.
Methods
Chemische reagentia en celcultuur
celkweekmedium en antibiotica werden gekocht bij WELGENE Inc. ( Daegu, Korea). Foetaal runderserum (FBS) werd aangekocht van Lonza (Basel, Zwitserland), en andere experimentele reagentia werden verkregen bij Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA), tenzij anders vermeld.
RP cellen werden geïsoleerd uit de palatinale weefsels van 5 weken oude mannelijke Sprague-Dawley (SD) ratten. Geïsoleerd palatale weefsels werden gewassen met fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) (pH 7,4), aseptisch gehakt in stukken en vervolgens ondergedompeld in gemodificeerd Eagle's medium van Dulbecco (DMEM) dat 10% FBS en antibiotica (100 U /ml penicilline G en 100 ug /ml streptomycine) bij 37 ° C in een bevochtigde incubator (5% CO 2/95% lucht). Na 20 dagen kweken met medium veranderingen op 3 dagen, werden de cellen verzameld en RP sub-gekweekt onder dezelfde omstandigheden. Passages drie tot vijf werden gebruikt voor deze studie. Hoewel we niet het soort palatale cellen konden worden ontdekt op moleculair niveau morfologische kenmerken van de geïsoleerde cellen onder de microscoop vermelde afzonderlijke dominantie van fibroblast-achtige cellen.
Cytotoxiciteit
RP cellen geïncubeerd tot 80% confluent werden verwijderd en sub-gekweekt bij 0,8 x 10 5 cellen per ml in 96-putjes platen en geïncubeerd bij 37 ° C met 5% CO 2 in lucht gedurende 24 uur, en vervolgens werden de cellen behandeld met DMOG bij verschillende concentraties tussen 0,1 en 10 mM. Na behandeling van 24 uur werden de levensvatbaarheid van de cellen gekwantificeerd met de Cell Counting kit-8 (WST-8) (DOJINDO Laboratories, Kumamoto, Japan). De cellen werden geïncubeerd in 100 pl WST-8 oplossing gedurende 1 uur bij 37 ° C in een bevochtigde atmosfeer (5% CO 2/95% lucht). De absorptie werd gemeten bij een golflengte van 450 nm met behulp van een plaat reader (Sunrise, TECAN, Salzburg, Oostenrijk). De optische dichtheid van de onbehandelde cellen werd aangeduid als 100% en cellevensvatbaarheid van behandelde cellen werd uitgedrukt als het percentage van onbehandelde negatieve controle.
Celmigratie assay
Voor de in vitro
celmigratie assay een cultuur steek (ibidi GmbH, Martinsried, Duitsland) werd gebruikt om een wond in celkweek te creëren. Het kweekinsert werd geplaatst op een kweekschaal en 70 pl RP celsuspensie (5 x 10 5 cellen /ml) werd toegevoegd aan putjes van zowel het inzetstuk. De RP cellen werden geïncubeerd bij 37 ° C gedurende 48 uur en daarna blootgesteld aan DMOG (0, 0,1, 0,5, 1, 2 mM) in kweekmedia die 2% FBS voor de celmigratie analyse. Wondsluiting waargenomen en gemeten met tussenruimten onder een fase contrast microscoop (Olympus, Tokyo, Japan). Celmigratie, het onbedekte gebied waar geen cellen aanwezig is gemeten met behulp ImageJ programma waren, en de verhouding van onbedekte gebied tussen onbehandelde en behandelde groepen
mRNA expressie analyse te kwantificeren werd verkregen. Door real-time PCR Ondernemingen De DMOG effect op de expressie van VEGF mRNA werd onderzocht door real-time PCR (RT-PCR) test. Na behandeling met DMOG op 0, 0,1, 0,5, 1 en 2 mM gedurende 24 uur, werd totaal RNA geïsoleerd met behulp van RNA-extractie reagens (WelPrep Total RNA Isolation Reagent, WELGENE Inc.). Van het totaal RNA, werd cDNA bereid onder toepassing van een cDNA-synthese kit (Power cDNA Synthesis Kit, intron Biotechnology, Sungnam, Korea), en RT-PCR werd uitgevoerd op een ABI PRISM 7500 Sequence Detection System Thermal Cycler (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) met 20 pi reactie volumes met 10 pl SYBR premix Ex Taq (Takara Bio, Otsu, Japan), 0,4 pi ROX Reference Dye II (Takara Bio), cDNA en primers. De primers voor genamplificatie waren als volgt: VEGF sense, 5'-GAGTATATCTTCAAGCCGTCCTGT-3 '; VEGF antisense, 5'-ATCTGCATAGTGACGTTGCTCTC-3 '; GAPDH (glyceraldehyde-3-fosfaatdehydrogenase) sense, 5'-TGTGTCCGTCGTGGATCTGA-3 '; GAPDH antisense, 5'-CCTGCTTCACCACCTTCTTGAT-3 '. De PCR-omstandigheden waren 95 ° C gedurende 30 s, gevolgd door 40 cycli van denaturatie bij 95 ° C gedurende 5 s en gloeien bij 63 ° C (34 s) voor VEGF. Alle reacties werden uitgevoerd in drievoud. Genexpressie werd geëvalueerd op basis van de drempelcyclus (CT-waarde) en genormaliseerd op de expressie van het GAPDH-gen.
Western blotanalyse
Western blot analyse werd uitgevoerd om de eiwit expressie van HIF-1α en VEGF onderzocht in DMOG behandelde palatinale cellen. Na behandeling met DMOG in verschillende concentraties gedurende 24 uur werden de cellen gelyseerd in extractiebuffer die 50 mM Tris base-HCl (pH 7,5), 150 mM NaCl, 0,5% Triton-X 100 en een tablet cocktail van proteaseremmers (1 tablet /10 ml, Roche Applied Science, Mannheim, Duitsland) gedurende 45 minuten op ijs. Extracten die gelijke hoeveelheden eiwit werden op 10% natriumdodecylsulfaat-polyacrylamidegels en overgebracht naar polyvinylideendifluoride membranen. De blots werden geïncubeerd met konijn polyklonale antilichamen tegen VEGF, HIF-1α of GAPDH in PBST (PBS met 0,1% Tween 20) gedurende 1,5 uur, driemaal gewassen met PBST, en vervolgens onderzocht met geit anti-konijn secundaire antilichamen geconjugeerd met mierikswortel peroxidase. De eiwitbanden werden zichtbaar gemaakt met behulp van een chemiluminescentie kit (WEST-ZOL plus Western Blot Detection System, INTRON Biotechnologie). Chemiluminescentie werd gedetecteerd met behulp van de LAS 1000 Plus Lichtende Image Analyzer (Fuji Photo Film, Tokyo, Japan). Alle antilichamen werden verkregen van Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA).
Rat palatinale wondgenezende assay
Na bevestiging van de angiogenese effect van DMOG op RP cellen, het effect van DMOG op wondgenezing van palatinale weefsel was uitgevoerd in een rat palatale wond model. Alle ratten werden gehuisvest in specifieke pathogeen-vrije (SPF) omstandigheden op het dier experimentele centrum van Seoul National University Dental School. Achttien 13 weken oude mannelijke SD-ratten (zes ratten per groep), gewicht 300-350 g, werden gebruikt in deze studie. Alle dierproeven werden goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite (SNU-130123-8-1) van de Seoul National University (Seoul, Korea). Onder algehele anesthesie, werden punch wonden op een centraal gebied van harde gehemelte met een beschikbare 3-mm diameter biopsie pons (Kai Industries Ltd., Gifu, Japan), waardoor een cirkelvormig gebied van bot bloot. Hyaluronzuur (HA) formulering (20 mg /ml) bevattende 0, 0,5 of 1 mg /ml (5,7 mM) DMOG aangebracht op het wondgebied. Na de operatie werden de dieren gevoed met een standaard dieet van pellets en water met enrofloxacine. De middelen werden opnieuw toegepast op dag 2 en 4 onder verdoving om stress te verminderen en de ratten werden gedood op dag 7. Het harde verhemelte werd afgescheiden, en de wond werd waargenomen met een stereoscopische microscoop (Nikon, Tokyo, Japan) en door histologische analyse. Het wondgebied op de microscopische beelden werd berekend met CellSense Dimension 1,6 software (Olympus, Tokyo, Japan). Palatale monsters werden genomen histomorfometrische evaluatie en de monsters werden gekleurd met hematoxyline en eosine (H & E) kleuring. Meer dan tien dia's voor elk monster werden voorbereid, en we kozen voor een sectie die de breedste diameter van de wond tentoongesteld voor histologische analyse. De secties werden onder een lichtmicroscoop (Olympus) onderzocht, en de afstand van de wondranden in elke sectie werd gemeten met een gekalibreerde oculaire micrometer.
Statistische analyse Voor statistische analyse werd elk experiment uitgevoerd in drievoud, tenzij anders vermeld . De gegevens zijn uitgedrukt als het gemiddelde ± standaarddeviatie. Statistische analyses werden bepaald door eenzijdige ANOVA voor in vivo studie en celmigratie assay. Ongepaarde Student's t-test
werd gebruikt voor de andere in vitro
resultaten. Een P
-waarde & lt; 0,05 werd beschouwd als statistisch significant.
Resultaten
Cellevensvatbaarheid en migratie van DMOG behandelde ratten palatinale cellen Belgique Om de effecten van DMOG op cellevensvatbaarheid te onderzoeken werden ratten palatinale cellen blootgesteld aan DMOG gedurende 24 uur. De cytotoxiciteit van DMOG werd aangetoond in concentraties van meer dan 2 mM. Levensvatbaarheid van de cellen werd verminderd tot 60% bij 4 mM, en is vooral beïnvloed bij 8 mM (fig. 1). Celmigratie werd waargenomen in kweekmedium dat 2% FBS naar cel beweeglijkheid verzwakken. Aangezien FBS, onbehandelde palatinale cellen geen beweging tijdens 48 uur tonen (gegevens niet getoond). In 2% FBS medium, een lichte beweging van cellen werd getoond bij 12 uur, en ongeveer de helft van de leegte gebied was met binnengedrongen cellen in 48 uur. Celmigratie gedurende 48 h werd niet beïnvloed door DMOG op niet-cytotoxische concentraties (0-2 mM) (Fig. 2). Figuur 1 Effect van DMOG op de levensvatbaarheid van RP-cellen. RP-cellen werden behandeld met DMOG in concentraties variërend van 0 tot 10 mM gedurende 24 uur. Data en error bars geven ± SD van drie onafhankelijke experimenten. * Toont een statistisch significante (P
& lt; 0,05) verschil tussen controle en behandelde cellen
figuur 2 Celmigratie van DMOG RP behandelde cellen. (A) Representatieve microfoto van een celmigratie analyse. RP-cellen werden behandeld met DMOG in verschillende concentraties in kweekmedium met 2% FBS voor celmigratie assay met 40X vergroting. (B) Kwantitatieve analyse van de cel migratie. Celmigratie werd gekwantificeerd door het berekenen van de verhouding tussen een celvrij en cel bezette gebied binnen de wondruimte. Geen statistisch significante verschillen voren onder groepen op hetzelfde tijdstip (P
& lt; 0,05)
mRNA en proteïne expressie van het VEGF-gen en HIF-1α eiwitniveaus in DMOG behandelde cellen
mRNA en eiwit expressie van VEGF werd gekwantificeerd om de effecten van DMOG angiogenese op moleculair niveau te onderzoeken. Zoals getoond in Fig. 3A, DMOG verhoogde genexpressie van VEGF dosis afhankelijke cellen in RP. Behandeling met DMOG op 0,5 mM werd een toename van de hoeveelheid VEGF mRNA die aanzienlijk hoger is dan die van de controlegroep en 2 mM DMOG veroorzaakte een 2,3-voudige toename van mRNA-niveaus (Fig. 3A). Het eiwit expressie van VEGF werd ook opwaarts gereguleerd door DMOG bij concentraties hoger dan 0,5 mM. In tegenstelling tot de dosisafhankelijke patroon van mRNA-expressie in DMOG behandelde cellen, een 3,4-voudig hoger eiwitgehalte werd op DMOG concentraties tussen 0,5 en 2 mM (Fig. 3B). Figuur 3 mRNA expressie van het VEGF-gen en eiwit expressie van VEGF en HIF-1α in DMOG-behandelde cellen. RP-cellen werden behandeld met DMOG in concentraties variërend van 0 tot 2 mM gedurende 24 uur. Data en error bars geven ± SD van drie onafhankelijke experimenten. * Toont mRNA (A) en eiwit (B) expressieniveaus die aanzienlijk verschillen van die van onbehandelde controlecellen (P
& lt; 0,05) zijn Ondernemingen De stabiliteit van HIF-1α eiwit in RP-cellen werd ook beïnvloed door DMOG . Grotere hoeveelheden HIF-1α eiwit werden gedetecteerd in cellen behandeld met DMOG zelfs bij 0,1 mM die geen verandering in het eiwitniveau van VEGF (Fig. 3B) veroorzaakten. Een 2,6-voudige verhoging van HIF-1α eiwitniveaus werd aangetoond in cellen die waren behandeld met 0,5 mM DMOG. Geen verdere significante toename eiwitniveaus krijgt bij hogere concentraties, wat aangeeft dat 0,5 mM DMOG is voldoende om de totale hoeveelheid HIF-1α eiwit stabiliseren cellen. Ondernemingen De effecten van DMOG op palatale wondgenezing bij ratten
in een rattenmodel palatale wondmodel werd DMOG toegepast bij twee concentraties: 0,5 en 1 mg /ml. De DMOG behandelde groep geen symptomen van fysiologische afwijkingen laten zien tijdens de experimentele periode. Zoals getoond in Fig. 4A, de wond was niet volledig epithelized 1 week, en is gemakkelijk te onderscheiden van onbeschadigde intact weefsel dat lichtroze van kleur was. De gemiddelde oppervlakte van het wondoppervlak in de controlegroep was 2,4 mm 2. In de testgroep behandeld met DMOG bij 1 mg /ml, het wondgebied werd verminderd tot 1,8 mm 2, wat bescheiden maar statistisch significante daling. Bij 0,5 mg /ml, DMOG had geen invloed wondsluiting. Figuur 4 Effecten van DMOG op genezing van palatale wonden. (A) Stereoscopische microscopen afbeeldingen palatale wonden 1 week na de operatie. DMOG werd plaatselijk aangebracht op testgroepen (b1
-b6 Twitter: 0,5 mg /ml, c1
C6 Twitter: 1 mg /ml), en het voertuig (20 mg /ml HA) werd toegepast om groepen te bedienen (a1
-a6
) (Schaal bar: 1 mm). (B) wond berekend op basis van de stereoscopische microscoop beelden. * Geeft een significant verschil in de palatale wond vergeleken met die van de onbehandelde controlegroepen (P
& lt; 0,05) Belgique Om de resultaten die in Fig bevestigen. 4A, de maximale afstand van de unepithelized regio (afstand van de wond marge) werd gemeten in histologische secties van de wond. De afstand was lager bij ratten die werden behandeld met 1 mg /ml DMOG, terwijl er geen statistisch significant verschil in afstand van de wondrand tussen controle en 0,5 mg /ml DMOG-behandelde groep (fig. 5). Daarom DMOG duidelijk versneld palatale wondgenezing bij ratten bij een bepaalde concentratie. Figuur 5 Histologische observatie. (A) Vertegenwoordiger hematoxyline en eosine (H & E) kleuring foto's (een extra's: hoornlaag, b Twitter: epitheel, c Twitter: bindweefsel, d Twitter: maxillae) (Schaal bar: 500 pm). (B) gemiddelde waarden van de maximale palatale wond breedte berekend uit de HE-gekleurde coupes. * Geeft een significant verschil in palatinale wond breedte van DMOG-behandelde groepen vergeleken met die van de onbehandelde controlegroepen (P
& lt; 0,05)
Discussie
HIF prolyl hydroxylase inhibitoren zijn op zoek naar een nieuw geneesmiddel voor de behandeling van bloedarmoede, nierziekten en hartfalen [19, 20]. Bevordering van angiogenese is een gerichte therapeutische effect van de nieuwe ontwikkeling van geneesmiddelen, omdat angiogenese is een onvermijdelijk noodzakelijke stap weefselregeneratie of wondheling.
We observeerden het effect van DMOG, een HIF-1α prolyl hydroxylase inhibitor, op wondgenezing van rat palatum. Voor in vitro studies
, cytotoxiciteit en het vermogen om VEGF en HIF-1α in cellen afkomstig van ratten palatale weefsels reguleren onderzocht. De cytotoxiciteit van DMOG tegen rat palatinale cellen zich bij relatief hogere concentraties (fig. 1). Ophoping van HIF-1α eiwit waarschijnlijk niet een directe oorzaak van celdood omdat het intracellulaire niveau van HIF-1α reeds bij 0,5 mM was verzadigd en is niet veranderd tot 2,0 mM. Een eerdere studie gemeld celcyclus arrestatie door PHD-remmers [21], die een mogelijke verklaring voor de toxische effecten van DMOG biedt. Aangezien cytotoxiciteit onomstotelijk kunnen weefselherstel belemmeren, dient DMOG concentraties voor in vivo studies zorgvuldig worden gekozen om een wondgenezende effect wordt veroorzaakt. Marchbank et al. aangetoond dat DMOG stimuleert migratie van menselijke maag en colon carcinoomcellen [22]. Echter een afname in één celmigratie waargenomen in hypoxia toestand van bepaalde fibroblastcellen [23]. Daarom is het effect van hypoxie of HIF-1α ophoping op celmigratie is celtype specifiek. De beweeglijkheid van rat palatale cellen in deze studie werd niet bevorderd door DMOG (afb. 2), wat suggereert dat de migratie van fibroblast-achtige palatinale cellen was niet bepalend bij wondgenezing van DMOG behandelde palatinale cellen.
Eerder, is aangetoond dat remmers PHD up-reguleren van de expressie van VEGF in verschillende soorten cellen, waaronder endotheelcellen [24], epitheelcellen [25], gingivale fibroblasten, en periodontale ligamenten [17]. In overeenstemming met de resultaten van deze studies de onderhavige studie bevestigde ook de mogelijkheid van DMOG up-reguleren van de expressie van VEGF (Fig. 3) in ratten palatinale fibroblast-achtige cellen. DMOG ook geïnduceerde stabilisatie van HIF-1α eiwit, en het bereik van effectieve concentraties werd overlapt met uitzondering van 0,1 mm bij die enkel HIF-1α eiwit, maar niet VEGF werd up-gereguleerd. Dit geeft aan dat VEGF niet kan worden geïnduceerd in de afwezigheid van duidelijke toename van de hoeveelheid HIF-1α. Bovendien wordt de stabilisatie van HIF-1α ook bekend glucose transporter 1-en-fosfoglyceraatkinase 1, waarbij de wondgenezing te verbeteren door het verbeteren van de re-epithelialisatie [26] induceren.
Door de vochtige toestand van de mondholte in de dierproef, was het vereist om een voertuig te gebruiken om de resterende periode van een geneesmiddel te verlengen aan het wondgebied. Als een vehikel voor afgifte van DMOG orale mucosa in deze studie werd gebruikt een hyaluronzuur hydrogel door zijn hoge viscositeit en uitstekende biocompatibiliteit; minder cytotoxisch en geen ontstekings- of allergische effecten. De orale omgeving is zeer dynamisch. Voedsel, speeksel en drinkwater kan snel verwijderen van lokaal toegepast hydrogels. In deze studie werd de poreuze structuur van het hyaluronzuur hydrogel niet waargenomen op de HE-gekleurde coupes, wat aangeeft dat hyaluronzuur en opgenomen DMOG waren verwijderd van het wondgebied vóór opoffering op dag 7. Daarom gewassen, was het niet mogelijk om schatten geldige hoeveelheid DMOG voor wondgenezing. In deze studie werd DMOG toegepast bij 0,5 en 1 mg /ml. Een bescheiden maar statistisch significante vermindering in het wondgebied en de afstand trad slechts op bij 1 mg /ml (fig. 4 en 5). Een duurzamer voertuig en verhoogde concentratie van DMOG kon verder te versnellen genezing van de palatale wond. De resultaten van deze studie demonstreerde dat HIF-1α is een krachtige doelwit van wondgenezing mondweefsel.
Conclusies
De expressie van VEGF mRNA in cellen RP was door DMOG. VEGF en HIF-1α eiwitexpressie werden eveneens verhoogd door behandeling met DMOG. Topische toediening van 1 mg /ml DMOG met hyaluronzuur zalf aanzienlijk versneld genezen van wonden palatale bij ratten. Deze resultaten tonen het nut van DMOG voor de promotie van wondgenezing van orale zachte weefsels
Afkortingen
DMEM.
Dulbecco's gemodificeerd Eagle's medium
DMOG:
Dimethyloxalylglycine
HA:
Hyaluronzuur
HIF-1α:
Hypoxie induceerbare factor-1 alfa
PHDs:
Prolyl hydroxylasen
RP:
Rat palatinale
TGF β:
transformerende groeifactor β
VEGF:
vasculaire endotheliale groeifactor
verklaringen
Dankwoord Inloggen Deze studie was ondersteund door een subsidie van de Korea Health Technology R & amp; D-project, het ministerie van Health & amp; Welzijn, de Republiek Korea (HI12C0735).
Concurrerende belangen Ondernemingen De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende belangen.
Auteurs bijdragen
JGZ heeft bijgedragen aan het plannen en ontwerpen van de studie. ZT speelde het grootste deel van het laboratoriumwerk en data-analyse. PHC en SKM namen deel aan de studie bij dieren. Alle auteurs gelezen en goedgekeurd het definitieve manuscript.
