Abstracte achtergrond
De doelstellingen van deze studie waren de immuunlokalisatie van Ezrin en haar relatie met de podoplanin expressie in keratocystic odontogene tumoren te onderzoeken
. materiaal en methoden
De immunohistochemische uitingen van Ezrin en podoplanin door dentogene epitheel werden geëvalueerd in keratocystic odontogene tumoren met behulp van monoklonale antilichamen.
results
Onze resultaten toonden een sterke cytoplasmatische Ezrin en membraneuze podoplanin uitdrukkingen in basale epitheellaag van alle keratocystic odontogene tumoren. De cytoplasmatische en membraneuze ezrine uitdrukkingen werden ook gedetecteerd in suprabasale epitheliale lagen van tumoren. Statistisch significant verschil tussen cellulaire immuunlokalisatie van ezrine en podoplanin odontogene epitheel gevonden door Wilcoxon's test (p & lt; 0,05). Geen correlatie tussen beide eiwitten in keratocystic odontogene tumoren gedetecteerd door Spearman proef.
Conclusies Deze resultaten suggereren dat ezrine podoplanin en kan bijdragen aan de expansieve groei en invasiviteit van lokale keratocystic odontogene tumoren. Bovendien, aangezien beide eiwitten werden tot overexpressie gebracht door dentogene epitheel, hebben hun mogelijke rollen verder worden onderzocht in goedaardige odontogene tumoren.
Sleutelwoorden
Keratocystic dentogene tumor Ezrin podoplanin Electronic aanvullend materiaal
De online versie van dit artikel (doi :. 10 1186 /1472-6831-14-150) bevat aanvullend materiaal, dat beschikbaar is voor geautoriseerde gebruikers is achtergrond
podoplanin uitdrukking is aangetroffen in epitheelcellen van het ontwikkelen tand kiem [1, 2]. en in dentogene epitheel van goedaardige tumoren [3-10]. Ondernemingen De aanwezigheid van podoplanin in menselijke tand kiem weefsels, volwassen tanden en cystic odontogene letsels gesuggereerd dat dit eiwit waarschijnlijk betrokken is bij de mechanismen van celadhesie, epitheliale-mesenchymale transitie en invasie, en expansieve groei van cystische odontogene laesies [5].
Eerdere studies uitgevoerd in ons laboratorium onderzocht de associatie van podoplanin met cellulaire proliferatieve activiteit, bepaald door Ki-67 antilichaam, in ameloblastomas [7] en keratocystic odontogene tumoren [9 ]. We hadden geen statistisch significante correlatie in ameloblastomas vinden, maar deze vereniging werd waargenomen in keratocystic odontogene tumoren. Bovendien hebben zowel podoplanin en Ki-67 uitdrukkingen waren sterker en co-gelokaliseerd keratocystic odontogene tumoren in vergelijking met de orthokeratinized odontogene cysten, indolent laesie. Deze fingings voorgesteld podoplanin positieve cellen in het midden celproliferatie hetgeen een rol voor dit eiwit bij de werkwijze tumorale invasie [9].
Verder Friedrich et al. [8] blijkt dat podoplanin expressiepatroon is gelijk voor keratocyste odontogene tumoren gediagnosticeerd bij sporadische en basocellulairenaevussyndroom en de auteurs versterkte de mogelijke associatie van het eiwit met invasie en recidieven van de tumor.
Recente bevindingen tonen dat podoplanin belangrijk directionele celmigratie rijden epitheel- en tumorcellen [11]. Vervolgens werd het vermogen van podoplanin cytoskelet te verbouwen en vorm filipodia-achtige membraan verlengstuk [12] is voorgesteld als belangrijke factor voor verkeer van odontogene epitheelcellen [6]. Dit podoplanin geïnduceerde celmotiliteit door middel van actine cytoskelet omlegging lijkt afhankelijk van de interactie met de cytoplasmatische ezrine [13], een lid van de ERM (ezrine, radixin, Moesin) eiwitfamilie eiwitten [14, 15] zijn. Ondernemingen De momenteel onderzoek was opgezet om de immuunlokalisatie van Ezrin en de relatie met podoplanin expressie in keratocystic odontogene tumoren te analyseren. Voor zover ons bekend, is dit het eerste verslag van Ezrin immunokleuring in een dentogene tumor.
Methoden
Patiënten en tumormonsters
Alle chirurgische specimens van keratocystic odontogene tumor in deze studie geanalyseerd werden verkregen van het Laboratorium Pathologie, Bauru School voor Tandheelkunde, Universiteit van São Paulo, tussen 2002 en 2010. de inclusiecriteria waren: i) van de patiënten met de diagnose van keratocystic odontogene tumor op basis van de classificatie van de World Health Organization [16], bepaald door de som van de de klinische, radiologische en microscopische gegevens; ii) de beschikbaarheid van de paraffine blok met voldoende en representatieve hoeveelheid odontogene tumor voor microscopische analyse. Het toepassen van de criteria voor opname, werden 18 keratocystic odontogene tumoren geselecteerd voor het onderzoek van podoplanin en Ezrin immunokleuring. Deze studie werd goedgekeurd door de Research Ethics Committee van de Bauru School voor Tandheelkunde, Universiteit van São Paulo (proces # 85612/2012).
Immunohistochemie
formaline gefixeerde 3 urn secties van keratocystic odontogene tumoren werden verkregen van de pathologie archief voor immunohistochemie analyse van de Ezrin en podoplanin uitingen door dentogene epitheel. Na antigen retrieval met behulp van 10 mM citraatbuffer, pH 6,0, in een binnenlandse snelkookpan (model Eterna 4½ L; Nigro, Araraquara, Brazilië) gedurende 4 minuten werd de endogene peroxidase-activiteit geblokkeerd door incubatie in 3% H
2O 2 gedurende 20 minuten. Elke sectie werd overnacht geïncubeerd bij 48 ° C met het primaire monoklonale anti-podoplanin antilichaam (kloon D2-40, code # 3619-1; Dako North America, Inc., Carpinteria, CA, USA), verdunning 1: 200 of anti- ezrine antilichaam (Dako North America, Inc., CA, USA), verdunning 1: 1000, in met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) met runderserumalbumine (. cat # A2153, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) oplossing een niet-specifieke reactie te blokkeren. Vervolgens werd elke sectie geïncubeerd met HRP Advance Link System (cat. # 4067, Dako Noord-Amerika, Carpinteria, CA, USA) gedurende 30 min bij 37 ° C. Beide antilichamen werden gedetecteerd onder toepassing van 3,30-diaminobenzedine tetrahydrochloride (DAB, cat. # D-5637, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). Tumor secties werden tegengekleurd met hematoxyline Mayer's voordat ze uitgedroogd en deksel gleed. Palatine amandelen en darm werden gebruikt als positieve controle voor podoplanin en ezrine respectievelijk. Voor een negatieve controle werd het primaire antilichaam weggelaten in de immunohistochemische kleuring. De Ezrin en podoplanin uitingen door dentogene epitheel van de 18 keratocystic odontogene tumoren werden geëvalueerd in tien microscopische velden digitaal vastgelegd met behulp van een Axiocam camera (Axiocam MR3, Zeiss, Jena, Duitsland) bevestigd aan een lichtmicroscoop en opgenomen door AxioVision software (AxioVision 4.7; Zeiss). Een score voor ezrine en podoplanin immunokleuring door odontogene epitheel tot expressie was gebaseerd op: a) de intensiteit van de immunokleuring in de epitheliale odontogene cellen (0 = afwezig, 1 = zwak, 2 = matig, 3 = sterk en 4 = zeer sterk) en (b) het percentage positieve cellen odontogene (0 = 0% positieve cellen, 1 = & lt; 25% positieve cellen, 2 = 25-50% positieve cellen, 3 = 50-75% positieve cellen en 4 = & gt; 75% positieve cellen). De uiteindelijke immunokleuring score werd bepaald door de som van (a) + (b). Eindscores varieerde van 0 tot 8 (0 = afwezig, 1-4 = zwak, en 5-8 = sterk). Het verschil en de correlatie tussen membraneuze of cytoplasmatische expressie van ezrine en podoplanin uitgedrukt in keratocystic odontogene tumoren werden bepaald door Wilcoxon's test en Spearman correlatiecoëfficiënt, respectievelijk. Het niveau van significantie werd vastgesteld op 5% voor alle tests.
Resultaten
Klinische kenmerken Home Onze steekproef bestond uit zestien patiënten met keratocystic odontogene tumoren (negen van hen waren vrouwen en zeven mannen). leeftijd patiënt varieerde 9-68 jaar (gemiddeld 28 jaar) en ze waren overwegend wit (75%). De meeste tumoren zich op achterste gedeelte van de onderkaak (62,5%), gevolgd door maxilla (25%) en in 3 gevallen werd de lokalisatie niet door de chirurg. Van het totaal van 16 patiënten met keratocystic odontogene tumoren, 4 van hen had Gorlin-Goltz-syndroom en van deze, 2 hadden meerdere letsels, maar in verschillende lokale bevolking en periodes.
Podoplanin expressie door keratocystic odontogene tumoren Ondernemingen De basale laag de normale orale mucosa gepresenteerd positiviteit voor vliezige podoplanin en lymfevaten in het onderliggende bindweefsel, hetgeen de integriteit van de immunohistochemische reactie. De membraneuze en cytoplasmatische expressie van podoplanin werd intensief geconcentreerd op de basale laag van het epitheel in alle keratocystic odontogene tumoren (Tabel 1). De bovenste lagen van epitheel waren negatief voor dit eiwit (figuur 1) en perifere cellen van de dochter van cysten sterk uitgedrukt dit protein.Table 1 Membraneuze en cytoplasmatische podoplanin expressie in 18 keratocystic odontogene tumoren
podoplanin
Membraneuze
Cytoplasmatische
p *
N
%
N
%
Afwezig
0
0
0
0
1,000
Zwakke
0
0
1
5,56
Sterke
18
100
17
94,44
TOTAAL
18
100
18
100
Bauru School voor Tandheelkunde - Universiteit van São Paulo, São Paulo, 2002 tot 2010.
* Wilcoxon-test; ρ = statistische significantie niveau van 0,05.
Figuur 1 Expressie van podoplanin in keratocystic dentogene tumor. Positiviteit beperkt tot de basale laag (IHQ, 400 ×).
Ezrin expressie door keratocystic odontogene tumoren
Ezrin werd sterk uitgedrukt in het cytoplasma membraan van de doornuitsteeksels laag van normale mondslijmvlies. Meeste keratocyste odontogene tumoren epitheelcellen (83,33% van de gevallen) sterk tot expressie cytoplasmatische ezrine (tabel 2). De cytoplasmatische ezrine werd vaak aangetroffen in epitheliale basale laag en hogere membraneuze ezrine positiviteit kon supra-basale lagen van epitheel opgemerkt. De geen of slechts geringe membraneuze ezrine expressie door epitheelcellen werd bij ongeveer 61% van de tumoren. De dentogene epitheelcellen van de dochter van cysten toonde ook cytoplasmatische en membraneuze Ezrin (figuur 2) .table 2 Membraneuze en cytoplasmatische Ezrin expressie in 18 keratocystic odontogene tumoren
Ezrin
Membraneuze
Cytoplasmatische
p *
N
%
N
%
Absent
10
55,56 kopen van 2
11.11
0.007
Zwakke
1
5.56
1
5,56
Strong
7
38.88
15
83.33
TOTAL
18
100
18
100
Bauru School voor Tandheelkunde - Universiteit van São Paulo, São Paulo, 2002 tot 2010. pagina Home Wilcoxon-test; ρ = statistische significantie niveau van 0,05.
Figuur 2 Expressie van Ezrin in keratocystic dentogene tumor. Opmerking cytoplasmatische positiviteit in de basale en supra-basale lagen en membraneuze uitdrukking in de meest oppervlakkige niveau van de odontogene epitheel (IHQ, 400 ×).
Relatie tussen Ezrin en podoplanin uitdrukkingen in keratocystic odontogene tumoren Electronics Test De Wilcoxon werd gebruikt de subcellulaire uitdrukking van Ezrin en podoplanin in goedaardige odontogene tumoren te vergelijken. De verschillen tussen membraneuze ezrine en membraneuze (p = 0,003) en cytoplasmatische (p = 0,003) podoplanin uitdrukkingen waren statistisch significant (Tabel 3). Verder waren er geen statistisch significante verschillen tussen cytoplasmatische en ezrine membraneuze (p = 0,109) en cytoplasmatische (p = 0,201) podoplanin benamingen die llustrated in tabel 3. De Spearman proef vertoonde geen statistisch significante correlatie tussen membraneuze of cytoplasmatische podoplanin en ezrine uitdrukkingen in keratocystic odontogene tumoren (tabel 4) .table 3 Vergelijking tussen membraneuze en cytoplasmatische podoplanin en Ezrin expressie in 18 keratocystic odontogene tumoren
podoplanin
Ezrin
M (%)
C (%)
M (%)
C (%)
M PO
M PO
C PO
C PO
X
X
X
X
M EZ
C EZ
M EZ
C EZ
Afwezig
0
0
55,56
11.11
p = 0,003
p = 0,109
p = 0,003
p = 0,201
zwakke
0
5,56
5,56
5,56
Sterke
100
94,44
38.88
83.33
TOTAAL
100
100
100
100
Bauru School voor Tandheelkunde - Universiteit van São Paulo, São Paulo, 2002 tot 2010.
Wilcoxon-test; ρ = statistische significantie niveau van 0,05. PO: podoplanin; EZ: Ezrin; M: Membraneuze; C:. Cytoplasmisch
Tabel 4 Membraneuze en cytoplasmatische correlatie tussen podoplanin en Ezrin expressie in 18 keratocystic odontogene tumoren
Membraneuze
Cytoplasmatische
podoplanin
podoplanin
Membraneuze Ezrin
r = 0.000
r = -0,293
p = 1,000
p = 0,293
Cytoplasmatische Ezrin
r = 0.000
r = -0,108
p = 1,000
p = 0.670
Bauru School voor Tandheelkunde - Universiteit van São Paulo, São Paulo, 2002 tot 2010.
r = spearmans rangcorrelatiecoëfficiënt; ρ = statistisch significantieniveau van 0,05.
Discussie
De laatste jaren is de belangstelling voor podoplanine expressie in goedaardige odontogene tumoren aanzienlijk toegenomen [3, 4, 6-10, 17]. Er is gesuggereerd dat dit eiwit deelneemt aan het verkeer van odontogene epitheliale cellen door actine cytoskelet omlegging [6, 9]. Hoewel de odontogene celbeweeglijkheid geïnduceerd door podoplanin afhankelijk van de interactie met de geactiveerde ezrine kunnen zijn, de verbinding tussen beide eiwitten niet eerder onderzocht bij odontogene tumoren.
Onze resultaten met betrekking tot de immuunlokalisatie van podoplanine toonde sterke membraneuze en cytoplasmatische uitingen van het eiwit waargenomen hoofdzakelijk in de basale laag van het epitheel odontogene, zelfs in dochter cysten. In normaal mondslijmvlies podoplanin expressie was membraneuze en geconcentreerd in de basale epitheellaag. Onze bevindingen bevestigd die van eerdere auteurs [4, 8-10, 17].
Aangezien Okamoto et al [4] voorgesteld, voor het eerst, een mogelijke rol van de podoplanine tumor invasiviteit van keratocystic odontogene tumoren, verder onderzoeken zijn uitgevoerd om de precieze functie van dit eiwit in de pathogenese en groei van deze tumoren benigne [5, 8-10, 17] begrijpen. Tsuneki et al. [17] vastgesteld dat podoplanin positieve cellen in het cellulaire proliferatieve centrum van keratocystic odontogene tumoren suggereert dat dit eiwit werkt als een van de sleutelregulatoren van de proliferatieve proces van deze tumor. Ook de deelname van podoplanin in de lokale invasie van odontogene tumoren werd versterkt door onze eerdere bevindingen [9]. We hebben de correlatie tussen de podoplanin meningsuiting en het cellulaire proliferatie-index in keratocystic odontogene tumoren [9] aangetoond. Voorts is een interessante studie van Zhang et al [10] blijkt dat keratocystic odontogene tumoren, conservatief behandeld door decompressie, was er een significant verlies of vermindering van podoplanin expressie in de odontogene epitheel. In radiculaire en folicullar cysten, Zustin et al [5] gevonden podoplanin uitdrukking homogener, verspreid tegen cytoplasma en het membraan, in epitheliale basale en parabasale laag. Zoals podoplanin gecorreleerd met andere eiwitten betrokken bij celproliferatie en tumorinvasie [9, 17], kan de downregulatie als gevolg van beperkte activiteit van de odontogene epitheel na de chirurgische benadering [10].
Hoewel de precieze functie van podoplanin in odontogene tumoren wordt slecht begrepen en grotendeels onbekende samenwerking met vorige onderzoek [9] de resultaten van de onderhavige studie genomen en die van andere auteurs [5, 17, 8, 10] een sterke aanwijzing dat dit eiwit is betrokken bij lokale invasie en in de expansieve groei van keratocystic odontogene tumoren, waarschijnlijk orkestreren de odontogene epitheliale cytoskelet activiteit.
een mogelijk mechanisme overweging gegeven podoplanin ezrine bindt en als stroomafwaarts, volgt de fosforylering van GTPase-RhoA [7]. Deze signaleringsroute zou de omlegging van het actine cytoskelet bevorderen en induceren de vorming van filopodia uitsteeksels, bevorderen de cellulaire beweging [13]. Dus, om na te gaan of podoplanin en Ezrin zijn co-gelokaliseerd in keratocystic odontogene tumoren, we de huidige studie zijn ontworpen.
Ezrin, een ERM eiwit familielid, oefent oer-functies met betrekking tot de regulering van cellulaire beweging en de structuur van het transduceren signalen tussen de plasmamembraan en het actine cytoskelet [14]. Ezrin is van essentieel belang voor vele fysiologische cellulaire processen, waaronder de regulering van actine cytoskelet, het onderhoud van de cel vorm, adhesie, de beweeglijkheid en de modulatie van signaaltransductie [14].
In het hoofd en de nek plaveiselcelcarcinoom, werd Ezrin geïdentificeerd als een belangrijke molecule bij tumorprogressie en metastatisch gedrag van neoplastische cellen en is gecorreleerd met een slechte prognose [18-21], net als podoplanin [22]. Echter, om ons beste weten is dit het eerste bewijs dat de immunoexpression van ezrine goedaardige keratocystic odontogene tumoren bevestigd. Ondernemingen De resultaten die hier toonden afwezigheid van membraneuze ezrine in 55,56% van keratocystic odontogene tumoren en, indien aanwezig, dit eiwit werd voornamelijk gezien in het membraan van de niet-proliferatieve supra-basale lagen (Figuur 2). Vanaf dat we ezrine kan bevorderen de cellulaire adhesie kan veronderstellen, zoals eveneens waargenomen in niet-prolifererende keratinocyten van de normale humane orale mucosa [18, 20, 21].
Verder meeste odontogene tumoren (83,33% ) vertoonden sterke cytoplasmatische expressie ezrine vooral in de basale laag van odontogene epitheel. Interessant is dat de cytoplasmatische ezrine weerspiegelt de vorm geactiveerd [18, 20, 21] en in mondkanker, dit patroon van cytoplasmatische ezrine is geassocieerd met invasieve fenotype en agressiever gedrag van kwaadaardige cellen [18-21]. Deze bevindingen suggereren dat geactiveerd ezrine noodzakelijk is voor de proliferatie en /of indringen odontogene cellen eenmaal zijn cytoplasmatische positiviteit werd voornamelijk gevonden in de basale lagen van keratocystic odontogene tumoren, het gebied verantwoordelijk voor de tumorgroei. Ondernemingen De verdeling van ezrine in odontogene tumoren keratocystic heterogener dan podoplanin (tabellen 1 en 2) en statistisch significante verschillen waargenomen tussen de lokalisatie van membraneuze ezrine en cytoplasmatische of membraneuze podoplanin (tabel 3). Eerder werd gemeld dat ezrine aanmerkelijk gefosforyleerd in aanwezigheid van podoplanine overexpressie [13]. Deze interactie van podoplanin en Ezrin is verantwoordelijk voor veel van de effecten op het cytoskelet, die bijdragen tot een grotere cel beweeglijkheid [13]. Bovendien zijn er aanwijzingen dat ERM functie organiseren het cytoskelet wordt gemedieerd door het vermogen om actine te binden en GTPase RhoA-fosforylering [13] te reguleren. Interessant is dat de keratocystic odontogene tumoren gepresenteerd sterke membraneuze podoplanin en cytoplasmatische ezrine expressie, die overeenkomen met de geactiveerde vormen van beide eiwitten. De podoplanin geactiveerde vorm (membraneuze) werd vooral gevonden in de basale laag, wat wijst op een co-lokalisatie van actieve-Ezrin en actieve-podoplanin in de zeer actieve gebieden van keratocystic odontogene tumoren. Echter, deze correlatie niet statistisch significant was waarschijnlijk vanwege het lage aantal negatieve tumoren (0 voor membraneuze podoplanin en 2 voor cytoplasmatische ezrine), die niet toestaat waarbij een associatieve relatie (tabel 4).
Conclusies
Kortom, we eerst melden dat Ezrin presenteert sterke membraneuze expressie in de supra-basale laag en sterke cytoplasmatische expressie in de basale laag van keratocystic odontogene tumoren. Zo, ons onderzoek suggereert een rol voor Ezrin en podoplanin in keratocystic odontogene tumoren en hun moleculaire interacties moeten verder worden onderzocht in dit soort tumoren.
Consent Inloggen Deze studie is door het Comité van ethiek en onderzoek vanuit zijn goedgekeurd Bauru School voor Tandheelkunde - Universiteit van São Paulo. CAAE:. # 03924312.0.0000.5417
Afkortingen
ERM:
Ezrin, radixin en Moesin
GTP-ase:
Guanosine- triphosphatase.
verklaringen
Dankwoord
Wij willen erkennen de Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (subsidies # 2012 /13411-6 en # 2013 /16999-7) en Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico voor de ondersteuning van deze studie.
Authors 'originele ingediende dossiers voor afbeeldingen
Hieronder staan de links naar de auteurs oorspronkelijke ingediende dossiers voor afbeeldingen. 'Originele bestand voor figuur 1 12903_2014_474_MOESM2_ESM.tif Authors' 12903_2014_474_MOESM1_ESM.tif Auteurs originele bestand voor figuur 2 Concurrerende belangen Ondernemingen De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende belangen. Bijdragen
Authors '
ODT bijgedragen aan de conceptie en ontwerp van dit project, kritische interpretatie van de gegevens en de herziening van het manuscript kritisch. DSLP uitgevoerd acquisitie, analyse en interpretatie van gegevens. AA bijgedragen met data-analyse, het opstellen en indienen van het manuscript. TKC ontwierp ook het project bijgedragen met de acquisitie, de analyse van gegevens en de herziening van het manuscript. NS bijgedragen aan het ontwerp van het project ook immunohistochemische profielen voor deze studie. LJRP bijgedragen met de onderzoeksopzet, statistische kritische analyse en interpretatie van gegevens. SFA mits bijkomende infrastructuur die nodig is om het onderzoek uit te voeren en heeft bijgedragen aan het concept en het ontwerp van het project. Alle auteurs gelezen en goedgekeurd het definitieve manuscript.
