Abstract achtergrond
Aangezien geënte tandvlees zou moeten worden aangepast aan de receptor stippellijn dat fibroblasten hebben de mogelijkheid om te reageren bacteriële stimuli door het vrijkomen van verschillende cytokinen, deze studie onderzocht of fibroblasten van de palatale mucosa zich anders gedragen wanneer geënt op de gingivarand betreffende cytokine secretie.
methoden
biopten van de palatale mucosa werden verzameld op het moment van vrije tandvlees graft operatie, en na vier maanden re-collectie werd uitgevoerd na de operatie voor root dekking. Fibroblasten werden geïsoleerd door het explantaat techniek, beschaafd en gestimuleerd met Porphyromonas gingivalis
(Pg
) en Escherichia coli
(Ec
) LPS voor 24 of 48 uur voor de vergelijkende evaluatie van de secretie van cytokines en chemokines zoals IL-6, IL-8 /CXCL8, MIP-1α /CCL3, TGF-β, VEGF en CXCL16. Ongestimuleerde cellen werden gebruikt als controlegroep. Cellen werden getest op levensvatbaarheid door middel van MTT-bepaling en secretie van cytokines en chemokines werd geëvalueerd in de cel supernatanten door Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).
Resultaten
fibroblasten van de palatale mucosa gehandhaafd hetzelfde patroon secretie van IL -6 wanneer geënt op de gingivarand. Daarentegen vertoonden fibroblasten van de marginale gingivale graft verhoogde afscheiding van IL-8 /CXCL8 zelfs in afwezigheid van stimulatie. Interessant is dat MIP-1α /CCL3 afscheiding van fibroblasten van de marginale gingivale graft significant toegenomen na 48 uur stimulering met LPS Pg
en na 24 uur met Ec
LPS. Slechts fibroblasten van de marginale gingiva transplantaat vertoonde secretie van TGF-β. VEGF en CXCL16 uitscheiding werden niet gedetecteerd door zowel subsets van fibroblasten.
Conclusie
fibroblasten van de palatale mucosa lijkt te zijn aangepast aan de plaatselijke omstandigheden van het terrein als micro geënt op de gingivale randgebied. Dit bewijsmateriaal ondersteunt de effectieve deelname van fibroblasten in de homeostase van de marginale parodontium door middel van afscheiding modulatie van belangrijke ontstekingsmediatoren.
Sleutelwoorden
Parodontitis Gingival fibroblasten cytokinen chemokine Ontsteking Elektronische aanvullend materiaal
De online versie van dit artikel (doi :. 10 1186 /1472-6831-14-21) bevat aanvullend materiaal, dat beschikbaar is voor geautoriseerde gebruikers is achtergrond
gingivaweefsel blootstelling aan bacteriële plaque kan leiden tot weefsel ontsteking met klinische tekenen van kleur veranderen. , grootte, vorm, consistentie en bloeden met de mogelijkheid van alveolaire botverlies vanwege periodontale ziekteprogressie [1]. Het cumulatieve effect en repetitieve pathologische gebeurtenissen tandvlees kan leiden tot het ontstaan en de progressie van gingivale recessie, vooral in gevallen met smalle band of afwezigheid van de bijgevoegde tandvlees [2-4].
Volgens de American Academy of Parodontologie, parodontale plastische chirurgie kan worden aangegeven aan het tandvlees breedte te verhogen, het creëren van een diepere vestibule op locaties met abnormale frenum gehechtheid en inadequate bijgevoegde tandvlees [5]. Hoewel de verhoornde slijmvlies breedte en gingiva genetisch bepaald, kan deze worden beïnvloed door de aanwezigheid van bacteriële plaque geassocieerd met ontsteking of met mechanische ingrepen [6].
Er is aangetoond dat fibroblasten, behalve dat de belangrijkste cellen in het onderhoud en verbouwing van bindweefsel extracellulaire matrix, zijn betrokken bij immuun en inflammatoire gastheerrespons in periodontale ziekte, omdat ze de belangrijkste structurele cellen in periodontale infecties door anaërobe bacteriën zoals Porphyromonas gingivalis (Pg) Kopen en kunnen worden gestimuleerd inflammatoire cytokines op Pg Kopen en zijn bijprodukten uitdaging [7-11] loslaat. Naast gevoelig voor hun eigen cytokinen en groeifactoren, kunnen zij rechtstreeks met bacteriën en hun virulentie factoren, waaronder lipopolysaccharide (LPS) in parodontale laesies [12].
Betrekking gingivale fibroblasten rol als reactie op LPS door middel Pg
cytokinen, werd eerder aangetoond dat deze cellen een differentiële gedrag van periodontale ligament van dezelfde donor, hetgeen de individualiteit van de anatomische regio bepalen de celrespons [9]. Specifiek voor IL-6 en IL-8 /CXCL8, een bekende chemokine vereist voor neutrofielen werving, werd gemeld dat deze cellen kunnen grote hoeveelheden afscheiden wanneer gestimuleerd met LPS Pg
[8, 13-15] . Bovendien, gingivale fibroblasten scheiden ook de chemokine MIP-1α /CCL3 impliceert op monocyten chemoattractie in parodontitis [16] en TGF-β, dat de expressie van pro-collageen type I [17] induceert. VEGF is een cytokine met betrekking tot de etiologie van parodontitis door het vermogen om vasculaire permeabiliteit die bijdraagt aan de verspreiding van de ontsteking, waardoor ontstekingsmediatoren afgifte van cellen in het ontstoken weefsel en waardoor de vorming van nieuwe bloedvaten [18] te verhogen. Ook de chemokine CXCL16 geïnduceerd door andere cytokines bevorderen gingivale fibroblasten proliferatie en migratie van leukocyten in ontstoken weefsel helpen de periodontale weefsels herschikking [19, 20]. Voor zover wij weten is er geen eerdere werk van de secretie profiel van de bovengenoemde cytokinen het vergelijken van de fibroblasten van palatum (meestal gebruikt als een autogeen donor site voor tandvlees graft procedures) met cellen afkomstig uit marginale gingivale gebied aangepakt.
Geënt gingivale weefsel zou moeten worden aangepast aan de receptor en er is een grote hoeveelheid bewijs die gingiva fibroblasten kunnen reageren op verschillende stimuli door middel van cytokinen en chemokinen release, wat op zijn beurt een belangrijke rol spelen ontstekingsreactie. Daarom is deze studie had als doel te onderzoeken of de secretie van cytokines en chemokines, waaronder reparatie mediators door menselijke gingivale fibroblasten zou worden gemoduleerd wanneer geënt uit de palatale slijmvlies aan de tandvlees marginale gebied in een vrije tandvlees graft procedure.
Methods
monstername en fibroblasten primaire kweek
Na goedkeuring door de Institutional review Board van de Bauru School voor Tandheelkunde, Universiteit van São Paulo, # 055/2011, drie systemisch en parodontaal gezonde personen (28, 38 en 50 jaar oud, 3 vrouwtjes) werden geselecteerd in Periodontics Clinics, die allen nodig root-dekking in gebieden met schaarse keratinized slijmvlies. Ze hadden geen tekenen van tandvleesontsteking, geen bloeden op indringende of kritische indringende diepte. Alle personen werden naar anamnese, parodontale klinisch onderzoek en radiografische examens ingediend. De criteria voor opname waren personen met een tekort verhoornde slijmvlies, zowel in kwantiteit en kwaliteit, zonder systemische complicaties die de chirurgische procedures kan een contra-indicatie, en de informatie schriftelijk toestemming om deel te nemen aan het onderzoek. Ondernemingen De palatum exemplaren, formaat 3x3 mm, werden onmiddellijk verkregen wanneer een epitheel-bindweefsel graft tijdens de vrije tandvlees graft chirurgie [21] van de palatale donor site op de premolaren gebied werd verwijderd. Na vier maanden, werden monsters van tandvlees graft verkregen uit de marginale gebied, tijdens een tweede chirurgische procedure voor root dekking. Fibroblasten werden geïsoleerd door het explantaat techniek zoals eerder beschreven [8-11]. In het kort werden de monsters direct verwerkt in Dulbecco's gemodificeerd Eagle's medium (DMEM; Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) aangevuld met 20% foetaal runderserum (FBS, Gibco, Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, USA). De epitheliale laag werd verwijderd en de monsters werden fijngemaakt zo klein mogelijk. Weefselfragmenten van palatale mucosa of gingivale transplantaat werden apart in petrischalen bedekt en bedekt met DMEM aangevuld met 20% FBS en antibiotica (600 ul /ml penicilline, 300 ul /ml gentamicine sulfaat en 100 ul /ml amfotericine B). De explantaten werden 25 cm
2 flessen geplaatst en geïncubeerd bij 37 ° C in een bevochtigde atmosfeer van 5% CO 2. Het medium (DMEM 10% FBS) werd elke 2-3 dagen vervangen en de kweken werden gehandhaafd totdat fibroblasten confluentie bereikten. Na confluentie werden de fibroblasten geoogst en gebruikt tussen de vierde en achtste passages [8-11].
Fibroblasten stimulatie
De cellen in 24 putjesplaten werden geënt bij een dichtheid van 2 x 10 4 cellen /putje en bij 37 ° C in een bevochtigde atmosfeer van 5% CO 2 gedurende 18 uur in DMEM 1% FBS. Na overnacht hechting DMEM bevattende 1 ug /ml LPS Pg
(Invivogen, San Diego, CA, USA) of Ec
LPS (Invivogen) werd toegevoegd aan de putjes 24 en 48 uur. Niet-gestimuleerde cellen werden gebruikt als controles. Beide Pg
LPS en Ec
LPS waren ultrapuur en gekocht van Invivogen.
Fenotypische karakterisering van fibroblasten
gekweekte cellen van het palatum en tandvlees graft werden gekarakteriseerd als fibroblasten door hun morfologie en kleuring met fibroblast oppervlak eiwit (FSP; ab 11.333, Abcam, Cambridge, UK) door middel van immunokleuring [11]. Cellen werden gezaaid in een 8-well plaat met 1 x 10 4 cellen per putje en geïncubeerd bij 37 ° C met 5% CO 2 gedurende 18 uur te houden in subconfluence. Vervolgens werden de putjes verdeeld in groepen (controle, Pg
LPS, LPS Ec
en negatieve controle, die werd uitgevoerd zonder het primaire antilichaam) in tweevoud, stimulatie cel. Cellen werden gefixeerd met paraformaldehyde 4% (15 min) en werden 3 maal gewassen met 1x PBS en geïncubeerd met PBS BSA 3% (30 min bij kamertemperatuur), gevolgd door primaire monoklonale antilichaam incubatie fibroblasten oppervlaktemerker verdund 1: 100 (2 ug /ml eindconcentratie) en tenslotte met fluoresceïne geconjugeerd secundair antilichaam (1: 400) (Abcam) bij 37 ° C in het donker gedurende 1 uur. Dekglaasjes gemonteerd fixeermiddel Vectashield Hard-Set Mounting Medium bevattende 49,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI, H-1500, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) en geanalyseerd met confocale laser scanning microscoop (TCS model, SPE Leica Mannheim, Duitsland).
Cellevensvatbaarheid
Cellevensvatbaarheid enzymatische activiteit werd geanalyseerd met een colorimetrische assay MTT [3- (4,5-dimethylthiazool-2-yl) -2,5-difenyltetrazoliumbromide]. In het kort werden cellen gewassen met 1 x PBS kweekmedium en verwijder MTT (5 mg /ml) werd toegevoegd aan de groepen (controle, Pg
LPS en Ec
LPS) of celvrije putjes (blanco). De plaat werd geïncubeerd gedurende 4 uur bij 37 ° C met 5% CO 2. Na incubatie werd de plaat gecentrifugeerd (200 g
gedurende 7 minuten bij 21 ° C) en MTT-oplossing werd verwijderd dimethylsulfoxide toe (DMSO, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). De extinctie van de putjes werd vastgesteld onder toepassing van een plaatlezer (Fluostar Optima, BMG Labtech, Ortenberg, Duitsland) bij de golflengte van 570 nm.
Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)
ELISA werd uitgevoerd volgens de fabrikant instructies om de eiwit niveaus van IL-6 te bepalen (R & D System, Minneapolis, MN, ERE), IL-8 /CXCL8 (R & D System, Minneapolis, MN, ERE), MIP-1α /CCL3 (R & D System, Minneapolis, MN, EUA), TGF-β (eBioscience, San Diego, CA, USA), VEGF (PeproTech, Londen, UK) en CXCL16 (PeproTech, Londen, UK). Kort, platen van 96 putjes geïncubeerd met invangantilichaam anti-IL-6, IL-8 /CXCL8, MIP-1α /CCL3, TGF-β, VEGF of CXCL16 verdund in 1 x PBS-buffer. Na het blokkeren gedurende 1 uur om te voorkomen aspecifieke binding, 100 pl standaard IL-6, IL-8 /CXCL8, MIP-1α /CCL3, TGF-β, VEGF en CXCL16 en kweeksupernatanten werden geplaatst. De cytokinen werden gedetecteerd door mierikswortel-peroxidase gemerkt monoklonaal antilichaam aan elk doel na toevoeging van 100 pl anti-humaan IL-6, IL-8 /CXCL8, MIP-1α /CCL3, TGF-β, VEGF en CXCL16 gebiotinyleerde antilichamen werden geplaatst elk putje en gedurende 2 uur bij kamertemperatuur geroerd. De microplaat werd gewassen om niet-gebonden enzym-gelabelde antilichamen te verwijderen. De hoeveelheid mierikswortelperoxidase gebonden aan elk putje werd bepaald door de toevoeging van 100 pl substraatoplossing. De reactie werd gestopt door de toevoeging van 100 gl 1 M zwavelzuur en de platen werden afgelezen bij 450 nm (Synergy ™ MX Monochromator Based Multi-Mode Microplate Reader, BioTek Instruments, Inc., Winooski, VT, USA). De concentraties van IL-6, IL-8 /CXCL8, MIP-1α /CCL3, TGF-β, VEGF en CXCL16 werden bepaald door interpolatie van een standaardcurve en gepresenteerd als pg /ml op dubbele assays van duplo monsters van elk van de geteste omstandigheden.
Statistische analyse
Vergelijkingen voor levensvatbaarheid door middel van MTT tussen de monsters werden uitgevoerd met behulp van One-way ANOVA-test, gevolgd door Tukey-test. ELISA data normaliteit werd geverifieerd door de Kolmogorov-Smirnov methode. De statistische verschillen werden bepaald door drie-way ANOVA gevolgd door Tukey-test. Statistische analyses werden uitgevoerd met STATISTICA (versie 11.0; StatSoft Inc). P-waarden & lt; 0,05 werden beschouwd als significant. De resultaten werden uitgedrukt als gemiddelde en een standaardafwijking van het gemiddelde.
Resultaten
Fenotypische karakterisatie van fibroblasten
cellulaire kleuring met een fibroblast oppervlaktemarker (FSP) werd uitgevoerd om de fibroblastische fenotype te bevestigen. Fibroblasten werden geanalyseerd door immunofluorescentie in alle groepen (controle, Pg
LPS, LPS en Ec
negatieve controle). Positieve kleuring werd waargenomen voor alle groepen (figuur 1), met Pg
LPS (figuur 1C) en Ec
LPS (Figuur 1B) groepen zijn iets hoger. Voor de negatieve controlegroep (figuur 1D), die geen primaire antilichaam ontvingen, werd geen signaal gedetecteerd. Dit resultaat bevestigt de karakterisering van de gekweekte cellen als fibroblasten. Figuur 1 cellen karakterisering van fibroblast eiwitoppervlak kleuring. Gekweekte cellen werden immunologisch gekleurd voor fibroblast oppervlakte-eiwit (FSP) en een confocale microscoop bij een toename van 63x onderzocht. (A) controle; (B) gestimuleerd door Ec
LPS; (C) gestimuleerd door Pg
LPS en (D) negatieve controle, gemerkte kernen in blauw (DAPI).
Cellevensvatbaarheid
cellevensvatbaarheid werd bepaald na 24 en 48 uur in de controle (niet-gestimuleerde ) en het testen van groepen (gestimuleerd met Pg
LPS en Ec
LPS). Er was geen verschil in cellen rentabiliteit stimuli gebruikt na 24 en 48 uur (Figuur 2). Figuur 2 cellulaire levensvatbaarheid. Fibroblasten levensvatbaarheid uitgedaagd met Pg
LPS en Ec
LPS geëvalueerd op 24 en 48 uur in de controlegroep (niet-gestimuleerde) en testgroepen (gestimuleerd met Pg
LPS en Ec
LPS) door middel van MTT-test .
Cytokines secretie vergelijken fibroblasten van de palatale mucosa de marginale gingivale getransplanteerde cellen
Wanneer de doelstellingen van dit onderzoek werden vergeleken tussen de twee subpopulaties van fibroblasten, IL-6 secretie was statistisch significant na 24 en 48 uur van Pg
LPS stimulatie (Figuur 3A en B) van beide subtypes van fibroblasten (van de palatale mucosa en gingiva graft randgebied), en het verschil was groter bij 48 uur (figuur 3B). Anderzijds, de secretie na Ec
LPS stimulatie was slechts statistisch significant na 48 uur bij beide subtypes van fibroblasten (Figuur 3D). Bovendien, IL-6 secretie was groter door niet-gestimuleerde fibroblasten van de marginale gingivale graft (figuur 3). Figuur 3 IL-6 secretie door menselijke fibroblasten gekweekt uit palatum en marginale tandvlees graft. A-D: primaire celculturen werden verkregen van parodontale weefsels van drie gezonde personen en, na de vierde passage werden gestimuleerd met LPS uit P. gingivalis Kopen en uit E. coli
in een concentratie van 1 ug /ml. Cultuurmedium zonder stimuli werd gebruikt als controle. ELISA werd uitgevoerd voor de kwantificering van de cytokinen van de celkweek supernatanten. Representatieve waarde van het gemiddelde van drie onafhankelijke experimenten, n = 3. * P & lt; 0,05 werd beschouwd als significant verschillend. PMF = palatine slijmvlies fibroblasten. GMF = marginale gingivale fibroblasten.
Fibroblasten van de palatale mucosa uitgescheiden meer IL-8 /CXCL8 dan fibroblasten van de marginale gingivale graft wanneer gestimuleerd door LPS Pg
met een statistisch significant verschil bij 48 uur (Figuur 4A en B) . Ook met betrekking tot deze chemokine, fibroblasten van de palatale mucosa stegen zowel 24 uur en 48 uur wanneer gestimuleerd door Ec
LPS (Figuur 4C en D), die niet werd waargenomen bij cellen van de marginale gingivale graft. Figuur 4 IL-8 /CXCL8 afscheiding door menselijke fibroblasten gekweekt uit palatum en marginale tandvlees graft. A-D: primaire celculturen werden verkregen van parodontale weefsels van drie gezonde personen en, na de vierde passage werden gestimuleerd met LPS uit P. gingivalis Kopen en uit E. coli
in een concentratie van 1 ug /ml. Cultuurmedium zonder stimuli werd gebruikt als controle. ELISA werd uitgevoerd voor de kwantificering van de cytokinen van de celkweek supernatanten. Representatieve waarde van het gemiddelde van drie onafhankelijke experimenten, n = 3. * P & lt; 0,05 werd beschouwd als significant verschillend. PMF = palatine slijmvlies fibroblasten. GMF = marginale gingivale fibroblasten.
In deze studie, MIP-1α /CCL3 werd waargenomen dat constitutief worden uitgescheiden door fibroblasten beide subtypen (Figuur 5). Bovendien was er geen statistisch significant verschil in MIP-1α /CCL3 afscheiding tussen gestimuleerde fibroblasten (controlegroep) en fibroblasten gestimuleerd met Pg golfreizen of Ec
LPS van de palatale mucosa (Figuur 5). Er werd echter statistisch significant verschil waargenomen in MIP-1α /CCL3 secretie na 48 uur toen fibroblasten van de marginale gingiva transplantaat werden gestimuleerd met Pg
LPS (Figuur 5B) en na 24 uur toen uitgedaagd door Ec
LPS (Figuur 5C). Figuur 5 MIP-1α /CCL3 afscheiding door menselijke fibroblasten gekweekt uit palatum en marginale tandvlees graft. A-D: primaire celculturen werden verkregen van parodontale weefsels van drie gezonde personen en, na de vierde passage werden gestimuleerd met LPS uit P. gingivalis Kopen en uit E. coli
in een concentratie van 1 ug /ml. Cultuurmedium zonder stimuli werd gebruikt als controle. ELISA werd uitgevoerd voor de kwantificering van de cytokinen van de celkweek supernatanten. Representatieve waarde van het gemiddelde van drie onafhankelijke experimenten, n = 3. * P & lt; 0,05 werd beschouwd als significant verschillend. PMF = palatine slijmvlies fibroblasten. GMF = marginale gingivale fibroblasten.
Wanneer TGF-β secretie werd geëvalueerd, fibroblasten van de palatale mucosa vertoonden geen detecteerbare niveaus, zelfs in aanwezigheid van Pg
LPS (Figuur 6A en B) of Ec
LPS (Fig 6C en D). Integendeel, fibroblasten van de marginale gingiva transplantaat vertoonden een constitutief TGF-β secretie en er was geen statistisch significant verschil tussen gestimuleerde en ongestimuleerde cellen, zowel op 24 uur en 48 uur (Figuur 6). VEGF en CXCL16 secretie werd niet gedetecteerd, hetzij op fibroblasten supernatant gekweekt uit het palatum noch uit de marginale gingivale weefsel, ongeacht stimulatie door Pg golfreizen of Ec
LPS. Figuur 6 TGF-β de secretie door menselijke fibroblasten gekweekt uit palatum en marginale tandvlees graft. A-D: primaire celculturen werden verkregen van parodontale weefsels van drie gezonde personen en, na de vierde passage werden gestimuleerd met LPS uit P. gingivalis Kopen en uit E. coli
in een concentratie van 1 ug /ml. Cultuurmedium zonder stimuli werd gebruikt als controle. ELISA werd uitgevoerd voor de kwantificering van de cytokinen van de celkweek supernatanten. Representatieve waarde van het gemiddelde van drie onafhankelijke experimenten, n = 3. * P & lt; 0,05 werd beschouwd als significant verschillend. PMF = palatine slijmvlies fibroblasten. GMF = marginale gingivale fibroblasten.
Discussie
Fibroblasten zijn geen unieke cel groep tussen de verschillende anatomische gebieden [9, 22-24]. Zij zijn de belangrijkste cellen in periodontale bindweefsel [12], en zijn betrokken bij de immuunrespons van de gastheer door het vrijgeven inflammatoire cytokines [7] en reparatie mediatoren [25, 26]. Om de beste van de kennis van de auteur, is dit de eerste studie te onderzoeken en het profiel van de bemiddelaars secretie vergelijken door menselijke fibroblasten gekweekt uit niet-marginale palatum met de marginale gingiva geënte weefsel, met vermelding van de verschillen en overeenkomsten tussen deze cellen bij te dragen voor cytokinen afscheiding op bacteriële LPS stimulatie.
In de huidige studie, werd waargenomen dat zowel fibroblasten afgeleid van palatum en marginale tandvlees graft uitgescheiden IL-6 cytokine evenzo wanneer gestimuleerd door Pg golfreizen of Ec
LPS. We erkennen dat het nuttig zou zijn om mRNA te onderzoeken om beter te begrijpen of transcript niveaus verschillend tussen hen zou zijn. Dit zou ons wat informatie over mogelijke posttranscriptionele modificatie dat de productie van cytokines kan veranderen geven. Eerdere studies [8, 14, 15, 27, 28] hebben aangetoond dat fibroblasten blootgesteld aan bacteriële stimuli zoals LPS significante IL-6 expressie, hetgeen het belang van dit cytokine in de ontvangende immuun- en ontstekingsrespons in parodontitis, maar de huidige onderzoek ook onthuld verhoogde IL-6-secretie na 48 uur voor beide subtypen van fibroblasten. Hier was IL-6 constitutieve secretie van gestimuleerde cellen van de palatale mucosa en ook van de marginale gingivale graft, statistisch significant voor de laatste. Scheres et al. [14] blijkt dat de niet-gestimuleerde gingivale fibroblasten tot expressie gebracht en uitgescheiden IL-6 meer dan periodontale ligament fibroblasten. Dit suggereerde dat gingivale fibroblasten hebben een hogere activiteit omdat ze meer vatbaar zijn voor contact met periodontale ziekteverwekkers en hier zetten we deze belangrijke rol voor beide subtypen van gingiva cellen.
Hierbij wordt aangetoond dat fibroblasten van de palatale mucosa enige uitgescheiden IL-8 /CXCL8 chemokine wanneer gestimuleerd met bacteriële LPS. Wanneer deze cellen werden geënt op de gingivale randgebied na 4 maanden IL-8 /CXCL8 chemokine uitscheiding werd zelfs in afwezigheid van LPS stimuli waargenomen. Deze verandering in het expressieprofiel kan worden gerelateerd aan het nauwer contact van de cellen met bacteriële virulentiefactoren zoals Pg
LPS, voor de marginale parodontium. Eerdere studies [9, 13-15, 29] hebben aangetoond dat fibroblasten gestimuleerd door LPS Pg
kunnen IL-8 productie en fibroblasten uit verschillende anatomische gebieden tonen heterogeniteit op chemokine profiel secretie [14]. Daarom benadrukt verder dat de heterogene secretie van IL-8 /CXCL8 in de huidige studie hebben plaatsgevonden door de milieu-invloed op de secretie van fibroblast mediatoren geënt op een nieuw anatomisch gebied, waarbij er aanpassing en proliferatie van deze cellen.
bij de chemokine MIP-1α /CCL3 onderzocht, werd vastgesteld dat wanneer fibroblasten van de palatale mucosa op de marginale gingivale gebied werden geënt, handhaafden zij soortgelijke cytokine constitutieve secretie in de afwezigheid van bacteriële stimulatie. Echter, fibroblasten van de marginale gingivale graft hadden een hogere uitscheiding in vergelijking met fibroblasten uit de palatale mucosa na 48 uur na stimulatie door LPS Pg
, die een tijdsafhankelijke uitdrukking. Nogmaals, de verhoogde chemokine uitscheiding in casu MIP-1α /CCL3 door fibroblasten van de marginale gingivale graft zou kunnen optreden doordat vooraf stimulatie in het randgebied van tandplak in de sulcus, wat suggereert dat deze cellen aanwezig adaptief gedrag wanneer geënt op de tandvleesrand. Een eerdere werk van onze fractie [9] is gebleken dat tandvlees en parodontale ligament fibroblasten anders gedragen op MIP-1α /CCL3 afscheiding wanneer gestimuleerd door Pg
LPS, en toonde ook een verhoogd MIP-1α /CCL3 afscheiding wanneer de cellen werden uitgedaagd door pg
LPS in lage concentraties zoals 0,1 ug /ml, die na verloop van tijd toegenomen.
betreft TGF-β secretie, fibroblasten gekweekt uit het palatum en de marginale gingivale graft toonde een heterogene gedrag. Fibroblasten van de palatale mucosa heeft TGF-β secretie vertonen zelfs tegen de bacteriële stimuli toegepast. Integendeel, fibroblasten van de marginale gingivale graft uitgescheiden TGF-β, zonder enig verschil tussen gestimuleerde en niet-gestimuleerde cellen. Een studie [30] blijkt dat fibroblasten van periodontale ligament expressie TGF-β maar de productie werd niet beïnvloed door bacteriële LPS, wat suggereert dat TGF-β accumuleren in ontstekingen onderdrukken van het cellulaire immuunsysteem, maar zonder dat dit leidt tot weefselvernietiging door middel stimulatie met bacteriële LPS. Een andere studie waarin periodontale ligament en gingiva cellen [8] gevonden dat TGF-β secretie afhankelijk van de stimulus concentratie voornamelijk gingivale fibroblasten hoger bij provocatie met 10 ug /ml LPS, terwijl de concentratie van 1 ug /ml zoals gebezigd in de huidige studie, vertoonden geen significante verschillen in vergelijking met de niet-gestimuleerde fibroblasten. De toegenomen TGF-β de secretie hier gevonden door marginale getransplanteerde cellen kan worden gerelateerd aan weefselherstel en zou kunnen hebben voorgedaan door de voortdurende reparatie nodig, omdat de constante aanwezigheid van tandheelkundige sulcus microbiota induceert marginale veranderingen.
Ten slotte, de resultaten bleek dat geen van beide fibroblasten van de palatale mucosa noch aan de marginale gingivale graft uitgescheiden VEGF noch CXCL16, volgens de gebruikte stimuli. Eerdere studies [31, 32] hebben aangetoond dat de menselijke gingivale fibroblasten gestimuleerd door LPS, blaasjes en eiwitten uit Pg Kopen en Aa
extracellulaire membraan in staat waren om VEGF produceren wanneer gestimuleerd door dergelijke middelen. Misschien in deze studie de tijd en de concentratie van LPS gebruikt waren niet voldoende voor de inductie van VEGF. Betreffende CXCL16, werd gemeld dat expressie werd geïnduceerd door andere cytokinen zoals IFN-γ en TNF-α en hun secretie gemedieerd door ADAM 10 membraanreceptor, die CXCL16 functie ontstoken weefsels [33] regelt. Een ander werk [19] blijkt dat CXCL16 expressie door gingivale fibroblasten werd gecontroleerd door verscheidene cytokinen zoals IL-1β, TNF-α en IFN-γ. In feite kan men speculeren dat CXCL16 secretie werd niet gedetecteerd in de huidige studie, omdat fibroblasten gestimuleerd alleen bacterieel LPS, en de werking van andere cytokinen of andere stimuli kan nodig zijn voor uitscheiding van CXCL16 door gingivale fibroblasten [19, 33]. Ondernemingen de heterogene secretie van inflammatoire mediatoren en reparatie kan aangeven dat fibroblasten geënt op een nieuwe anatomisch gebied (tandvleesrand) kan worden beïnvloed door de micro momenteel deze cellen in contact komen met bacteriële producten, beter deelnemen in het kader van de ontstekingsreactie.
Conclusies
fibroblasten van het palatum presenteren een adaptief gedrag ten aanzien van cytokines afscheiding wanneer geënt op de gingivarand, waarin verschil in de afscheiding van belangrijke ontstekingsmediatoren aan de marginale parodontium homeostase.
Afkortingen
Pg:
Porphyromonas gingivalis
Ec:
Escherichia coli
ELISA :
Enzyme-linked immunosorbent assay
LPS:
Lipopolysaccharide
DMEM:
Dulbecco's gemodificeerd Eagle's medium
FBS:
Foetaal runderserum
FSP:
fibroblast oppervlakte-eiwit
BSA:
Bovine serumalbumine
DAPI:
49,6-diamidino-2-fenylindool
DMSO:
Dimethylsulfoxide
MTT.
[3- (4,5-dimethylthiazool-2-yl) -2,5-difenyltetrazoliumbromide
verklaringen
Dankwoord
Er zijn geen belangenconflicten in verband met dit onderzoek. Deze studie werd deels gesteund door de São Paulo Research Foundation (FAPESP; Grant # 2010 /01230-1 tot CFS) en door de Nationale Raad voor Wetenschappelijk en Technologische Ontwikkeling (CNPq; verlenen # 480160 /2013-9 te CFS) <. br> Authors 'originele ingediende dossiers voor afbeeldingen
Hieronder staan de links naar de auteurs oorspronkelijke ingediende dossiers voor afbeeldingen. 'Originele bestand voor figuur 1 12903_2013_366_MOESM2_ESM.tif Authors' 12903_2013_366_MOESM1_ESM.tif Auteurs originele bestand voor 'originele bestand voor figuur 3 12903_2013_366_MOESM4_ESM.tif Authors' figuur 2 12903_2013_366_MOESM3_ESM.tif Auteurs originele bestand voor figuur 4 originele bestand 12903_2013_366_MOESM5_ESM.tif Authors 'voor figuur 5 12903_2013_366_MOESM6_ESM.tif Authors 'originele bestand voor figuur 6 concurrerende belangen Ondernemingen de auteurs verklaren dat ze geen concurrerende belangen.
auteurs bijdragen
FPA, ACFM, CRS, CVS en slak bedacht en gepland het project. Alle auteurs gelezen en goedgekeurd het definitieve manuscript.
