Abstracte achtergrond
Candida albicans
is een diploïde gist dat in sommige omstandigheden kunnen mondeling dan wel orofaryngeale infecties veroorzaken. Dit onderzoek gericht op de prevalentie van Candida
spp bestuderen. en de ABC genotypen van 76 klinische isolaten van C. albicans analyseren
verkregen uit de mondholte van niertransplantatie patiënten uit twee afzonderlijke geografische gebieden van Brazilië.
Methods
Wij getypt 48 stammen met ABC genotypering en Microsatelitte middels primer M13 en getest drie virulentiefactoren in vitro. fosfolipase activiteit morfogenese en het vermogen onttrekken uit polymorfonucleaire neutrofielen fagocytose
Resultaten
C. albicans
het meest voorkomende species (86,4%), gevolgd door C. tropicalis
(4,5%). C. albicans
genotype A de meest voorkomende (58 isolaten; 76,4%), gevolgd door genotype C (15 isolaten; 19,7%) en genotype B (3 isolaten; 3,9%). Wanneer microsatelliet techniek M13 primer werd aangebracht, waren 80% van de isolaten uit het zuiden binnen hetzelfde cluster geplaatst. De meeste Genotype C stammen werden gegroepeerd in twee verschillende clusters. Conclusies Genotype C werd beschouwd als beter bestand tegen PMN aanval dan genotypes A en B. stammen geïsoleerd uit het zuiden van Brazilië toonde ook een betere mogelijkheid om PMN fagocytose te bestrijden.
We vonden een hoog percentage van C. albicans
C genotype stammen die uit de mondholte van deze groep patiënten. Deze studie gekenmerkt orale C. albicans
stammen geïsoleerd uit niertransplantrecipiënten en zal bijdragen tot een beter begrip van de pathogenese van orale candidiasis.
Sleutelwoorden
Candida
spp Orale candidiasis niertransplantrecipiënten Genotypering Virulentiefactoren elektronische aanvullend materiaal
de online versie van dit artikel (doi:. 10 1186 /1472-6831-14-20) bevat aanvullend materiaal, dat beschikbaar is voor geautoriseerde gebruikers is achtergrond
Ondanks het feit. dat Candida
spp. behoren tot de normale orale microflora, leven op de tong, tandvlees, tong en speeksel van gezonde individuen als commensale gisten, kunnen ze leiden tot orale of orofaryngeale infecties [1, 2]. Candida
spp. zijn geïsoleerd uit 40 tot 60% van gezonde mond, terwijl orale candidiasis komt vaker voor bij immunodeficiënte personen, personen met ernstige onderliggende ziekten en bovenste kunstgebit [3, 4].
Hoewel andere minder virulente Candida
soorten zoals C. glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. krusei Kopen en C. dubliniensis
ook zijn geïsoleerd uit het speeksel van patiënten met of zonder orale candidiasis, C. albicans
is nog steeds de meest voorkomende soorten geassocieerd met orale laesies [5].
Verschillende factoren kunnen bijdragen voor de overgang van commensale gist pathogene vormen die verband houden met verminderde gastheerimmuunsysteem geassocieerd met de virulentie van het micro-organisme. De belangrijkste virulentiefactoren van C. albicans
omvatten knop naar schimmeldraad overgang (ook wel morfogenese), hechting aan menselijke epitheliale en endotheliale cellen, biofilmvorming, de mogelijkheid om hydrolytische enzymen (voornamelijk proteasen en fosfolipasen) produceren, fenotypische switching (white-opaque overgang) en ontwijken van gastheer immuuncellen [6, 7].
sommige onderzoeken C. albicans
ABC genotypen geïsoleerd uit de mondholte van verschillende individuen en de resultaten hiervan lijken erg zijn variabele volgens de populatie geëvalueerd. Bijvoorbeeld, een studie met 11 patiënten met diabetische parodontitis blijkt dat 51,6% subgingivale C. albicans
isolaten was voor genotype B [8], terwijl andere onderzoek gevonden genotype A zoals overheersende [9]. Ondernemingen De prevalentie van orale candidiasis bij niertransplantatiepatiënten in de literatuur varieert beschreven van 9,4% tot 46,7% [10-12]. Een studie in Mexico uitgevoerd door De La Rosa-Garcia et al [11], rapporteert 18,7% van de gevallen van orale candidiasis in een totaal van 90 nier getransplanteerd ontvangers.
Heeft onze groep publiceerde een vergelijking van een aantal virulentiefactoren (biofilm productie, hechting aan humane buccale epitheelcellen en proteinase activiteit) onder C. albicans Kopen en non-C. albicans Candida
isolaten verkregen uit de mondholte van niertransplantatie ontvangers van Natal, Rio Grande do Norte, Brazilië [13]. Deze studie is een follow-up van deze eerdere publicatie met inbegrip van andere stammen die behoren tot een andere geografische regio van Brazilië. Daarnaast werden andere virulentie kenmerken onderzocht. Daarom zijn de doelstellingen van deze studie waren Candida
soorten distributie te bepalen en genotypisch karakteriseren 48 C. albicans
stammen geïsoleerd uit de mondholte van 154 nier getransplanteerd ontvangers uit twee verschillende geografische regio's van Brazilië (noordoosten en Zuid ). Bovendien werden de stammen fenotypisch kenmerk voor de mogelijkheid om de volgende virulentiefactoren in vitro expressie. De afscheiding van fosfolipase, de overgang van gistcellen hyfen (morfogenese) en het vermogen om weerstand te bieden aan fagocytose door polymorfonucleaire neutrofielen
Methods
Stammen selectie
Tijdens een 3 maanden-periode, 154 patiënten uit twee verschillende geografische regio's van Brazilië (111 van Natal, Rio Grande do Norte en 43 uit Maringa, Parana) werden onderworpen aan een klinisch onderzoek van de mondholte voor candidiasis diagnose, op basis van de criteria vastgesteld voor orale laesies bij HIV-patiënten aanbevolen door de EC-Clearinghouse en de World Health Organization indelingen [14]. Alleen patiënten die overeengekomen om deel te nemen op een surveillance vertrouwelijke studie, in overeenstemming met de lokale Research Ethics Committee van The Onofre Lopes University Hospital, onder het nummer 152/07 goedgekeurd, werden geïncludeerd in deze studie. Stammen isolaten orale kolonisatie (zonder symptomen) of tijdens episodes van orale candidiasis werden bij deze studie. Voor genotypering en virulentie studies, we willekeurig geselecteerde 48 klinische stammen van C. albicans
(38 van Natal, Rio Grande do Norte en 10 uit Maringa, Parana). Alle isolaten zijn beschreven in tabel 1. De monsters werden opgeslagen op YPD glycerol (10 g /l gistextract, 20 g /l pepton, 20 g /l dextrose en 3% glycerol) bij -80 ° C in de Laboratório de Micologia Médica e Molecular, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Brazilië. C. albicans
ATCC90028 en SC5314 werden opgenomen in deze studie als referentie strains.Table 1 Demografische gegevens van niertransplantatie ontvangers van Natal, RN en Maringa, PR, Brazilië, naar geslacht, leeftijd, en onderliggende ziekte
Variabelen
Natal (n,%)
Maringa (n,%)
Totaal (n,%)
Sex
Man
64 (73,6)
23 (26,4)
87 (100)
Female
47 (70,1)
20 (29,9)
67 (100)
Leeftijd
12-18 jaar oud
6 (85,7)
1 (14.3)
7 (100)
19-34 jaar oud
44 (81,5)
10 (18,5)
54 (100)
35-64 jaar oud
59 (64,8)
32 (35,5)
91 (100)
65 jaar of meer het kopen van 2 (100)
0 (0) kopen van 2 (100)
onderliggende ziekte
diabetische nefropathie
8 (66,7)
4 (33,3)
12 (100)
arteriële hypertensie
47 (85,4)
8 (14,6)
55 (100)
glomerulonefritis
23 (76,7)
7 (23,3)
30 (100)
polycysteuze nierziekten
6 (66,7)
3 (33,3)
9 (100)
Andere
27 (56.25)
21 (43.75)
48 (100)
Samples verzamelen en gisten identificatie
Monsters met 2 ml speeksel werden verzameld van alle patiënten, wordt door de vorige stimulatie met kauwgom. Wanneer laesies aanwezig waren, werd een steriel wattenstaafje wreef op het slijmvliesoppervlak van de mondholte. Vervolgens werd 100 ul cellen suspensies werden geïnoculeerd op het oppervlak van Sabouraud Dextrose Agar (SDA; Oxoid, UK) 300 ug /ml chlooramfenicol (Park-Davis) toegevoegd via een Drigalsky lus. De platen werden geïncubeerd bij 37 ° C gedurende 48 uur. Gist kolonies werden uitgeplaat op CHROMagar Candida® (CHROMagar Microbiology, Parijs, Frankrijk) te controleren op zuiverheid en screening voor verschillende kleuren kolonies. Soortidentificatie was gebaseerd op de kenmerken van de cellen microscopisch waargenomen na kweek op maïsmeel agar toegevoegd Tween 80, en assimilatie en fermentatie en testen ID32C System (bioMérieux Marcy l'Etoile, Frankrijk) zo vaak als nodig is [15]. Stammen die behoren tot de Candida parapsilosis
species complex werden geïdentificeerd eerder met moleculaire methoden [13].
C. albicans
DNA-extractie
C. albicans
cellen gedurende de nacht werden gekweekt in YPD vloeibaar medium ( dextrose 20 g /l, pepton 20 g /l, gistextract 10 g /l) geïncubeerd bij 30 ° C geroteerd met 200 rpm in een ronddraaiende schudder (tE-420, Tecnal ® Piracicaba, Brazilië). DNA werd geëxtraheerd met behulp van de Ultra PrepMan monstervoorbereiding reagens (Applied Biosystems, Foster City, CA) volgens de instructies van de fabrikant. Genomisch DNA-concentratie en zuiverheid werd gecontroleerd met een NanoDrop instrument (Thermo Scientific; Amersham Pharmacia Biotech, Wilmington, DE, USA).
Microsatelliet typen PCR en ABC genotypering
microsatelliet typering werd uitgevoerd met de primer M13 (5 'GAGGGTGGCGGTTCT --3) (IDT) zoals eerder beschreven [16]. ABC genotypering werd uitgevoerd met de volgende primers: CAINT- L (5'-ATAAGGGAAGTCGGCAAAATAGATCCGTAA-3 ') en CA-INT-R (5'- CCTTGGCTGTGGTTTCGCTAGATAGTAGAT-3') [17]. Kort samengevat, 1,0 pl DNA 40 ng /ul was aan 29 PCR Master Mix (Promega) toegevoegd tot een eindvolume van 25 pl. De monsters werden geamplificeerd in een thermocycler (Amplitherm TX96, USA) met de volgende cyclusparameters: een initiële cyclus van 94 ° C gedurende 3 min gevolgd door 30 cycli van 1 min bij 94 ° C, 1 min bij 57 ° C, 1 min bij 72 ° C en een laatste cyclus van 5 min bij 72 ° C. Voor microsatelliet typen, 1,0 pl DNA 40 ng /ul, 2,5 ui 10 x PCR buffer (100 mM Tris-HCl, pH 8,3, 500 mM KCI, 3,5 mM MgClz
2), 5 pl dNTPmix (100 mM elke dNTP), 1,0 pl van elke primer (50 pmol /pl), 0,13 pl tween 20 en 1,0 eenheid Taq DNA polymerase werd toegevoegd aan een eindvolume van 25 pl. Vijfenveertig amplificatiecycli werden uitgevoerd met dezelfde cyclusparameters hiervoor beschreven, behalve dat de annealing temperatuur was 36 ° C voor de Microsatellite typen. PCR-producten werden op grootte gescheiden door agarose gelelektroforese, en de gel werd gekleurd in 0,5 ug /ml ethidiumbromide bufferoplossing (TAE).
Computerondersteund microsatelliet gegevensanalyse
Gel beelden werden geanalyseerd met GelCompar II software, versie 4.5 en BioNumerics (Applied Maths, Kortrijk, België). De overeenkomsten tussen de profielen werden berekend met behulp van de Dice coëfficiënt op de matrixen van gelijkheidscoëfficiënten genereren om constructies dendrogram. Voor profiel clustering, het ongewogen paar-groep methode met rekenkundige gemiddelden werd gebruikt met een tolerantie van 2%.
Tests voor schimmeldraden vorming
een initieel bedrag van 10 6 cellen /ml in YPD + 20% FBS (Fetal Bovine Serum, Sigma-Aldrich®, Brazilië) werd geïncubeerd bij 37 ° C, met ronddraaiende schudden bij 200 rpm. Na 3 uur incubatie werden monsters van de kweken gemengd met een gelijk volume 10% formaldehyde verdere ontwikkeling arrestatie en het gemiddelde morfologie index (MI) werd bepaald [18]. Waarden dichtbij 1 geven een populatie van bolvormige gistcellen en waarden dicht bij 4 geven een populatie van ware hyphal cellen, met waarden tussen 1 en 4 aangeeft of gemengde pseudohyfale morfologieën.
Fosfolipase assay
fosfolipase activiteit werd geschat door de eigeel agar methode [19], met inocula bereid uit overnacht NGY (Neopeptone (Difco, Detroit, MI) 1 g /l, glucose 4 g /l en gistextract 1 g /l) kweken gestandaardiseerd met 2 x 10 5 cellen /ml.
Candida albicans
doding door polymorfonucleaire neutrofielen
PMN vers geïsoleerd uit bloedmonsters van een gezonde vrijwilliger op de dag van het experiment [20] werd gesuspendeerd in Eagle's minimaal essentieel medium (Gibco) + 20 mM HEPES, pH 7,2, en gestandaardiseerd 8 x 10 5 PMN /mL. C. albicans
cellen gedurende de nacht gekweekt in NGY gewassen en geresuspendeerd bij 5 x 10 6 gisten /ml in HEPES-gebufferde Eagle's minimaal essentieel medium met een tiende volume van vers humaan plasma. Gelijke volumina van PMN en gist suspensies werden gemengd en geïncubeerd bij 37 ° C gedurende 3 uur met rotatie bij 50 rpm. De fagocytose van C. albicans
werden vastgesteld door het tellen in drievoud van het aantal gisten binnen of bevestigd in 100 PMN's [21].
Statistische analyse
De gegevens werden geanalyseerd met behulp van de statistische software "GraphPad", versie 3.0 . De resultaten werden weergegeven als gemiddelde ± standaarddeviatie, en verschillen werden geanalyseerd met de Mann-Whitney-test. Voor alle analyses werd P als een standaard waarde van 0,05 de standaardafwijking van 95%.
Resultaten
Patiënten demografische gegevens
patiënt klinische en demografische gegevens worden samengevat in Tabel 1. Voor beide gebieden, de meerderheid van de patiënten had arteriële hypertensie de meest voorkomende onderliggende ziekte. Daarnaast is de meest voorkomende leeftijdsklasse was 35-64 jaar (tabel 1).
Microbiology profilering
Candida spp. in orale candidiasis
Van de stammen verkregen uit Natal, RN (noordoosten), was het mogelijk om gisten vanaf 70 isoleren van de 111 patiënten (63,1%), terwijl uit Maringa, 12 van de 43 (27,5%) Candida
spp positieve kweken werden verkregen. Species distributie voor beide regio's wordt beschreven in Tabel 2. C. albicans
was de meest overheersende die zijn aangetroffen in beide steden, gevolgd door C. tropicalis
. In slechts een enkele patiënt uit Maringa was het mogelijk om drie stammen die behoren tot verschillende Candida
species isoleren (C. albicans
, C. glabrata
, C. tropicalis
) .table 2 soorten distributie van Candida spp. geïsoleerd van de mondholte van niertransplantatie ontvangers uit twee verschillende geografische regio's in Brazilië: Natal, RN en Maringa, PR
Species
Natal (n,%)
Maringá (n,% )
Totaal (n,%)
Candida albicans
59 (77,6)
17 (22,4)
76 (100)
Candida dubliniensis
2 (100)
0 (0) kopen van 2 (100 )
Candida glabrata
2 (66.7)
1 (33.3)
3 (100)
Candida tropicalis
3 (75)
1 (25)
4 (100)
Candida orthopsilosis
2 (100)
0 (0) kopen van 2 (100)
Candida metapsilosis
Pagina 2 (100)
0 (0) kopen van 2 (100)
Total
69 (78,4)
19 (21,6)
88 (100)
van de nota, maar een monster van elke patiënt werd verzameld, met uitzondering van drie verschillende patiënten uit de regio ten zuiden van Brazilië. Van patiënt 37, werd stam 06S verkregen uit speeksel, terwijl de stam 06 L orale laesie. Patiënt 38 had twee C. albicans
stammen verzameld uit dezelfde laesie, die twee duidelijk verschillende fenotypes (10S, glad en 10R, met ruwe kolonies). 40 patiënten toonde twee verschillende lesies en twee stammen werden verkregen, één van de tong en andere van het tandvlees (15 T en 15G respectievelijk) naast een stam verkregen uit speeksel (15S).
ABC typering van Candida albicans
DNA van alle 76 stammen van C. albicans
en de referentie-stammen ATCC90028 en SC5314 werd ABC typen ingediend. Genotype A de meest voorkomende isolaten met 58 (76,4%), gevolgd door Genotype C, met 15 stammen (19,27%) en genotype B, met 3 isolaten (3,9%; tabel 3). Dezelfde trend werd waargenomen wanneer de verkregen uit elke regio afzonderlijk stammen werden geanalyseerd: In het noordoosten van Brazilië, C. albicans
genotype A was de meest voorkomende, met 42 isolaten (71,2%), gevolgd door Genotype C (n = 14 isolaten; 23,7%) en Genotype B, met 3 stammen (5,1%). De hogere incidentie van genotype A werd ook gevonden in het zuiden van het land met 16 isolaten (94,1%), gevolgd door genotype C (n = 1 isolaat; 5,9%). C. albicans
genotype B niet werd waargenomen voor de isolaten verkregen uit deze regio (tabel 3) .table 3 Patiënten die deelnamen aan dit onderzoek, geografische regio ABC genotypering en virulentie attributen van Candida albicans
Isoleer aantal
klinische toestand
Procedence
ABC typen
fosfolipase activiteit PZ (cm)
morfologie Index (MI) verhuur No van C. albicans cellen gefagocyteerd 100 PMN * (%)
1
Colonization
Natal
B
0,6 ± 0.07
2.46 ± 0.70
134 ± 15,3
2
Colonization
Natal
Een
0.55 ± 0.04
3.43 ± 0.77
115 ± 14,6
3
Colonization
Natal
Een
0.48 ± 0.06
3.22 ± 0.64
66 ± 7,9
5
Infectie
Natal
C
0.58 ± 0.02
2.23 ± 0.57
98 ± 6.7
6
Colonization
Natal
Een
0.53 ± 0.01
2.24 ± 0.51
100 ± 12,5
8
Colonization
Natal
Een
0.57 ± 0.04
1,86 ± 0.43
130 ± 19
10
Infection
Natal
B
0,56 ± 0,12
2.17 ± 0.62
166 ± 8,4
11
Colonization
Natal
C
0.58 ± 0.08
2.15 ± 0.77
28 ± 3,5
12
Infection
Natal
Een
0.54 ± 0.02
2.46 ± 0.56
150 ± 11,1
13
kolonisatie
Natal
C
0,6 ± 0,03
2.17 ± 0.65
126 ± 31,6
17
Colonization
Natal
Een
0.52 ± 0.03
3.63 ± 0.63
98 ± 20,2
20
Colonization
Natal
Een
0.44 ± 0.01
2,85 ± 0,81
86 ± 21,2
21
Colonization
Natal
Een
0,4 ± 0,06
2.78 ± 0.92
114 ± 21,5
23
Colonization
Natal
C
0.53 ± 0.09
2.45 ± 0.67
101 ± 11,4
24
Infection
Natal
Hotels A
0.51 ± 0.10
3.05 ± 0.74
132 ± 13,9
28
Infection
Natal
Een
0.55 ± 0.04
2,84 ± 0,80
165 ± 9,5
30
Colonization
Natal
C
0,52 ± 0.04
2.17 ± 0.62
119 ± 20
31
Colonization
Natal
Een
0.49 ± 0.03
2.64 ± 0.82
129 ± 15
32
Colonization
Natal
Een
0.49 ± 0.12
2.81 ± 0.65
123 ± 13,2
34
Colonization
Natal
Een
0.52 ± 0.07
2.36 ± 0.64
156 ± 16,5
37
Colonization
Natal
B
0.57 ± 0.01
3.38 ± 0.80
124 ± 19,1
40
Infection
Natal
Een
0.51 ± 0.06
3,7 ± 0,56
142 ± 15,9
41
Kolonisatie
Natal
Een
0.54 ± 0.03
2,7 ± 0,69
172 ± 21,1
44
Infection
Natal
Een
0.48 ± 0.03
2,8 ± 0,77
176 ± 11,6
46
Colonization
Natal
Een
0.46 ± 0.04
2.81 ± 0.77
172 ± 20,1
50
Colonization
Natal
Een
0,54 ± 0.04
3.24 ± 0.88
157 ± 36,6
51
Colonization
Natal
Een
0.51 ± 0.02 kopen van 2 ± 0,43
130 ± 19,5
53
Colonization
Natal
C
0.53 ± 0.09
2.79 ± 0.71
132 ± 15,9
54
Kolonisatie
Natal
Een
0.47 ± 0.02
1,8 ± 0,40
132 ± 9.2
60
Colonization
Natal
C
0.57 ± 0.03
2.15 ± 0.36
146 ± 9
61
Colonization
Natal
Een
0.49 ± 0.01
2.48 ± 0.75
142 ± 9.2
70
Colonization
Natal
C
0,51 ± 0,03
2.99 ± 0.50
140 ± 12,7
72
Colonization
Natal
C
0.46 ± 0.04
2.31 ± 0.61
136 ± 9
82
Colonization
Natal
C
0.55 ± 0.03
3.36 ± 0.93
130 ± 13,2
85
kolonisatie
Natal
C
0.56 ± 0.04
3,15 ± 0,83
144 ± 9,5
107
Colonization
Natal
C
0.57 ± 0.01
2.39 ± 0.63
156 ± 10,1
06A
Colonization
Maringá
Een
0,5 ± 0.02
2,34 ± 0,71
80 ± 17,4
06 L
Infection
Maringá
Een
0,56 ± 0,07
2.94 ± 0.58
75 ± 8,7
10Li
Colonization
Maringá
A
0.55 ± 0.01
2,42 ± 0,70
176 ± 6.1
10S
Colonization
Maringá
Hotels A
0,64 ± 0.01
2.54 ± 0.76
105 ± 14,7
12A
Colonization
Maringá
Een
0.49 ± 0.02
3,3 ± 0,79
59 ± 16,8
12 L
Infection
Maringá
Een
0.51 ± 0.05
3.2 ± 0.68
90 ± 13,2
15A
Colonization
Maringá
Een
0.42 ± 0.02
2,96 ± 0,83
116 ± 27,1
15G
Infection
Maringá
Een
0,42 ± 0,03
3.13 ± 0.81
86 ± 21,9
15 L
Infection
Maringá
A
0.47 ± 0.08
2.58 ± 0.68
76 ± 16,5
18A
Colonization
Maringá
C
0.56 ± 0.11
3.05 ± 0.67
102 ± 11,2
111 L
kolonisatie
Natal
C
0.55 ± 0.03
2,6 ± 0,70
80 ± 17,4
111R
Colonization
Natal
C
0,6 ± 0.15
4 ± 0.00
11 ± 3.2
ATCC90028
Reference
Een
0,7 ± 0,08
3,82 ± 0,5
158 ± 17,5
SC5314
Reference
Een
0.52 ± 0.04
3,28 ± 0,81
137 ± 20,6
de isolaten werden verkregen uit de mondholte van niertransplantatie ontvangers van Natal, RN en Maringa, PR, Brazilië.
Candida albicans
microsatelliet typen versus ABC genotypering
we willekeurig geselecteerde 48 isolaten van C. albicans
waaronder een aantal stammen die behoren tot genotype A (21 van Natal en 10 uit Maringa) een al de andere stammen die behoren tot genotypen B en C uit beide regio's en uitgevoerd microsatelliet genotypering. Het genomische DNA van elk van de 48 isolaten succesvol geamplificeerd met de M13 primer die target genoom repetitieve sequenties. De DNA amplificatie gegenereerde goed gedefinieerde band patronen, variërend van 100 bp tot 2 kb. De microsatelliet techniek bleek voldoende onderscheidend vermogen voor het herkennen van intraspecifieke variatie (figuur 1). Zoals verwacht, de externe controle stammen van C. albicans
, SC5314 en ATCC90028, werden in totaal verschillende clusters van het dendrogram geplaatst analyse uitgevoerd onder toepassing GelCompar II, waaruit de efficiëntie van de techniek scheiden stammen geïsoleerd uit verschillende geografische gebieden. Deze controlestammen toonde 75% overeenkomst en werden tezamen in een andere cluster van alle andere klinische isolaten (figuur 1) geplaatst. Figuur 1 Ongewogen paar-groep methode met rekenkundige gemiddelden dendrogram met 2% van de tolerantie van de 50 stammen van Candida albicans klinische isolaten.
We konden geen enkele bijzondere cluster van een van beide koloniseren of het infecteren van stammen niet detecteren. Bovendien, in beide gevallen, stammen met 100% overeenkomst verkregen uit verschillende patiënten gevonden. Met betrekking tot de vergelijking van genetische verwantschap in de twee verschillende geografische gebieden van Brazilië, kunnen we een verrijkte cluster Maringa (Zuid), waarbij 80% van de stammen elkaar geplaatst observeren. Bovendien, ze varieerden van 80% tot 93% gelijkenis tussen hen.
Andere interessante bevinding is geassocieerd met enige correlatie waargenomen tussen de ABC type C. albicans Kopen en het hoge percentage gelijkenis tussen deze isolaten wanneer microsatelliet primer M13 werd gebruikt. In de meeste gevallen, stammen met identieke percentage van overeenkomst bepaald primer M13, had ook dezelfde A of C genotype (met uitzondering van stammen 02 en 85 van Natal en 15 T en 18A van Maringa, A en C genotypes in beide gevallen). Daarnaast werden C. albicans
genotype C stammen van Natal in twee goed gedefinieerde van elkaar gescheiden clusters bewezen hoge verwantschap (meer dan 90% gelijkenis in hetzelfde cluster) geplaatst. Met betrekking tot genotype B, twee van de drie isolaten vertoonde gelijkenis van 94%, in hetzelfde cluster (figuur 1) geplaatst.
Wanneer verder verschillende stammen werden verkregen van verschillende monsters van dezelfde patiënt, hadden ze allemaal ABC hetzelfde genotype (genotype A). Toch microsatelliet met behulp van primer M13 vertoonden hogere onderscheidend vermogen, omdat deze stammen niet identiek met de nieuwste techniek werden beschouwd, blijkt een zekere mate van genetische variabiliteit, wanneer deze methode werd gebruikt.
Virulentie attributen van Candida albicans Hotels A, B en C genotypes
voor alle virulentiefactoren getest, we alleen uitgevoerd voor statistische analyse vergelijkingen tussen stammen die behoren tot genotypes A en C, vanwege het lage aantal isolaten behorend tot genotype B gevonden. Met betrekking tot productie fosfolipase alle stammen konden het enzym, ongeacht of zij afkomstig zijn van episodes van kolonisatie of infectie. Voor genotype A, een Mean Pz van 0,51 ± 0,04 werd verkregen, terwijl het voor genotype C, een gemiddelde van 0,55 ± 0,05, terwijl voor de genotype B, de Mean Pz was 0,57 ± 0,07. Geen statistisch verschil gevonden als stammen die behoren tot genotypes A en C werden vergeleken (Tabel 3).
Wanneer de morfologie index (MI) werd gebruikt om te scoren cellen morfologie, kon geen duidelijke verschillen worden waargenomen voor de drie A, B of C genotypes. Het vermogen van de stammen om de morfologie van kiem cellen veranderen hyfen wanneer gekweekt in de aanwezigheid van YPD + 20% FBS werd gecontroleerd voor stammen die behoren tot de drie genoemde genotypen. Cellen vooral aangetroffen als pseudohyphae, met een gemiddelde MI variërend van 2,66 ± 0,61 (genotype C) tot 2,77 ± 0,69 (genotype A). De gemiddelde MI isolaten van genotype B was 2,67 ± 0,71. Geen statistisch verschil gezien tussen de isolaten (tabel 3).
We onderzochten ook de mogelijkheid van de verschillende stammen te weerstaan fagocytose door PMNs. Daarom is het aantal C. albicans
cellen gefagocyteerd door 100 PMN werd na drie uur co-incubatie van beide cellen. C. albicans
genotype C was resistent tegen PMN vallen. Stammen die behoren tot genotype B had een gemiddelde van 141,33 ± 14.27 cellen gefagocyteerd 100 PMN. Stammen die behoren tot genotype C waren significant beter bestand tegen de aanval van fagocytische cellen dan de isolaten behorend tot genotype A (gemiddelde van 109,93 ± 12,29 121,67 ± 16,06 versus, respectievelijk, Tabel 3).
Virulentie attributen van Candida albicans
stammen verkregen uit twee verschillende geografische regio's van Brazilië (Noordoost en Zuid).
Wanneer de pathogene factoren werden vergeleken onder alle stammen verkregen uit de twee geografische regio's, verkregen uit Maringa (Zuid) stammen uitgedrukt efficiënter alle virulentiefactoren in vitro. Dit verschil werd als statistisch significant voor resistentie tegen fagocytose door PMN (Tabel 4). Interessant is dat 40% van de isolaten verkregen uit Maringa werden verkregen van laesies, terwijl slechts 18,4% van de isolaten werden Natal infecteren (tabellen 3 en 4) .table 4 virulentie kenmerken van Candida albicans isolaten verkregen uit de mondholte van niertransplantatie 0,05.
