Abstracte achtergrond
Betel kauwen is aangetoond dat vatbaar maken voor parodontale aandoeningen en orale kanker. Studies tonen aan dat mensen met tandvleesontsteking hebben meer kans om te testen positief voor Helicobacter pylori (H. pylori)
. Het is niet bekend of de laesies door betel quid en de resulterende chemische veranderingen predisponeren voor kolonisatie door H. pylori
. Verder is de rol van dit organisme in orale kanker is niet bekend. Ons doel was om de aanwezigheid van H. pylori
in orale laesies dertig orale kankerpatiënten te bepalen en om de aanwezigheid van IgG-antilichamen tegen H. pylori te bepalen
in orale kankerpatiënten die betelnootkauwers en niet betelnootkauwers, gezonde betelnootkauwers en gezonde niet-betelnootkauwers en de aanwezigheid van H
vergelijken. pylori
in deze vier groepen. Deze case-control studie werd uitgevoerd aan het Cancer Institute Maharagama en het Departement Microbiologie, Faculteit der Medische Wetenschappen, Universiteit van Sri Jayewardenepura.
Methods
Honderd zeventig drie onderwerpen, van wie er drieënvijftig waren patiënten met orale kanker aan de Cancer Institute Maharagama, zestig gezonde betelnootkauwers en zestig gezonde niet-betelnootkauwers van het Godsdienstige en Welzijn service Centre Maharagama werden getest op H. pylori
door serologie. Dertig orale biopten van mondkanker patiënten werden gekweekt onder Microaërofiele voorwaarde om H. pylori
isoleren. De statistiek gebruikt was Chi-kwadraat test.
Resultaten
van de vijftig-drie mondelinge kankerpatiënten, vierenveertig waren betelnootkauwers. Onder de 53 mondelinge kankerpatiënten onderzocht, tien vierenveertig (10/44 = 22,7%) van de patiënten die zijn betelnootkauwers en vier van de negen (4/9 = 44,4%) van de patiënten die niet-betelnootkauwers werden positief gedetecteerd voor IgG antilichaam tegen H. pylori
. In de gezonde groep (betelnoten kauwers en niet betelnootkauwers) tien (16,7%) van de gezonde betelnootkauwers testte positief voor H. pylori
door serologie. Geen van de gezonde, niet-betelnootkauwers positief getest op H. pylori
Veertien [26,4%] van orale kankerpatiënten positief getest op H. pylori
door serologie, waarvan er twee de cultuur positief waren ook (alleen dertig monsters werden gekweekt). De aanwezigheid van H. pylori
in betelnootkauwers (met of zonder kanker) in vergelijking met niet-betelnootkauwers was statistisch significant. (Chi-kwadraat test p & lt; 0,05) Het gebruik van tabak en areca noot in betelnootkauwers significant was met de aanwezigheid van H. pylori
(p & lt; 0,05).
Conclusie
Er is een aanzienlijke hoger aandeel H. pylori
in betelnootkauwers vergelijking met niet-betelnootkauwers maar niet tussen orale kankerpatiënten vergeleken met patiënten zonder mondkanker. Vandaar Betel kauwen vatbaar maken voor kolonisatie met H. pylori
in het spijsverteringskanaal door middel van het slikken van de quid of tijdens betelnoten kauwen
Electronic aanvullend materiaal
De online versie van dit artikel (doi:.. 10 1186 /1472-6831-9-23) bevat aanvullend materiaal, dat beschikbaar is voor geautoriseerde gebruikers is. achtergrond
Helicobacter pylori
is een micro-aerofiele bacterie vooral gevonden in de maag [1]. Infectie met dit organisme is wijdverspreid, zoals Sri Lanka [2-4] en epidemiologische studies hebben duidelijk een belangrijke etiologische rol van H. pylori
voor maagzweren, gastrische MALT [mucosa geassocieerde lymfoïde weefsels] lymfoom en distale maag aangetoond kanker [5, 6]. Een aantal virulentie kenmerken geïdentificeerd die kunnen worden gekoppeld aan de ontwikkeling van zweren en kanker in de maag. Het organisme heeft een urease-enzym dat de lokale concentratie van ammoniumionen (a cytotoxine) toeneemt; het produceert een vacuolating cytotoxine (VacA), wat leidt tot apoptose en necrose; injecteert een eiwit (cagA) in gastheercellen, die intracellulaire signalering gebeurtenissen beïnvloedt. Het netto resultaat van deze en andere kenmerken virulentie de ontwikkeling van maagzweren en veranderde celcyclus gebeurtenissen die betrokken zijn bij de ontwikkeling van maagkanker [7].
Er zijn tegenstrijdige resultaten gerapporteerd in de literatuur over de isolatie van H. pylori
van tandplak. Verschillende studies wijzen op een lage prevalentie van H. pylori
in de mondholte van hun patiënten en van mening dat het niet een belangrijke omgeving voor deze bacterie [8, 9]. Sommige studies suggereren dat H. pylori
slechts een tijdelijke aanwezigheid in de mondholte en ook de antagonistische effecten van sommige orale bacteriën H. pylori
die kolonisatie door dit organisme in de mondholte kan remmen 10 aantonen [ , 11]. Anderzijds, auteurs die deze bacterie in nagenoeg hun gehele studiepopulatie van mening dat de mondholte kan fungeren als een reservoir voor herinfectie van de maag en dat H. pylori
bevindt zich in de normale microbiota in de mond [12-14].
Mondkanker vertegenwoordigt ongeveer 3% van alle kankers in de wereld en staat 6
e wereldwijd. Vijftig acht procent van orale kankers zijn geconcentreerd in Zuid- en Zuidoost-Azië met Pakistan met de hoogste gerapporteerde incidentie [15]. Mondelinge kanker is ook gebruikelijk in de Sri Lankaanse bevolking. Volgens de kanker register in Sri Lanka het eiland brede incidentie van orale gespecificeerd en niet gespecificeerd, oro-keelholte kanker voor het jaar 2000 is 14,6%
Epidemiologische studies hebben aangetoond dat betel quid kauwen is een populaire gewoonte in Aziatische landen.; Het is een veel voorkomende gewoonte in Sri Lanka, die wordt geassocieerd met een verhoogd risico op mondkanker en orale slijmvliezen sub fibrose [16]. De samenstelling van betel quid varieert met verschillende geografische locaties maar de algemene bestanddeel van quid is areca noot [betelpalm
] betelblad, limoen met of zonder tabak. Studies hebben ook aangetoond een hoge prevalentie van parodontitis bij betel quid kauwers in vergelijking met niet-betel quid chewers [17, 18, 30]. Slechte plaque controle zouden de hogere prevalentie van parodontitis in betel quid kauwers uit te leggen [19]. Andere risicofactoren voor mondkanker zijn roken en alcoholgebruik [18, 19, 31]
Aangezien H. pylori
is geclassificeerd als een klasse I carcinogeen het relevant is om te weten of de laesies geproduceerd door betelnoten kauwen en de resulterende chemische veranderingen die plaatsvinden in de mondholte kan de kolonisatie te vergemakkelijken door H. pylori
dus leidt tot het ontstaan van kanker. De rol van dit organisme in predispositie voor orale kanker is niet bekend. Daarom was ons doel om de aanwezigheid van H. pylori
in de mondholte van een Sri Lankaanse bevolking met mondkanker en of betelnoten kauwen kan kolonisatie van dit organisme waardoor het kankerverwekkende effect van tabak en areca noot, die de verbetering van zijn studie te vergemakkelijken hoofdbestanddelen van betel quid.
In dit artikel laten we zien dat betelnoten kauwen predisponeert voor kolonisatie door H. pylori
, maar dat lijkt niet tot een vereniging met orale kanker.
Methods
honderd en drieënzeventig onderwerpen [119 mannen; 54 vrouwen] in de leeftijdsgroep 30-70 jaar werden geïncludeerd in de studie. Drieënvijftig proefpersonen waren patiënten met mondkanker van het Cancer Institute Maharagama Sri Lanka, zestig gezonde betelnootkauwers en zestig gezonde niet-betelnootkauwers waren afkomstig uit de religieuze en Welfare Service Center, Maharagama, Sri Lanka. De studie werd goedgekeurd door de ethische commissie van de Faculteit der Medische Wetenschappen, Universiteit van Sri Jayewardenapura. Uitsluitingscriteria waren patiënten die een endoscopische bewijs van gastritis gehad of heeft een voorgeschiedenis van maagkanker of maagzweer, de behandeling met H2-receptor antagonist, protonpompremmers of antibiotica in de voorafgaande zes maanden. De proefpersonen werden uitgesloten van de gezonde niet-betelnoten chewer subgroep als zij zelfs een verpakking van betelnoten op elk moment had verbruikt.
Alle proefpersonen kregen een vragenlijst gegeven, het opnemen van demografische gegevens, roken, alcoholgebruik, orale hygiënische praktijken en slapen met quid in de mond 's nachts.
Oral biopten van dertig mondelinge kankerpatiënten werden gekweekt onder micro aerofiele voorwaarden H. pylori
isoleren. Een biopsie van elke patiënt werd in een speciaal transportmedium voor H. pylori
[Portagerm, Frankrijk] en respectievelijk naar het laboratorium gebracht kan worden verricht. De biopten werden geïnoculeerd op bloed agar met Campylobacter Selective Supplement (Skirrow) [Oxoid, UK] en geïncubeerd bij 37 ° C in een micro-aërobe omgeving voor vier dagen. H. pylori
werd geïdentificeerd door routinematige biochemische werkwijzen
vijf ml bloed werd verzameld uit elk van de op de vier groepen.; Het bloed werd gecentrifugeerd bij 3500 rpm gedurende 15 minuten en serummonster supernatant afgescheiden en bewaard bij -80 ° C. H. pylori
IgG-antilichamen in serum werden gedetecteerd door een commercieel enzym-gekoppelde immunosorbant assay [Novum Diagnostica, UK] volgens de instructies van de fabrikant. Absorptiewaarden werden opgenomen met een micro- titer plaatlezer met een 450 nm filter en de resultaten werden berekend volgens de instructies van de fabrikant. Deze test heeft een gevoeligheid van & gt; 95% en een specificiteit van & gt; 95%. De betelnootkauwers en non-betelnootkauwers werden niet biopsied vanwege ethische kwesties.
Statistische analyse
Statistische analyse werd uitgevoerd met behulp van de Chi-kwadraat test
Resultaten
De associatie tussen de aanwezigheid van H. pylori
in orale kankerpatiënten die betelnootkauwers, non betelnootkauwers en gezonde betelnootkauwers en niet betelnootkauwers zijn getoond in tabel 1. van de drieënvijftigjarige orale kankerpatiënten, vierenveertig waren betelnootkauwers. Onder de 53 mondelinge kankerpatiënten onderzocht, tien vierenveertig (10/44 = 22,7%) van de patiënten die zijn betelnootkauwers en vier van de negen (4/9 = 44,4%) van de patiënten die niet-betelnootkauwers werden positief gedetecteerd voor IgG antilichaam tegen H. pylori
. In de gezonde groep (betelnoten kauwers en niet betelnootkauwers) tien (16,7%) van de gezonde betelnootkauwers testte positief voor H. pylori
door serologie. Geen van de gezonde niet-betelnootkauwers positief voor H. pylori
(tabel 1) .table 1 Detectie van IgG serum tegen H. pylori
bij patiënten met orale kanker (betelnootkauwers /non betelnootkauwers) vergeleken gezonde controlepersonen (betelnootkauwers /non betelnootkauwers)
H. pylori
Groep 1
Oral kankerpatiënten betelnootkauwers
Groep 2
Mondelinge kankerpatiënten niet betelnootkauwers
Groep 3
Gezonde Betel kauwers
Group 4
gezonde, niet-betelnoten kauwers
Totaal van de groepen 1-4
Detectie van H. pylori IgG in betelnootkauwers
(Gps.1 & amp; 3)
Positief
10 (22,7%)
4 (44,4%)
10 (16,7%)
0
24
20
Negatief
34 (77,3%)
5 (55,6%)
50 (83,3%)
60 (100%)
149
84
Total
44
9
60
60
173
104
Of veertien (26,4%) mondelinge kankerpatiënten (betelnoten kauwers en niet betelnootkauwers) die positief getest op H. pylori
door serologie, twee waren cultuur positief (slechts dertig monsters werden gekweekt) en ze waren ook betelnootkauwers.
van de 104 betelnootkauwers (met of zonder kanker) 20 (19,2%) waren H. pylori
positief en de helft van hen waren mondelinge kankerpatiënten (10/20), terwijl de andere helft waren gezonde proefpersonen (10/20). Vergeleken met betel kauwen gezonde controles, de aanwezigheid van serum IgG tegen H. pylori
in Betel kauwen orale kankerpatiënten was niet statistisch significant. (Chi kwadraat test p gt; 0,05) - Tabel 1.
Er was een significant verschil in aanwezigheid van H. pylori
in betelnootkauwers (met of zonder kanker) in vergelijking met niet-betelnootkauwers (met of zonder kanker ) (20/104 en 4/69 respectievelijk Chi-kwadraat test) (p & lt; 0,05) - Tabel 2.Table 2 Aanwezigheid van Serum IgG tegen H. pylori
in Betel kauwers en niet Betel kauwers
< col>
Betel Chewers
Non Betel Chewers
Total
H. pylori-positieve
20 (19,2%)
4 (5,8%)
24
H. pylori negatieve
84 (80,8% )
65 (94,2%)
149
Total
104
69
173
X2 = 15,0, (p & lt; 0,05); Significante
De associatie tussen aanwezigheid van serum IgG tegen H. pylori
in betelnootkauwers (met of zonder kanker) met betrekking tot andere factoren zijn weergegeven in Tabel 3. Het gebruik van tabak en Areca moer in betelnootkauwers was significant met de aanwezigheid serum IgG tegen H. pylori
(p & lt; 0,05). Er was geen significant verschil in de aanwezigheid van serum IgG tegen H. pylori
in betelnoten kauwers en hun praktijken, zoals het slikken van de quid, slapen met quid tijdens de nacht en het wassen van de mond na het kauwen betelnoten. Verder was er geen significant verschil in de consumptie van alcohol of roken met de aanwezigheid van serum IgG tegen H pylori
in alle vier de groepen (p & gt; 0,05) .table 3 Aanwezigheid van serum IgG tegen H pylori
in Betel kauwers (mondelinge kankerpatiënten en gezonde betelnootkauwers) ten opzichte van andere factoren
|
H pylori
positieve (n = 20)
H pylori
negatief (n = 84)
Chi-kwadraat test
(tabel waarde 3,84; p = 0,05)
Het gebruik van tabak en areca noot
19 [95%]
53 [63,1%]
p & lt; 0.05
significant
Het inslikken van de quid
4 [20%]
14 [16,7%]
p & gt; 0.05
Niet significant
Slapen met quid 's nachts
10 [50%]
4 [4,8%]
p & gt ; 0.05
Niet significant
Het wassen van de mond routinematig na het kauwen betelnoten
12 [60%]
62 [73,8%]
p & gt; 0.05
Niet significant
Van de 119 mannen zeventien (14,3%) waren positief voor serum IgG tegen H. pylori en van de 54 vrouwen getest, zeven (13%) waren positief voor serum gedetecteerd IgG tegen H. pylori. Derhalve is er geen significant verschil in de aanwezigheid van antilichamen tegen H. pylori tussen mannen en vrouwen. Tabel 4.Table 4 Detectie van H. pylori
antilichamen tussen betelnoten kauwen mannen en vrouwen en tussen de leeftijdsgroepen 31-50 jaar en 51-70 jaar: Males - 119; Vrouwtjes - 54;
|
Mondkanker betelnootkauwers
Mondkanker non betelnootkauwers
Gezond betelnootkauwers
|
Mannetjes
|
|
|
|
H. pylori
+ ve
7
3
7
17 (14,3%)
H. pylori-ve
31
3
39
73 (61,1%)
Females
|
|
|
|
H. pylori + ve
3
1
3
7 (13,0%)
H. pylori-ve
3
Pagina 2
11
16 (29,6%)
31-50 yrs
|
|
|
|
H. pylori + ve
1
1
6
8 (9,4%)
H. pylori-ve
10
1
34
45 (53,0%)
51-70 yrs
|
|
|
|
H. pylori + ve
9
3
4
16 (18,2%)
H. pylori-ve
24
4
16
44 (50,0%)
Discussie
In de huidige studie, de associatie tussen mondelinge kankerpatiënten kauwen betelnoten en niet betelnootkauwers, gezonde betelnoten kauwers en niet betelnoten kauwers en de aanwezigheid van serum IgG tegen H. pylori
werden geëvalueerd. Ondernemingen de resultaten tonen aan dat het percentage serum IgG tegen H. pylori
hoger bij betelnootkauwers (Mondkanker patiënten en gezonde proefpersonen) in vergelijking met gezonde niet-betelnootkauwers, en dit was statistisch significant.
een studie van 20 patiënten uit het Verenigd Koninkrijk met mondkanker, waarbij zowel cultuur en 16S rDNA amplificatie van oppervlakkige en diepe tumorweefsel aangetoond uiteenlopende organismen, die geen van Helicobacter soorten
[20]. Zoals betelnoten kauwen is helemaal niet gebruikelijk in het Verenigd Koninkrijk is het redelijk om te veronderstellen dat al deze patiënten niet betelnoten heeft kauwen. Het effect op de orale flora van mondkanker en pruimtabak eerder onderzocht. Een onderzoek bij patiënten met orale carcinoma gebleken dat het aantal micro-organismen op het oppervlak van orale laesies was hoger dan die van gezonde mucosa [21] en een onderzoek naar de effecten van pruimtabak (gutkha) in een populatie in India bleek dat zowel kauwen en rooktabak verminderde speekselvloed en veranderde de normale orale microflora [22]. Sommige eerdere studies hebben onderzoek gedaan naar de aanwezigheid van H. pylori
in mondkanker. Een studie van H. pylori
in maag- en orale monsters van patiënten met een maagzweer en mondkanker is gebleken dat H. pylori
konden worden gedetecteerd in 12% van de orale monsters en dat de groei van H. pylori
werd geremd door orale microflora [10]. Ook een onderzoek bij patiënten met benigne aften en mondkanker aangetoond dat H. pylori
kon worden gedetecteerd in 11-15% afhankelijk van de gebruikte methode, hoewel het organisme niet gekweekt kan zijn en de auteurs gesuggereerd dat er geen associatie tussen de orale laesies en Helicobacter pylori
[23].
Voor zover wij zijn ons bewust van de interactie tussen betelnoten kauwen, mondkanker en kolonisatie door H. pylori
zoals tot dusver niet onderzocht.
Voorheen gepubliceerde gegevens tonen een aantal orale ziekten die samenhangen met betelnoten kauwen [24, 25] met name orale sub slijm fibrose en mondelinge carcinoom. Er is bewijs dat moer extracten Areca remmen groei, gehechtheid en matrix eiwitsynthese van gekweekte gingivale fibroblasten, waarin het begrip dat quid kauwen kunnen parodontale gezondheid beïnvloeden en dus vatbaar voor kolonisatie [26] Betel ondersteunt. Bovendien Areca moer extract is aangetoond dat interfereert met de werking van neutrofielen, opnieuw suggereert dat Areca moer bevorderen de bacteriële kolonisatie en periodontale ziekte [27]. In vitro bewijs suggereert dat Areca moer extracten de groei van verschillende orale micro-organismen [28] kan onderdrukken. Modulatie van de normale parodontale verdediging kon een gunstig klimaat voor kolonisatie van H. pylori
. Dit wordt ondersteund door de vorige studie van Gebara et al [29], die een hoge prevalentie van H. pylori
infectie bij patiënten met parodontitis vertoonden.
Het feit dat H. pylori
werd vaker gezien bij betelnoten kauwers, in vergelijking met niet-betelnootkauwers en statistisch significant in dit onderzoek, ondersteunt deze hypothese. Verder in deze studie werd opgemerkt dat van de 44 mondkanker betelnoten kauwen patiënten 10 positief getest op serum IgG tegen H. pylori
. Onder de betelnootkauwers die gebruik maken van zowel tabak en areca noot waren significant geassocieerd met de aanwezigheid van H. pylori
ondersteunen de hypothese dat zowel tabak en Areca moer de parodontale afweer kan moduleren waardoor de kolonisatie van dit organisme bevoordelen.
Volgens epidemiologische studies de plaats van de infectie van H. pylori
kan variëren. Mogelijke plaatsen voor de kolonisatie van H. pylori
kan maag of mondholte of beide. Antilichamen worden geproduceerd als gevolg van een systemische immuunrespons tegen dit pathogeen. In deze studie hebben we de aanwezigheid van H. pylori
antilichamen in het serum van patiënten en gezonde betelnootkauwers maar niet bij gezonde niet-betelnootkauwers gedetecteerd. We bevestigden dat de antilichamen van dit organisme dat in het serum gedetecteerd alleen werden door infectie van H. pylori
in de mondholte met uitzondering van H. pylori
infectie van de maag. Deze bevestiging werd uitgevoerd door het bovenste maagdarmkanaal endoscopie in alle mondkanker patiënten, maar niet in de gezonde controles. Om de resultaten verder te bevestigen, werden biopten getest door de cultuur van dertig van de orale laesies van orale kankerpatiënten. Vanwege ethische redenen hebben we niet biopten van de controlegroepen te nemen. In alle groepen echter een geschiedenis van behandeling met H2-receptorantagonisten, protonpompremmers of antibiotica de voorgaande zes maanden was uitsluitingscriteria Hoewel statistische significantie tussen betelnootkauwers en niet betelnootkauwers werden alleen serologie, kan geconcludeerd dat de plaats van kolonisatie van H pylori
inderdaad de mondholte door veranderingen in orale mucosa geïnduceerd door betel kauwen omdat het aanzienlijk in betelnootkauwers vergelijking met niet betelnootkauwers.
Conclusie
belangrijk observatie van onze studie is dat 19,2% van alle betelnootkauwers waren H. pylori
positief in vergelijking met niet-betelnootkauwers (5,8%). De implicatie van deze bevinding is dat betel quid heeft een aantal gevolgen voor het verstrekken van een gunstig klimaat voor de kolonisatie door H. pylori
. Testen van H. pylori
in het speeksel en tandheelkundige plaques in niet- kankerpatiënten niet wezenlijk bij aan de hypothese als de site van kolonisatie betelnootkauwers heeft de orale mucosa in vergelijking met de niet betelnootkauwers in deze studie .
in deze studie hebben ontdekt H. pylori
in de mondholte in afwezigheid van kolonisatie van de maag in orale kankerpatiënten. We hebben geen manier om te weten of dit resterende kolonisatie vertegenwoordigt na een infectie enige tijd in het verleden of kolonisatie vooral in de mondholte. In beide gevallen is het mogelijk dat betelnootkauwers, vanwege hun grotere kans op kolonisatie door H. pylori
dan kunnen een risico van recidive of re-infectie van de maag en de twaalfvingerige darm infectie in de toekomst. Afgezien van het risico op mondkanker, kan betelnoten kauwen een extra risico in de Sri Lankaanse bevolking voor de ontwikkeling van maagzweren en maagkanker zijn.
Verklaringen
Dankwoord
Wij zijn dankbaar voor de Cancer Research Foundation Sri Lanka [CARE FUND 01/2005] voor de subsidie op voorwaarde dat ze de uitoefening van dit onderzoek. Wij zijn bijzonder dankbaar voor Drs. K.P.Menaka Kumaraarachchi en A.A.H.K Amarasinghe, tandheelkundige chirurgen, Cancer Institute Maharagama voor hun hulp bij het verzamelen van monsters. We ook graag bedanken Dr. E.A.P.K.Ekanayaka griffier en Dr. Kosala Mutukumara house officer Cancer Institute Maharagama voor ons te helpen bij het verzamelen van monsters. Wij willen ook Mrs. Niluka Velathanthri Scientific Officer en mevrouw Achala Bogahawatha, en alle officieren bedanken bij de afdeling Microbiologie voor hun technische bijstand en hun waardevolle steun verleend door het hele onderzoek. Origineel ingediende dossiers
Authors 'voor afbeeldingen
Hieronder staan de links naar originele ingediende dossiers van de auteurs voor afbeeldingen. 12903_2008_132_MOESM1_ESM.doc Authors 'originele bestand voor figuur 1 Concurrerende belangen Ondernemingen De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende belangen.
Auteurs bijdragen
NF en NP bedacht van de studie, en nam deel aan het ontwerp en de coördinatie en de geholpen om het manuscript op te stellen. GJ deelgenomen aan monstername laboratorium verwerking en analyse van de gegevens. (Deze studie werd ingediend als een gedeeltelijke vervulling van een voor een BSc Special Microbiologie, Universiteit van Sri Jayewardenapura voor GJ Kumar ingediend thesis) IA verstrekte monsters en intellectuele inbreng bij het opstellen van het manuscript JH verstrekt intellectuele inbreng en hielp opstellen van het manuscript. FM deelgenomen in het laboratorium verwerking en bij het opstellen van het manuscript. Alle auteurs gelezen en goedgekeurd de definitieve versie van het manuscript.
| 