Abstracte achtergrond
Plaveiselcellen carcinoom is de belangrijkste kwaadaardige tumor met primaire plaats in de mondelinge holte en, gezien de grote blootstelling van mucosa en lippen de etiologische factoren van deze neoplasma, de incidentie hoog. Onderzoek naar de prognostische factoren is bepalend voor de verwachtingen van behandelingsvoorstel en genezing van de patiënt. De lokale immuunrespons vertegenwoordigers peritumorale ontstekingsinfiltraat is een mogelijke prognostische factor.
Werkwijzen
In deze studie werden mondslijmvlies monsters plaveiselcellen carcinoom geanalyseerd, gesorteerd volgens hun histologische classificatie en de fenotypische profiel van de cellen die de peritumorale ontstekingsinfiltraat werd onderzocht door immunohistochemische methode, in de verslavingszorg, de celproliferatie index via eiwit Ki67 expressie werd bepaald.
Resultaten
de T-lymfocyten bestaat het grootste deel van dit ontstekingsinfiltraat, en onder deze cellen, is er was een overwicht van CD8 T lymfocyten ten opzichte van de CD4 T-lymfocyten. De B lymhocytes waren de tweede meest gevisualiseerd soort leukocyten cel gevolgd door macrofagen en neutrofielen. De immunohistochemische beoordeling van Ki-67 positieve cellen onthulde een grotere expressie van dit eiwit in monsters van ongedifferentieerde plaveiselcellen carcinoom.
Conclusie Ondernemingen De resultaten suggereren dat de cellulaire immuunreactie het belangrijkste afweermechanisme in plaveiselcellen carcinoom orale slijmvlies, door het grote aantal T-lymfocyten en macrofagen geuit, en dat de grootste intensiteit van de lokale respons kan worden geassocieerd met de beste prognose
Electronic aanvullend materiaal
de online versie van dit artikel (doi:. 10. 1186 /1472-6831-8-25) bevat aanvullend materiaal, dat beschikbaar is voor geautoriseerde gebruikers is. achtergrond
Kwaadaardige tumoren van de mond bestaat uit een heterogene groep van laesies die onderling verschillen wat betreft risicofactoren, klinische aspecten, en histologische oorsprong. Van de verschillende tumoren van deze groep, plaveiselcellen carcinoom is het meest voorkomende histologische type en vormt meestal gediagnosticeerde mondkanker [1-4]. Ondanks preventiecampagnes van verscheidene gouvernementele gezondheidszorg programma's en uitbreiding van het netwerk van gespecialiseerde professionals die de diagnose van premaligne laesies van de mond in de verschillende diensten in de gezondheidszorg momenteel actief prioriteren, is 7% van de bevolking van de wereld getroffen door mondkanker, en het is daarom een wereldwijde gezondheids-zorg [4].
Plaveiselcellen carcinoma zijn oorsprong in het epitheel dat de lijnen de mond. Dit feit is zeer belangrijk wanneer we de constante blootstelling van de mondholte lokale intrinsieke stimuli geassocieerd met een verhoogde kans op dit soort kanker. Een van de belangrijkste risicofactoren, roken, chronische alcoholische drank consumptie, en chronische mechanische trauma - zoals maladapted tandprothesen en gebroken tanden - opvallen. Bovendien waaronder primaire kanker van de lippen, in het bijzonder van het lagere gedeelte, moeten we continue blootstelling aan zonnestraling beschouwen als een belangrijke factor extrinsieke, vooral in leukodermic individuen. Naast lokale factoren intrinsieke en extrinsieke factoren, genetische aanleg van de patiënt en immuunrespons factoren van het risico op kanker [2, 4-10].
Naast de toename in preventieactiviteiten zijn verschillende studies ontwikkeld vaststellen de determinanten van de prognose van deze laesies met als doel het minimaliseren van morbiditeit en mortaliteit als gevolg van de bestaande maligne laesie. Vele schrijvers hebben een verband bestaat tussen de immuunreactie van de patiënt, neoplastische gedrag en prognose [5, 11, 12] onderzocht.
Meneses et al., (1998) aangetoond bij orale plaveiselcellen carcinoom monsters, een mogelijk verband tussen tumorgrootte, het gebied van de invasie, angiogenese, en de fenotypische karakterisering van de peritumorale ontstekingsinfiltraat voornamelijk samengesteld door T-lymfocyten en B-lymfocyten. Coussens et al., (1999) ook gevonden in carcinomen van mondslijmvlies een associatie tussen de overheersing van mestcellen in de peritumorale infiltraat en een grotere ontwikkeling van de stromale angiogenese, die een adequate bloedtoevoer voorziet in neoplastische voeding en bijgevolg een slechtere prognose.
Naast de evaluatie van de peritumorale inflammatoire infiltraat en zijn producten, de studie van tumorale cellulaire kinetiek, de regulerende mechanismen en de onderlinge relatie met groeifactoren, oncogenen en anti-oncogenen is ook doelwit geweest van verschillende studies [8, 15-19].
Onder de cellulaire gebeurtenissen die direct de klinische voortgang van de tumor te bepalen, celproliferatie is belangrijk, dat wil zeggen, stoornissen van het aantal cellen gevolg van stoornissen in de mitotische cyclus [20, 21].
proliferatieve activiteit van elk weefsel of neoplasma kan worden bepaald door de groei met behulp van antilichamen gericht tegen specifieke antigenen door proliferatie neoplastische cellen, waardoor de gelijktijdige analyse van proliferatie en histologie [13, 22, 23] geëxprimeerd. De Ki67 molecuul de antigene marker gekozen is, omdat het niet veel invloed van interne en externe factoren, en zijn nucleaire expressie lijden tijdens een bepaalde periode van de cyclus de cel vertegenwoordigt een voordeel in het gebruik ervan als een biologische marker voor mitotische activiteit [ ,,,0],24-27].
Recent werd aangetoond dat Ki-67 gen lijdt "overexpressie" in epitheliale cellen van pre-maligne en maligne orale laesies.
in deze studie werd de celproliferatie-index werd geëvalueerd door middel van de expressie van eiwit Ki67 en de fenotypische profiel van cellen die de peritumorale inflammatoir infiltraat in monsters plaveiselcellen carcinoom van mondslijmvlies omvatten. De resultaten toonden een essentiële participatie van de populatie T-lymfocyten in de samenstelling van het inflammatoire infiltraat geassocieerd met de neoplastische gebied. Deze resultaten suggereren een correlatie tussen de intensiteit van de peritumorale ontstekingsreactie en de proliferatie van tumorcellen.
Werkwijzen
Monsters van mondslijmvlies plaveiselcellen carcinoom van eerder behandelde patiënten diagnostische biopsieën incisie ingediend. Paraffine geblokkeerd monsters (n = 30) werden verkregen uit de archieven van de pathologische anatomie Laboratorium van de Medische School van de Dom André Arcoverde Foundation -. Valença /RJ Ondernemingen De blokken werden verwerkt histologisch plakjes 4 micrometer dik te verkrijgen en gekleurd met routine hematoxyline en eosine (HE).
Slides werden beoordeeld door twee verschillende onderzoekers, en de tumoren werden geclassificeerd histologisch volgens de International Classification of Diseases for Oncology (ICD-O /2000). De monsters werden verdeeld in de volgende groepen:
Groep 1: goed gedifferentieerd plaveiselcellen carcinoom van het mondslijmvlies (n = 10)
Groep 2: matig gedifferentieerd plaveiselcellen carcinoom van het mondslijmvlies (n = 10)
groep 3:. ongedifferentieerde keratinocyten carcinoom mondslijmvlies (n = 10)
histomorfometrie van het inflammatoire infiltraat
om de peritumorale inflammatoire infiltraat, Scion Image software en software Fotoscan kwantificeren werden gebruikt voor het vastleggen en morfometrie van de inflammatoire infiltreren. Alle monsters werden meegenomen in volle omvang en velden (oorspronkelijke vergroting x 100) met ontstoken gebieden rond de tumor halfautomatisch gemeten met handmatige selectie van de ontstoken regio en berekende analyse van het geselecteerde gebied.
Basis van de analyse van elk monster, eenvoudige rekenkundige betekent dat de ontstoken gebied per microscopisch veld werden verkregen en de resultaten werden uitgedrukt als percentage van het ontstoken peritumorale gebied per groep
immunohistochemische analyse
segmenten met 4 micrometer dik aangebracht op gesilaniseerd dia's (3-aminopropyltriethoxysilaan.; Sigma Chemical, Co; USA), werden paraffine ontdaan in een 60 ° C kamer, en na elkaar gehydrateerd in passages door xyleen, absolute alcohol, 70% alcohol en gedestilleerd water Ondernemingen De klassieke avidine-biotine-peroxidase anti-peroxidase complex methode. werd gebruikt in het bestuderen van de monsters. Monsters werden in 0,001 M citraatbuffer, pH 6,0, en peroxidase blok met 3% waterstofperoxide en verder geïncubeerd gedurende 1 uur met de primaire antilichamen aangegeven in tabel 1. Daarnaast antigeenterugtrekking ingediend onderdompeling van de fragmenten werden ze geïncubeerd met secundaire gebiotinyleerde antilichamen gedurende 30 minuten aan een reactie met de avidine-biotine complex nog 30 minuten ingediend. Kleuring werd uitgevoerd door toevoeging van het chromogeen diaminobenzidine (DAB) substraat gedurende ongeveer 1 minute.Table 1 Antilichamen voor immunohistochemie analyse Antilichaam Markering Merk
Anti CD20
B Lymfocyten
Dako
Anti CD3
T lymfocyten
Dako
Anti CD8
regulerende T-lymfocyten
Dako
Anti CD4
Helper T lymfocyten
Dako
Anti CD15
Neutrofielen
Dako
Anti CD68
macrofagen
Dako
Anti Ki67
Cellulaire proliferatie
Dako
Negatieve controle van de immunohistochemische reactie werd uitgevoerd door het weglaten van incubatie met het primaire antilichaam voor sommige segmenten. De plakken werden geanalyseerd en microfoto's werden gemaakt met de Nikon Microphot systeem (Tokyo, Japan).
Reactieve celtelling voor elk antilichaam werd gemaakt door het scannen van het gehele monster met 400 x vergroting, met een aantal van positieve cellen in alle gebieden. De resultaten werden verkregen uit het gewone rekenkundige gemiddelde, uitgedrukt in percentage van positieve cellen per microscopisch veld Statistische analyse
Statistische analyse werd uitgevoerd met behulp van Mann-Whitney met een p & lt.; 0,05 significantieniveau teneinde relatief middel van de parameters in de verschillende groepen van het experiment geanalyseerd evalueren.
Resultaten Ondernemingen De histopathologische analyse van de plakjes gekleurd met hematoxyline en eosine (HE) en onderworpen aan analyse bleek dat de morfometrische gemiddelde percentage peritumorale ontstoken gebied per microscopisch veld was 24,7% in groep 1 (monsters van goed gedifferentieerde squameuze cellen carcinoom van het mondslijmvlies) (figuur 1a), 33,2% in Groep 2 (monsters matig gedifferentieerde squameuze cellen carcinoom van de orale mucosa) (figuur 1b), en 42,6% in groep 3 (monsters van ongedifferentieerde cellen squameuze carcinomen van het mondslijmvlies) (figuur 1c). Na statistische beoordeling, de hoeveelheid peritumorale ontstoken gebied vertoonde een statistisch significant verschil bij Groepen 1 en 3 werden vergeleken (p & lt; 0,05) (Figuur 2). Figuur 1 Morfologische indeling van geschubde cellen van het mondslijmvlies. A: Goed gedifferentieerd plaveiselcelcarcinoom van wangslijmvlies. N = 10. HE vlek. Original vergroting 200 ×. B: Matig gedifferentieerd plaveiselcelcarcinoom van wangslijmvlies. N = 10. HE vlek. Original vergroting 400 ×. C: gedifferentieerde plaveiselcelcarcinoom van wangslijmvlies. N = 10. HE vlek. Original vergroting 400 ×.
Figuur 2 Intensiteit van peritumorale ontstekingsinfiltraat. De waarden worden uitgedrukt in eenvoudige rekenkundige gemiddelden ± SD. vergeleken groepen 1 en 3 p ≤ 0,05 werd statistisch significant verschil waargenomen.
In alle in dit onderzoek geëvalueerde monsters werd de kwantitatieve overwicht van het inflammatoire infiltraat rechtstreeks bij gebieden met de grootste invasie in weefsels onderliggend aan de tumor parenchym .
fenotypische evaluatie van de peritumorale infiltraat door identificatie van ontstekingscellen positiviteit werd uitgevoerd, gekenmerkt door de visualisering van lichtbruine intracellulaire kleuring, tegen een achtergrond contra-gekleurd met hematoxyline in elk van de reacties van de gebruikte antilichamen.
in alle groepen, analyse van de immunohistochemische analyse toonde de aanwezigheid van een ontstekingsreactie voornamelijk gevormd door mononucleaire ontstekingscellen. De T-lymfocyten die het merendeel van deze inflammatoire infiltraat en tussen deze cellen, was er een overwicht van CD8 T-lymfocyten ten opzichte van de CD4 T-lymfocyten (Figuur 3a). De B-lymfocyten de tweede gevisualiseerd soort leukocyt (figuur 3b), gevolgd door macrofagen (figuur 3d) en neutrofielen (figuur 3c). Figuur 3 Immunohistochemie voor fenotypische karakterisering van peritumorale ontstekingsinfiltraat. A: T lymfocyten (CD3 + cellen). Original vergroting 400 ×. B. A: B-lymfocyten (CD20 + cellen). Original vergroting 400 × C. A: neutrofielen (CD15 + cellen). Original vergroting 400 × D. A: macrofagen (CD68 + cellen). . Vergroting 400x
Er was geen significant verschil als typen leukocyten van de drie groepen werden vergeleken (p & gt; 0,05) (Figuur 4). Figuur 4 Cellulaire profiel van de peritumorale inflammatoire infiltraat. De waarden worden uitgedrukt als gewone rekenkundige gemiddelden ± SD. Geen statistisch significant verschil werd waargenomen bij de groepen vergeleken. p ≤ 0,05.
in monsters van patiënten uit groep 1, de immunohistochemische beoordeling van eiwit Ki-67 bleek schaarse immunoreactieve tumorcellen (20% ± 3,2) (figuur 5), terwijl in monsters van patiënten uit Groep 2, cellen met positiviteit waren overvloediger (47% ± 6,3). In monsters van Groep 3 patiënten, gemarkeerde cellen positief vertegenwoordigde 60,3% ± 2,8 van de kwaadaardige tumorcellen. De vergelijking tussen het percentage tumorcellen positief voor Ki-67 expressie per microscopisch veld in het mondslijmvlies monsters van de drie groepen vertoonden statistisch significante verschillen (p & lt; 0,05) (Figuur 6). Tumoren uit groep 3 vertoonden een grotere expressie van eiwit Ki-67 vergeleken met de tumoren van de groepen 1 en 2. Figuur 5 Immunohistochemie tonen expressie van eiwit Ki67 in kwaadaardige tumorcellen uit monsters van mondslijmvlies plaveiselcellen carcinoom. A: Goed gedifferentieerd carcinoom. Original vergroting 400 ×. B: Matig gedifferentieerd carcinoom. Original vergroting 400 ×. C: ongedifferentieerde carcinoom. Original vergroting 400 ×.
Figuur 6 Expressie van eiwit Ki67 per groep. De waarden worden uitgedrukt in eenvoudige rekenkundige gemiddelden ± SD. Statistisch significant verschil werd waargenomen bij de groepen vergeleken. p ≤ 0,05.
Discussie
Plaveiselcellen carcinoom is de meest voorkomende vorm van kanker van het mondslijmvlies en vertegenwoordigt 91% van de gediagnosticeerde kwaadaardige tumoren van de mond [2, 6-8].
Naast de multifactoriële etiologie waarbij extrinsieke en intrinsieke factoren wordt immuunstatus van de patiënt ook overwogen om het risico op kanker beïnvloeden en bepalen verschillende aspecten van de progressie [4, 9, 10]. In de jaren 1980, Scully C. (1983) had al erkende de betrokkenheid van de immuunrespons bij de ontwikkeling van kwaadaardige tumoren mond, en had benadrukt dat de toekomstige behandeling van kanker zou gebaseerd zijn op immunotherapie door middel van immunomodulatie.
Onder de gebeurtenissen die direct bepalen tumor klinische progressie, die van primair belang omvatten stoornissen van het aantal cellen verkregen uit mitotische cyclus disfuncties en mogelijke storingen "bij immuun ontwijking van de tumoren gastheer - beoordeeld door de intensiteit van de peritumorale inflammatoire infiltraat, ontstekingscellen samenstelling, cytokineproductie door infiltreren cellen, en de aanwezigheid van angiogenese [11, 12, 14, 20, 21].
Volgens Costa L. et al., (2005) in een retrospectieve klinische studie met 38 monsters van orale plaveiselcellen carcinomen, TNM classificatie (stagering bepaald door de grootte van de primaire kanker en de aanwezigheid van metastasen) correleert met de voornaamste histopathologische kenmerken van tumorale classificatie - mate van keratinisatie, nucleaire pleomorfisme en intensiteit van peritumorale lymfocytische infiltratie, en het verband tussen deze gegevens belangrijk bepalen prognose en behandeling kiezen. Ondernemingen de huidige resultaten toonden een negatieve correlatie tussen de mate van tumor differentiatie en de snelheid van celproliferatie verkregen door expressie van proteïne Ki67. Resultaten vergelijkbaar met die in deze studie worden ook gesuggereerd door Costa et al., (2005) in orale carcinoma, Glen et al., (2006) bij kwaadaardige pancreasletsel, Deans et al., (2006) in gastro-oesofageale kanker en Cai et al., (2006) in transitionele celcarcinoom van de blaas. De ongedifferentieerde tumoren toonde een geaccentueerde expressie van eiwit KI-67. Aguiar (1996) toonden aan dat de mitotische index progressief toeneemt van normaal peritumorale mondslijmvlies richting tumor gebieden, alsmede in gebieden met de grootste weefselinvasie [7]. . Pich et al, (2004) in een retrospectief onderzoek met kwaadaardige laesies van de mondholte, speekselklieren, farynx en larynx, vastgesteld dat de proliferatieve activiteit onderzocht door verschillende methoden - zoals AgNORs Index bepaling en MIB-1 en Ki67 expressie door immunohistochemie - is klinisch relevant en geldig voor het voorstellen van de behandeling en het bepalen van de prognose. In dit document zijn de histologische eigenschappen vertoond door de kwaadaardige tumor geassocieerd met de klinische agressiviteit van de analyse van de kwaadaardige rang verband met mogelijke determinanten laesie prognose -. Lokale immunologische profiel en kwaadaardige celproliferatie
Volgens de verkregen resultaten morfometrie van de peritumorale infiltraat, de gemiddelde percentage ontstoken gebied per microscopisch veld groter bij de ongedifferentieerde tumoren (groep 3) in vergelijking met het gemiddelde van matig gedifferentieerde tumormonsters (groep 2), gevolgd door de goed gedifferentieerde tumormonsters ( Group 1). Bij de beoordeling van deze gegevens, we vastgesteld dat er een correlatie tussen de hoogste graad van kwaadaardigheid en de grootste inflammatoire intensiteit. Ondernemingen De karakterisering van de peritumorale infiltraat samenstelling maakte geen verschil tussen de typen leukocyten van de drie groepen, bepaald uit niet onthullen hun rangen, maar interessant, de hoeveelheden van elk celtype waren even proportioneel in deze groepen. We merken dat in alle monsters, het totale aantal T-lymfocyten en macrofagen overhand over de kwantificering van plasmocyten, karakteriseren plaatselijke reactie van de patiënt als overwegend celtype immuunrespons.
Naast de evaluatie van de peritumorale inflammatoire infiltraat intensiteit en de cellulaire componenten, enkele van de belangrijkste determinanten van tumor agressiviteit en mogelijke voorspellers van de prognose zijn veranderingen in celproliferatie, dwz afwijkingen in het aantal cellen verkregen uit mitotische cyclus disfuncties. Deze neoplastische proliferatieve activiteit kan worden bepaald door de groeisnelheid via Ki67 expressie [18-21, 28-31]. Ondernemingen De vergelijking tussen het percentage tumorcellen positief voor de expressie van Ki-67 per microscopische veld in de mondslijmvlies monsters van de drie groepen vertoonden statistisch significante verschillen. De monsters uit Groep 3 (ongedifferentieerde plaveiselcellen carcinoom van het mondslijmvlies) vertoonden een grotere expressie van cellen positief gemerkte, gevolgd door de monsters van patiënten uit Groep 2 (matig gedifferentieerde squameuze cellen carcinoom van het mondslijmvlies) en van groep 1 ( goed gedifferentieerde keratinocyten carcinoom van mondslijmvlies).
Wat karakterisering leukocyten, Sica et al., (2006) rapporteerde gegevens geassocieerd met de overheersing van de macrofaag bevolking in de peritumorale infiltraat en een sterkere bevordering van tumor angiogenese, toeschrijven deze cellen een pro-tumorale rol, en dus een slechte prognose.
in de bestudeerde oraal carcinoom monsters, de evaluatie van peritumorale ontstekingscellen het belang aangetoond van cellulaire immuniteit in het lokale antineoplastische reactie door de aanwezigheid van een populatie hoofdzakelijk uit T-lymfocyten en macrofagen, maar dat geen relevante verschillen over de infiltraat samenstelling volgens de histologische indeling.
Onlangs, in monsters van invasieve borstkanker, onderzochten we de mogelijke correlatie tussen de intensiteit van de peritumorale ontstekingsinfiltraat en de mate van differentiatie tumor [32]. Wij wijzen erop dat wanneer we geanalyseerde patiënten met kwaadaardige tumoren van dezelfde rang, die tevredenheid gevorderd toonde een intense ontstekingsreactie peritumorale, terwijl zij die ervaren tumor recidieven en metastatische verspreiding ontwikkelde een minder intense peritumorale ontstekingsreactie.
Conclusie
In deze studie, de parallel tussen de intensiteit van de ontsteking en de prognose van de patiënt is nog niet volledig opgehelderd, en verder onderzoek nodig is. De verdeling van het mondslijmvlies carcinoom monsters in groepen komt overeen met histologische indeling. De resultaten suggereren een positieve correlatie tussen ontstekingsreactie intensiteit en de mate van tumordifferentiatie. Daarom ongedifferentieerde tumoren presenteren een grotere ontwikkeling van de peritumorale ontstekingsproces in vergelijking tot matig gedifferentieerde en goed gedifferentieerde tumoren. Niettemin, om deze variabele ontstekingsreactie intensiteit als een prognostische factor bij mondkanker definiëren andere studies worden uitgevoerd zodat de intensiteit van de plaatselijke respons en kwaadaardige celproliferatie in tumoren van dezelfde histopathologische indeling gekoppeld aan de patiënt klinische vooruitgang kan worden geëvalueerd.
tenslotte de resultaten in deze studie suggereren dat de cellulaire immuunreactie het belangrijkste afweermechanisme in mondslijmvlies plaveiselcellen carcinoom, door het grote aantal T-lymfocyten en macrofagen tot expressie.
Wij leveren bewijs dat Ki-67 expressie heeft betrekking op de mitotische index en derhalve cellulaire proliferatie en kwaadaardige indeling van het neoplasma.
dank
Rede mineira de bioterismo. 2824/05 - FAPEMIG; Rede Mineira "TOXIFAR". 2827/05 - FAPEMIG; CNPq
Verklaringen
Authors 'originele ingediende dossiers voor afbeeldingen
Hieronder staan de links naar de auteurs bestanden originele ingediend voor afbeeldingen. 'Originele bestand voor figuur 1 12903_2008_100_MOESM2_ESM.pdf Authors' 12903_2008_100_MOESM1_ESM.pdf Auteurs originele bestand voor figuur 2 12903_2008_100_MOESM3_ESM.pdf Authors 'originele bestand voor figuur 3 12903_2008_100_MOESM4_ESM.pdf Authors' originele bestand voor figuur 4 originele bestand 12903_2008_100_MOESM5_ESM.pdf Authors 'voor figuur 5 12903_2008_100_MOESM6_ESM.pdf Authors 'originele bestand voor figuur 6 concurrerende belangen Ondernemingen de auteurs verklaren dat ze geen concurrerende belangen.
auteurs bijdragen
FLDV en BJV deelgenomen aan de ontworpen van de studie, immunohistochemische studie en histopathologische studie . FMA en MAMG deelgenomen aan het ontwerp en de coördinatie.
