Abstracte achtergrond
Deze studie onderzocht de prevalentie van Enterococcus faecalis
, de mogelijke virulentie factoren en antimicrobiële gevoeligheid bij mensen met en zonder tandziekten. Een totaal van 159 mondspoeling monsters werden verzameld van patiënten (n = 109) die lijden aan tandziekten en gezonde controles (n = 50).
Resultaten
E. faecalis
gedetecteerd met alleen cultuur 8 /109 (7,3%) van de patiënten met verschillende typen tandziekten, terwijl geen E. faecalis
werd gevonden in de gezonde controles weer met beide kweek en PCR. Fenotype karakteriseringen van de 8 E. faecalis
isolaten bleek dat 25% van de isolaten geproduceerd hemolysine en 37,5% geproduceerd gelatinase. Belangrijkste virulentiegenen; collageen-bindend eiwit (ace
) en endocarditis antigeen (EFAA
) waren aanwezig in alle 8 E. faecalis
isolaten, terwijl haemolysine activator gen (cylA
) werd alleen gedetecteerd in 25% van de isolaten, en al isolaten waren negatief voor esp
gen. Alle E. faecalis
isolaten waren 100% gevoelig voor ampicilline, chlooramfenicol, ciprofloxacine, vancomycine en teicoplanine, en in mindere mate voor erytromycine (62,5%).
Conclusie Inloggen Deze studie toont aan dat alle E. faecalis
isolaten waren alleen van patiënten met tandziekten vooral necrotische pulp hersteld, en al isolaten uitgevoerd zowel collageen-bindend eiwit en endocarditis antigen genen en zeer gevoelig voor veelgebruikte antimicrobiële geneesmiddelen in Jordanië.
Electronic aanvullend materiaal
online versie van dit artikel (doi:. 10 1186 /1472-6831-8-17) bevat aanvullend materiaal, dat beschikbaar is voor geautoriseerde gebruikers is achtergrond
Veel studies hebben aangetoond dat E. faecalis
is. vaak gevonden bij patiënten die lijden aan orale infecties, zoals gingivitis, parodontitis, tanden met mislukte endodontische evenals zure carieuze gepaard gaat met aanhoudende geïnfecteerde wortelkanalen. [1-4] Andere studies toonden veelvuldig voorkomen van E. faecalis
samen met een grote verscheidenheid aan aërobe en anaërobe bacteriesoorten betrokken bij verschillende ziekten en chronische endodontische apicale parodontitis [4-7].
Virulente factoren E. faecalis
onder meer de naleving van het weefsel, invasie en de vorming van abces, modulatie van gastheer ontstekingsreacties, afscheiding van verschillende producten die de vorming van biofilm [8-10] verbetert hosten. Bij orale prevalentie van E. faecalis Kopen en de virulentie factoren variëren per onderzoek [1, 6, 7]. Daarom is meer onderzoek naar potentiële virulentiefactoren van E. faecalis
zou nuttig zijn bij het begrijpen van hun rol in de tandheelkundige infecties. Bovendien kunnen klinische isolaten van E. faecalis
hersteld van wortelkanaalbehandeling infecties antimicrobiële resistentie voor conventionele behandelingen aanbevolen voor tandheelkundige ingrepen [11-13] te drukken.
Deze studie had als doel om het optreden van E. faecalis
, de virulentie factoren en antimicrobiële gevoeligheid in samenwerking met en zonder enige tandziekten in een Jordaanse bevolking
Resultaten
leeftijd van de patiënten varieerde 14-75 jaar (gemiddeld; 36,4 jaar), en de controle personen waren tussen de 20 en 69 jaar (gemiddeld; 28,3 jaar). De prevalentie van E. faecalis
isolaten in mondspoeling specimens van patiënten met tandziekten was 8/109 (7,3%) met behulp van zowel de cultuur en PCR testen, terwijl alle mondspoeling exemplaren verkrijgbaar bij de 50 gezonde controlepersonen waren negatief voor E . faecalis
met behulp van beide methoden. Alle DNA geëxtraheerd uit 8 E. faecalis
isolaten werden bleek positief voor specifieke E. faecalis
16S rRNA-gen te zijn. Het verschil tussen de resultaten van de twee groepen is statistisch significant (p-waarde = 0,031). Bovendien was er 2 E. avium
isolaten (tabel 1). Het groeipatroon van E. faecalis
geïsoleerd uit positieve gevallen varieerde van enkele tot vele kolonies (2-50 x 10
3 kolonies /ml). De verdeling van 8 E. faecalis
isolaten bij patiënten samen seks, roken, mondhygiëne en tandziekten wordt getoond in (tabel 2). Detectie van mogelijke virulentie factor genen tussen 8 E. faecalis
isolaten met behulp van PCR waren als volgt; zowel ace Kopen en EFAA
genen waren in alle isolaten (100%), terwijl cylA
gen slechts 2 isolaten gedetecteerd, en alle isolaten waren negatief voor esp
gen (tabel 3, figuur 1). Alle 8 E. faecalis
isolaten waren 100% gevoelig voor ampicilline, chloramfenicol, ciprofloxacine, teicoplanine en vancomycine, terwijl 62,5% en 12,5% van de isolaten waren gevoelig voor erythromycine, imipenem, respectievelijk, en waren bestand tegen gentamycine clindamycine en OxacillinTable 1 Detectie van Enterococcus soorten
bij patiënten en controles
Kenmerken
109 patiënten met tandziekten No. (%)
50 Controls personen No. (%)
Leeftijd gemiddelde (jaar)
36,4 ± 13.98
28,3 ± 12.59
Sex
|
Male
39 (36)
24 (48)
Female
70 (64)
26 (52)
E. faecalis
8 (7.3)
0
E. avium
2 (1.8)
0
Tabel 2 verdeling van 8 E. faecalis
isolaten in associatie van seks, roken, mondhygiëne en tandheelkundige ziekten onder 109 patiënten
Kenmerken
Positieve E. faecalis
*
Negatief E. faecalis
*
Total No.
P-value***
Female
7
63
70
0.134
Male
1
38
39
|
Nonsmoker
7
83
90
0.228
Smoker
1
18
19
|
slechte mondhygiëne
7
68
75
0,222
goede mondhygiëne
1
33
34
|
Gingivitis + ve
7
64
71
0,161
Gingivitis ve
1
37
38
|
necrotische pulp
8 **
101
109
0
cariës + ve
4 **
77
81
0,115
cariës -ve
4
24
28
| Mijn pagina Home kiemgetal:. 2-50 × 103colonies /ml
** elke één patiënt werd behandeld met antibiotica tijdens de laatste maand.
*** Niet significant tussen positieve E. faecalis Kopen en elk geslacht, roken, mondhygiëne, gingivitis, cariës maar significante met necrotische puples.
Tabel 3 Aanwezigheid van 16S rRNA-gen en de prevalentie van esp, cylA, ace, EFAA
genen onder de 8 mondelinge E. faecalis
isolaten gedetecteerd door PCR.
Isoleer No.
16S rRNA
esp
cylA
*
ace
EFAA
3
+
-
-
+
+
44
+
-
-
+
+
1
+
-
-
+
+
2
+
-
+
+
+
6
+
-
-
+
+
12
+
-
-
+
+
18
+
-
-
+
+
59
+
-
+
+
+
Total stammen No. (%)
8 (100%)
0 (0,0%) kopen van 2 (25%)
8 (100%)
8 (100%)
* Twee isolaten uitgedrukt hemolytische activiteit in vitro
Figuur 1 verdeling van EFAA gen onder de 8 mondelinge E. faecalis isolaten. M, 100 bp DNA-merker; Baan 1, EFAA
(688 bp); positieve controle (E. faecalis
ATCC 29.212); Laan 2, EFAA
negatieve controle; Lanen 3-10, positief EFAA
onder orale E. faecalis
isolaten.
Methods
Een totaal van 159 patiënten die waren het bijwonen van de tandheelkundige kliniek /Jordan University Hospital (JUH), Amman, Jordanië werden onderzocht op aanwezigheid van tandziekten door twee tandartsen (N. Dar-Odeh & amp; O Abu Hammad) gedurende de onderzoeksperiode van 2005. de proefpersonen werden verdeeld in twee groepen op basis van de aanwezigheid of afwezigheid van tandziekten. Controlegroep bestond uit 50 gezonde personen die geen enkele duidelijke tandheelkundige ziekte. Tandziekten onderzocht zijn onder andere: tandbederf, plaque geïnduceerde gingivitis, en wortelkanaal ziekte. Persoonlijke gegevens, roken geschiedenis, de aanwezigheid of afwezigheid van klinische tandheelkundige ziekte, mondhygiëne en behandeling met antibiotica gedurende de afgelopen maand werden geregistreerd voor elke onderzochte persoon. Cariës en tandvleesontsteking werden geregistreerd als aanwezig /afwezig. Wortelkanaalbehandeling ziekte inbegrepen: onomkeerbare pulpitis, alleen necrotische pulp en periapicale parodontitis. Mondhygiëne werd beschouwd als ofwel slecht of goed volgens de plaque-index. Alle patiënten en controlepersonen hadden hun schriftelijke toestemming voor opname in de studie gegeven. Alle patiënten en controles werden gevraagd om hun mond te spoelen gedurende 60 seconden met 10 ml steriel gedestilleerd water en keerde de mondspoeling naar een steriele container.
Exemplaren Processing
Alle monsters werden onmiddellijk overgebracht naar de Microbiologie Research Laboratory /Faculteit geneeskunde /University of Jordan. Mondspoeling monsters werden in steriele buis gegoten en gedurende 10 min bij 10.000 g. De supernatant verwijderd en de overblijvende pellets werden opnieuw gesuspendeerd door werveling in één ml steriele fysiologische zoutoplossing 0,9% [14].
Isolatie van Enterococcus soorten
een lus vol van de gesuspendeerde pellets (0,01 ml) werd gekweekt op gal-esculin agar platen op te sporen en te tellen op de aanwezigheid van grijs tot zwart kolonies van Enterococcus soorten
. De rest van de gesuspendeerde monsters werden opgeslagen bij -70 ° C voor verder onderzoek. Ten minste drie kolonies gegroeid op gal-esculine platen werden sub-gecultiveerd in bloed agar platen te isoleren Enterococcus soorten
(Oxoid, Engeland). Alle kweken via de studie uitgevoerd werden geïncubeerd in een candle pot (5% CO 2) gedurende 24-48 uur bij 37 ° C. Pure groei verkregen uit bloed agarplaten werd opnieuw geënt op cysteïne Lactose elektrolyt deficiënte (CLED) agarplaten (Oxoid, Engeland), 6,5% NaCl-oplossing en gal-esculin buis agar. Elke groei tonen gram-positieve kokken, positieve gal-esculin, positieve 6,5% NaCl testen, catalase-negatief en verschijnen als gele, kleine /middelgrote in grootte op CLED agar (Oxoid, Engeland) werden voorlopig als Enterococcus
isolaten opgenomen. E. faecalis
ATCC 29212 werd opgenomen als een positieve controle door uit het onderzoek.
Biochemische detectie van E. faecalis isolaten Leer Alle voorzichtige Enterococcus
isolaten werden verder gekweekt op de hersenen het hart infusie agarplaten (Oxoid, Engeland) en getest met behulp van biochemische Remel systeem (Rapid ™ STR-systeem, USA) om hun identiteit als E. faecalis
.
hemolysinefamilie en gelatinase activiteiten
bevestigen E. faecalis
isolaten werden beoordeeld op hemolytische activiteit op basis bloed agar (Oxoid, Engeland) aangevuld met 5% (v /v) menselijk bloed. Een enkele kolonie werd gekweekt op agarplaten en hemolytische activiteit werd bepaald door de aanwezigheid van heldere zone rond de kolonies (β hemolyse) zoals beschreven door Creti et al
. [15]. Gelatinase activiteit werd geëvalueerd door inoculatie van enkele kolonies van elk isolaat als spot formulier 12% gelatine platen (Defico, USA). De platen werden geïncubeerd bij kamertemperatuur gedurende 48 uur. Gelatinase activiteit werd duidelijk door de aanwezigheid van vloeibaar zone rond de kolonies. Serratia mercenses
ATCC 13880 werd gebruikt als een positieve controle voor gelatinase productietest.
Antimicrobiële gevoeligheid testen
Gevoeligheid van E. faecalis
isolaten 9 antimicrobiële stoffen werd bepaald met behulp disc diffusie werkwijze volgens NCCLS ( nu CLSI) richtlijnen [16].
Detectie van E. faecalis in mondspoeling monster door PCR
DNA-extractie werd uitgevoerd met Wizard Genomic DNA Purification Kit (Promega, USA) volgens instructies van de fabrikant. De DNA extracties werden gebruikt voor het detecteren van de specifieke 16S rRNA-gen van E. faecalis
in mondspoeling monsters [17]. PCR-omstandigheden werden uitgevoerd door een PCR thermocycler (MJ door onderzoek INC, USA) en waren als volgt: 15 min initiële enzymactivering /DNA denaturatiestap bij 95 ° C gevolgd door 35 cycli bij 94 ° C gedurende 20 s; 68 ° C gedurende 45 s; 72 ° C gedurende 15 seconden. PCR producten werden geanalyseerd door elektroforese onder toepassing van 2% agarosegel (Promega, USA) bevattende ethidiumbromide in 1 x TBE buffer en looptijd van 1 uur met 70 V, en gevisualiseerd door UV Trans-illuminator (UVP) en Gel Documentatiesysteem (UVP) . Dezelfde PCR reactie werd getest met elke afzonderlijke controlestam van E. faecium Kopen en S. mutans
die zijn geïsoleerd van andere klinische monsters bij JUH en met E. faecalis ATCC 29212.
de PCR-test gebruikt, gaf een negatief resultaat met DNA geëxtraheerd uit E. faecium Kopen en S. mutans
. Ook DNA extractie van teruggewonnen en geïdentificeerd E. faecalis
isolaten werden bevestigd onder toepassing van dezelfde DNA-extractie en PCR procedure onder dezelfde omstandigheden toegepast voor orale spoeling monsters (tabel 4) .table 4 Antimicrobiële gevoeligheid van 8 E. faecalis
door disc diffusie methode
Antimicrobiële middelen
No. (%) Van de isolaten gevoelig
ampicilline
8 (100)
chlooramfenicol
8 (100)
ciprofloxacine
8 (100)
Teicoplanin
8 (100)
Vancomycine
8 (100)
Erythromycin
5 (62.5)*
Gentamycin
Null
Clindamycin
Null
Oxacillin
Null
Koesterde alleen ace
, EFAA
genen.
Detectie van E. faecalis mogelijke virulentie genen
DNA van E. faecalis
isolaten werd bereid door schorsing van een lus vol 's nachts groei kolonies gekweekt op bloed agar in een buis die 500 ul steriel gedistilleerd water, gevolgd door koken gedurende 10 minuten en daarna gecentrifugeerd bij 12.000 g gedurende 6 minuten bevatte. Een portie van het supernatant (5 ui) werd gebruikt als de matrijs in een eindvolume van 25 ui PCR mengsel [15]. PCR-amplificatie voor de volgende genen: collageen bindend proteïne (as
), endocarditis antigen (EFAA
), haemolysine activator (cylA
), en een oppervlakte-eiwit (esp
) werden bereid zoals in Uniplex een 25 pl uiteindelijk reactievolume. Tabel 5 toont de primers gebruikt in de studie [15, 17, 18] .table 5 E. faecalis
primers gebruikt in de studie
Gene
Sequence
grootte van het product (bp)
Reference
E. faecalis
16S rRNA
Ef16SF 5 '- CCGAGTGCTTGCACTCAATTGG - 3'
138
17
Ef16SR 5 '- CTCTTATGCCATGCGGCATAAAC - 3'
|
|
Esp
5'-TTGCTAATGCTAGTCCACGACC-3 '
932
18
|
5'-GCGTCAACACTTGCATTGCCGA-3 '
|
|
cylA
5'-GACTCGGGGATTGATAGGC-3 '
688
15
|
5'-GCTGCTAAAGCTGCGCTTAC-3'
|
|
ace
5'-GGAATGACCGAGAACGATGGC-3 '
616
15
|
5'-GCTTGATGTTGGCCTGCTTCCG-3 '
|
|
EFAA
5' -GCCAATTGGGACAGACCCTC-3 '
688
15
|
5'-CGCCTTCTGTTCCTTCTTTGGC-3'
|
|
Monsters werden geamplificeerd in een PCR thermische cycler (MJ door onderzoek INC, USA), door deze gedurende 5 minuten bij 95 ° C, gevolgd door 30 cycli van 95 ° C gedurende 60 s , 58 ° C gedurende 60 s (63 ° C gedurende esp
) en 72 ° C gedurende 60 s, en een laatste stap van 72 ° C gedurende 10 minuten. PCR-producten werden geanalyseerd in 0,8% agarose gelelektroforese (bevattende 0,5% ethidiumbromide in 1 x TBE buffer) die zich gedurende 50 minuten met 80 spanningen via horizontale electroforese-inrichting, en gevisualiseerd door Gel Documentation System (UVP, USA). E. faecalis
ATCC 29212 werd gebruikt als een positieve controle in elke PCR-run om cylA
, ace
, EFAA
genen op te sporen en te testen DNA bereid uit bepaalde E. faecalis
stammen (EFS121, EFS87, EFS16, EFS27B, EFSU85 en EFS118), die werden verkregen van Dr. Roberta Creti (Dipartimeno di Malattie Infecttive, Parassitarie ED Immunomediate, Istituto Superiore di Sanità, Viale Regina Elena, 299-00.161 Rome, Italië). Deze DNA preparaten werden gebruikt als positieve controle voor esp
gen met 1 Kb /100 bp ladder marker (Promega, USA).
Statistische analyse
Z-test werd gebruikt om de prevalentie van E. faecalis vergelijken
patiënten en controlegroep volgens de volgende vergelijking: Z =
P 1 - P 2 /√P (1-P) (1 /n 1 + 1 /n 2). P & lt; .
0,05 werd als statistisch significant
Discussie De onderhavige studie toont aan dat E. faecalis
isolaten werden uit Jordanië patiënten samen met één of meer van de volgende tandziekten; cariës, gingivitis, plaque geïnduceerde gingivitis en endodontische infecties, en in een hoog tempo (7,3%; p = 0,031) in vergelijking met gezonde controlepersonen (nul). Hoewel algemeen PCR gevoeliger dan kweekmethode detectie van bacteriën in klinische monsters, heeft deze studie niet gedetecteerd positieve E. faecalis
die direct mondspoeling specimens. Sedgley CM et al., 2005 (19) dat een kwantitatieve real-time PCR rapporteerde een hogere incidentie van E. faecalis
in mondspoeling monsters dan kweektechnieken en leverde grotere gevoeligheid. De studie toonde aan dat een slechte mondhygiëne, gingivitis en necrotische pulp blijken belangrijke predisponerende factoren voor besmetting met E. faecalis
(tabel 2) zijn. Een recente gelijkaardige studie uit de VS is geïsoleerd E. faecalis
van 11% van de orale spoeling monsters van de patiënten die endodontische behandeling, maar slechts 1% van E. faecalis
van studenten tandheelkunde werd teruggevonden zonder voorgeschiedenis van endodontische behandeling [ ,,,0],14]. Enterococci kunnen de mondholte te koloniseren, vooral bij patiënten met parodontitis of wortelkanaal infecties geassocieerd met orale mucosale letsels en bij immuno-gecompromitteerde patiënten [20, 21]. Ook E. faecalis
is de meest geïsoleerde species van wortelkanalen monsters met endodontische falen [2, 21, 22]. E. faecalis
is vaak geïsoleerd in reincultuur of overheersende organisme eerder root- vol tanden met periapicale laesies of chronische apicale parodontitis [3, 19, 23, 24]. Verder is gebleken dat dit organisme persistent geïnfecteerde wortelkanaal waarbij calciumhydroxide medicatie ineffectief [25].
Deze studie toont aan dat de productie van hemolysine en gelatinase als mogelijke virulentie determinanten niet altijd door E. faecalis
isolaten samen met dentale ziekten, aangezien slechts 25% van E. faecalis
isolaten vertoonden hemolysinefamilie en 37,5% gelatinase activiteit in vitro, respectievelijk. Twee studies van Sedgley et al
uitgevoerd. [14, 23] gerapporteerde verschillende gevolgen hemolysine productie, eerste onderzoek aangetoond dat 36% van de E. faecalis
stammen gewonnen uit endodontische patiënten geproduceerd hemolysine, terwijl de tweede niet heeft gedetecteerd productie van hemolysine één enterococci van endodontische gevallen. Ook Sedgley et al
. [22] vonden dat gelatinase gen (gelE) werd gedetecteerd in alle endodontische isolaten van E. faecalis
terwijl expressie gelatinase activiteit werd waargenomen bij twee derde van de isolaten. Deze studies concludeerde dat het bewijs van potentiële virulentiefactoren werden geïdentificeerd in endodontic Enterococcus spp
., In het bijzonder de productie van gelatinase en de reactie op feromonen. Andere studies hebben aangetoond dat de expressie van gelatinase gen heeft bijgedragen aan de toegenomen verspreiding van E. faecalis
in high-density omgevingen en werd in verband gebracht met een verhoogde hechting van E. faecalis
aan dentine in vitro
[26, 27] . Ondernemingen De huidige studie heeft aangetoond dat zowel ace Kopen en EFAA
genen die aanwezig zijn in alle E. faecalis
isolaten waren, terwijl cylA
gen slechts in twee isolaten werd ontdekt, en al isolaten waren negatief voor esp
gen die meestal wordt gevonden in E. faecalis
stammen geïsoleerd van urineweginfecties [18].
Een recent moleculair gebaseerde studie blijkt dat de virulentie determinanten EFAA Kopen en ace
genen is gevonden in alle E. faecalis
isolaten van wortelkanaal van endodontic patiënten, terwijl esp
gen aanwezig is in (58%) en cylA
gen in (19,4%) van de isolaten was [11] . Deze resultaten zijn in overeenstemming met onze resultaten, behalve voor esp
gen. In het algemeen is de uitdrukking van hemolysinefamilie en gelatinase activiteit of hun genen, samen met het optreden van andere virulentiegenen (esp
, cylA
, aas
, EFA A
) in E. faecalis
stammen sterk verschilde van onderzoek naar de andere en waarschijnlijk te wijten aan het verschil in de klinische en geografische herkomst [5, 9, 11, 26-29]. Bovendien, noch esp noch gelatinase leek vereist voor biofilm formatie; zowel E. faecalis en E. faecium
geen correlatie tussen de aanwezigheid van één esp of de productie van gelatinase en biofilmvorming [30] blijkt. Blijkt dat veel omgevings- en genetische factoren kunnen worden bij de productie van biofilm door E. faecalis
[31].
Laatste jaren enterococci hebben meer aandacht gekregen vanwege de ontwikkeling van resistentie tegen meerdere antibiotica en zijn gemeenschappelijk prevalentie in nosocomiale infecties. Vancomycine-resistente enterokokken (VRE) waarschijnlijk vertegenwoordigen momenteel de meest serieuze uitdaging van de vele microben met resistentie tegen antibiotica veroorzaken infecties bij mensen [32]. Onze resultaten toonden dat alle E. faecalis
isolaten waren gevoelig voor chlooramfenicol, ampicilline, vancomycine, ciprofloxacine, en teicoplanine, maar de isolaten waren veel minder vatbaar voor erytromycine. Een studie door Pinheiro et. al
. [12] is gebleken dat E. faecalis
isolaten van orale monsters waren volledig gevoelig in vitro
amoxicilline, amoxicilline-clavulaanzuur, vancomycine en in mindere mate gevoelig zijn voor erythromycine, moxifloxacine, chlooramfenicol, tetracycline, doxycycline en ciprofloxacine . De gevoeligheid gevolg van onze beperkte aantal E. faecalis
isolaten aangegeven hogere frequentie van resistentie tarieven dan die gerapporteerd in recente studies uit westerse landen [11-13]. Bovendien, onze vatbaarheid resultaat correleren goed met de hoge prevalentie van resistentie bij klinische en community Staphylococcus aureus
isolaten in Jordanië [33].
Kortom, deze studie blijkt dat alle E. faecalis
isolaten worden geassocieerd met diverse tandziekten vooral necrotische pulp bij patiënten en zij droegen beiden collageen-bindend eiwit en endocarditis antigen genen.
verklaringen
Dankwoord
Dit onderzoek werd mede ondersteund door subsidie van de Faculty of Graduate Studies, Universiteit van Jordanië, Amman , Jordan. De auteurs danken dr Roberta Creti (Laboratorium voor Bacteriologie, Institute of Special Hygiëne, Universiteit van La Sapienza, Rome, Italië) voor het verzenden van DNA bereid uit bepaalde E. faecalis
stammen die werd gebruikt als positieve controle voor esp
gen.
Authors 'originele ingediende dossiers voor afbeeldingen
Hieronder staan de links naar de auteurs oorspronkelijke ingediende dossiers voor afbeeldingen. 12903_2007_92_MOESM1_ESM.pdf Authors 'originele bestand voor figuur 1 Concurrerende belangen Ondernemingen De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende belangen.
Auteurs bijdragen
AAS en ND-O bijgedragen aan het ontwerp van alle experimenten en het schrijven van het manuscript . ND-O en OAH onderzocht alle patiënten en controle personen en de mondelinge monsters verzameld. RS uitgevoerd alle laboratoriumtests en co-schreef het manuscript.
| | 