Abstracte achtergrond
Parodontale ontsteking wordt gekenmerkt door blessures in collageen, epitheliale, botweefsel. De hypothesen te testen waren relatie tussen de s100, Bcl2 en myeloperoxidase in tandvlees weefsels (MPO invloed heeft op het niveau van de s100, Bcl2). Het doel van dit onderzoek was om te onderzoeken of s100 meningsuiting, Bcl2 expressie en myeloperoxidase meningsuiting in parodontale ontsteking.
Methods
27 patiënten (giant-cel epulis) en 30 patiënten (acute en chronische ontstekingen) werden opgenomen in de studie s100 expressie, Bcl2 expressie en myeloperoxidase expressie door immunohistochemie en hematoxyline -. eosine
Resultaten
Giant-cellen epulis positiviteit voor myeloperoxidase werd waargenomen bij 100% echter slechts 75,31% van reusachtige cellen waren positief voor Bcl2 uitdrukking. Acute 98,2%, 89,28% en chronische ontsteking was een significant positief voor myeloperoxidase. De immunohistochemische bevindingen van s100, hebben bcl 2 en myeloperoxidase in epitheliale lagen het resultaat van 100%, 82,2%, 100% positieve cellen bij acute en 100%, 78,25%, 100% bij chronische ontstekingsproces respectievelijk vertoonde.
Conclusie Ondernemingen de resultaten geven aan dat de pathogenese van parodontitis remming van celdood zou inhouden, door de overexpressie van bcl-2, door anoniem myeloperoxidase (leiden tot DNA-schade door het product van katalyse). De hoogste s100 activiteit gevonden in inrichtingen met chronische ontsteking. Achtergrond
Bacteriële infecties zijn de belangrijkste etiologische agentia betrokken zijn bij acute en chronische periodontitis is multifactoriële ziekte die leidt tot de vernietiging van het bot parodontium [1]. Ontstekingscellen infiltratie is het gevolg van parodontale plasmacellen: neutrofielen, T & amp; B- lymfocyten en macrofagen [2]. Parodontale laesies zijn gekarakteriseerd door een aanhoudende infiltrerende ontstekingscellen die verantwoordelijk kunnen zijn voor het bot collageen resorcinol. Uit onderzoek van Baelum V. & amp; Lopez R. [3] heeft aangetoond dat parodontitis treft tussen 10% en 15% van de wereldbevolking, zijnde de grootste oorzaak van verlies van tanden.
Inflammatoire cellen (plasmacellen) zijn uitgedrukt in myeloperoxidase. Polymorfonucleaire neutrofielen grotendeels sprak de myeloperoxidase in plasmacellen [4]. De myeloperoxidase gen is gelokaliseerd op chromosoom 17 (17q23.1) [5].
Myeloperoxidase (MPO) de synthese van microbicide hypochloorzuur waardoor de afweer tegen bacteriën [6] hebben gekatalyseerd. Bovendien plasmacellen synthetiseren hypochloorzuur van H
2O 2 en NaCl. Hydroxylgroep (-OH) is vooral actief in schadelijke belangrijke moleculen zoals DNA en lipiden [7]. Waterstofperoxide (H 2O 2) een krachtig middel zuurstof species, kan die de kernmembraan en beschadiging van het DNA. [8] Er is een groeiende steun voor de bewering dat de ontsteking veroorzaakt DNA-schade die leidt tot apoptose in parodontale cellen [9] Verder is de apoptotische stimuli kan apoptose leiden via verschillende mechanismen, met inbegrip van specifieke celdood receptoren en liganden, zoals CD95 [10 ], stress-signalen, het induceren van moleculen die direct of indirect in apoptose, via p53. Bcl2 is lid van anti-apoptotische Eiwitten die kunnen voorkomen of verminderen celdood geïnduceerd door een verscheidenheid aan stimuli [11]. De BCL-2-gen werd geïdentificeerd in het humane chromosoom t (14; 18) [12]. De intrinsieke dood route wordt geïnitieerd door de mitochondriale afgifte van cytochroom c
, een proces dat wordt geremd door anti-apoptotische Bcl-2 eiwitten [13].
S100 eiwitten tot expressie gebracht in het cytosol neutrofielen, monocyten, geactiveerde macrofagen en keratinocyten en vrijkomen bij activering of dood van deze cellen. De S100 genfamilie ten minste 13 leden die gelokaliseerd wanneer een cluster op chromosoom 1q21 [14]. s100 proteïnen ook bekend als L1 antigenen, calgranuline A en B, macrofaagmigratie remmende factor-gerelateerd eiwit (MRP) en cystische fibrose antigen, hebben verschillende functies in ontstekingsreacties [15]. Ondernemingen De resultaten van Sun-Hee et Heo . al. [16] zich tijdens bacteriële lipopolysaccharide stimulatie de expressiepatronen van S100A2 in tandvleesweefsels getoond. S100A2 expressie werd opgereguleerd door bacteriële lipopolysaccharide.
Wij hebben hypothese stelt dat er is de relatie tussen de s100, Bcl2 en myeloperoxidase in tandvlees weefsels (MPO is van invloed op het niveau van de s100, Bcl2).
Het doel van deze studie is om de expressie niveaus van s100, Bcl2 en MPO in tandvlees weefsels op verschillende stadia van parodontitis te vergelijken en in vergelijking met de reusachtige-cel epulis.
Methods
selectie van patiënten en van het tandvlees weefsels collectie
de studie monsters de parodontale en epulis weefsels van de patiënten hebben opgenomen. De proefpersonen werden verdeeld in twee gelijke groepen:
patiëntengroep (groep 1). Giant cel granuloma monsters werden verzameld uit 27 mensen die een morfologisch diagnose van de reus cel granuloma gehad (acht mannen en 14 vrouwen, leeftijd 30 tot 70 jaar, gemiddelde leeftijd, 47,51 ± 12,37 jaar).
Controlegroep (Group 2) bestond uit 30 patiënten die in Sumy Regionaal ziekenhuis was overleden. De patiënten hadden verschillende somatische diagnoses (niet atherosclerotische complicaties) en tandheelkundige - parodontit. 17 mannen en 13 vrouwen, leeftijd 43-69 jaar, gemiddelde leeftijd, hebben 57,33 ± 8,31 jaar onderzoekt. De monsters van overwoekerd tandvlees werden verzameld tijdens kaken zagen procedures. Na groep 2 weefselmonsters gekleurd met hematoxyline eosine foo werden alle monsters verdeeld in twee groepen (acute en chronische). Controle groep heeft twee subgroepen. Acute subgroepen - 13 (5 mannen en 3 vrouwen, leeftijd 43-69 jaar, gemiddelde leeftijd, 54,38 ± 7,9 jaar). Chronische subgroepen -. 17 (7 mannen en 15 vrouwen, leeftijd 44-68 jaar, gemiddelde leeftijd, 59,58 ± 8,11 jaar)
Informed schriftelijke toestemming werd verkregen van alle proefpersonen in overeenstemming met de door de Oekraïne Gezondheidsraad richtlijnen. Deze studie werd goedgekeurd door de Sumy State University (protocol nr 5/2012.)
Hematoxyline en eosine (H & E).
Vlekken zijn gebruikt voor minstens een eeuw zijn zeker noodzakelijk voor het identificeren van verschillende weefsels types en de morfologische veranderingen.
immunokleuringen
Voor s100, hebben Bcl2 en MPO uitgevoerd met formaline gefixeerde (pH 7,4) weefsel. In paraffine ingebedde weefselcoupes werden behandeld dy monoklonaal anti-s100, anti-Bcl2 en anti-myeloperoxidase (Thermo Fisher Scientific UK). In het kort werden 4 pm dikke coupes was ontdaan in xyleen en waren in het water geplaatst via gegradeerde alcoholen. Antigeenterugtrekking werd verricht in de magnetron objectglaasjes in 10 mM citraatbuffer (pH 6,2) gedurende 30 minuten bij hoog vermogen, volgens de instructies van de fabrikant. De endogene peroxidase-activiteit te verwijderen, zijn de secties behandeld met vers bereide 1,0% waterstofperoxide in het donker gedurende 30 minuten bij 37 ° C geroerd. Niet-specifieke antilichaambinding werd geblokkeerd door middel van het blokkeren van serum. De secties werden gedurende 30 minuten bij 37 ° C temperatuur van de primaire antilichamen tegen s100, Bcl2 en myeloperoxidase verdund 1: 100 in fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) pH 7,2 dan een drievoudige wassen met PBS volgt. Anti- (muis IgG)-mierikswortelperoxidaseconjugaat (1:40 000 verdunning) is voldaan voor de detectie van de S100, Bcl2 en MPO primariy antilichamen, vervolgens werden de secties gedurende 20 min bij 37 ° C geroerd. De kleur werd gevisualiseerd door DAB.
Het uiterlijk van de positieve factoren werd semiquantitatively gedetecteerd door het tellen van positieve reus cellen in het gezichtsveld. Ondernemingen De gegevens werden geanalyseerd met behulp van STATISTICA 8.0 software, user versie STA862D175437Q. De resultaten zijn gepresenteerd als gemiddelde ± SD. Het normaliseren testen hebben gebruikt voor de analyse van de gegevens geweest. Bovendien werd de niet-parametrische Student methode toegepast op een eenvoudige vergelijkende analyse. De waarde van P & lt; 0.05 zijn beschouwd als een significant.
Resultaten
De groepen 1 en 2 van de mannen en vrouwen bestond hoofdzakelijk leeftijdsgroep 30- tot 70-jarige. Groep 1 reuscellen opgetreden in de onderkaak (55%) vaker dan in de bovenkaak. In de groep 2 zijn de patiënten verdeeld in 13 met acute en 17 met chronische ontstekingen.
In Fig. 1a Een waargenomen we low-size cel infiltratie in acute ontsteking. Aanzienlijke celinfiltratie en prolifererende epitheel (fig. 1b) bleek intensiever in de chronische ontsteking is. Acute en chronische ontstekingscellen worden circulerende leukocyten, plasmacellen en weefselmacrofagen. Figuur 1 De parodontale weefsels Haematoxyline en eosine gekleurde (x100 vergroting) A (a) - pint-size cellen infiltratie met bovenliggende oedeem, B (a) - lagen van het epitheel, C (b) - grote cellen infiltratie met bovenliggende oedeem, D (a) - epitheliale proliferatie, E (c) - bloeding zone F (c) - reuzencellen
perifere reuzencel epulis wordt getoond in Fig. 1c Microscopisch onderzoek heeft het weefsel met de overvloed van giant-cellen (Fig. 1c F), vezelig bindweefsel, de gebieden van bloedingen (afb. 1c E) en weinig haarvaten onthuld. Er was geen teken van maligniteit. Chronische ontsteking wanneer de macrofagen niet aan verschillende deeltjes samensmelten losgemaakt en vormen meerkernige reuzencellen. Trouwens, morfologisch verschillende reuscellen ook verschijnen in sommige tumoren ook.
S100, Bcl2 en MPO uitgedrukt in giant-cellen. S100 expressie, Bcl2 expressie en myeloperoxidase expressie in giant-cellen epulis worden getoond in Fig. 2. immunohistochemie, 100% van giant-cellen bleken positief voor myeloperoxidase te zijn, terwijl slechts 75,31% van de reus-cellen positief waren voor Bcl 2 (P & lt; 0,05). Door het feit s100 eiwit uitgedrukt in 10,72% van de reus-cellen. Myeloperoxidase heeft fysiologisch uitgedrukt in plasma cellen van epulis 87,69%. s100 en bcl 2 hebben geuit in het plasma cellen 24,34% (P & lt; 0,05) en 11,28% respectievelijk 2 en bcl myeloperoxidase expressie zwak of afwezig is in het bindweefsel. Figuur 2 Expressie van s100, bcl2and myeloperoxidase in tandvlees (x100 vergroting): A - Lagen van het epitheel met myeloperoxidase meningsuiting, B - Bloed cellen infiltratie met myeloperoxidase meningsuiting, C - pericellulaire en perivasculaire oedeem, D - Bloed cellen infiltratie met myeloperoxidase expressie , E - Lagen van het epitheel met myeloperoxidase expressie en proliferatie, F - Giant cellen met myeloperoxidase meningsuiting, G - Fibroblastische stroma, H - Bloed cellen infiltratie met myeloperoxidase meningsuiting, I - pericellulaire en perivasculaire oedeem, G - Bloed cellen infiltratie met Bcl 2expression , K - Lagen van het epitheel met een hoog niveau van BCL 2 expressie, L - Lagen van het epitheel met bcl 2expression, N - Fibroblastische stroma, M - Bloed cellen infiltratie met bcl 2 expressie, O - pericellulaire en perivasculaire oedeem, P - Giant cellen met bcl 2 expressie, Q - Bloed cellen infiltratie met lage bcl 2expression, R - Bloed cellen infiltratie met s100 meningsuiting, S - pericellulaire en perivasculaire oedeem, T - Lagen van het epitheel met s100 meningsuiting, U - Lagen van het epitheel met een laag s100 meningsuiting, V - Fibroblastische stroma, w - Bloed cellen infiltratie met s100 meningsuiting, X - Fibroblastische stroma, Y - Giant cellen met "slecht" s100 expressie
immunoexpression van s100, Bcl2 end MPO (groep 2) zijn bevestigd door de aanwezigheid van bruin gekleurd cytoplasma in cel infiltratie. In het algemeen s100 kleuring was intensiever in de plasmatische cellen. In acute ontsteking S100 (fig. 2) bleek slechts 36,2 ± 5,3% van de cellen positief. De cel infiltratie, toonde Bcl2 immunoreactiviteit bedacht 76,1 ± 3,3% (P & lt; 0,05) in acute proces (fig. 2). Myeloperoxidase is uitgedrukt in 98,2 ± 5,9% (P & lt; 0,01). Positieve cellen bij acute ontsteking
Figuur 2 toont de resultaten van de s100, Bcl2 en MPO expressie in chronisch proces
myeloperoxidase 82,. 28 ± 2,5% P & lt; 0,01 werd uitgedrukt in chronische plasma infiltratie tijdens ontsteking. Bcl 2 werd uitgedrukt in chronische plasma cellen infiltratie 55,67 ± 6,1% P & lt; 0,05. Ð ¢ he immunoexpression van S100 in cel infiltratie is het resultaat van 95,0 ± 0,31% positieve cellen getoond.
Ð ¢ he immunoexpression van s100, Bcl2 en MPO in epitheliale lagen (acute proces) hebben aangetoond dat het gevolg is van 100%, 82,2 ± 2,93% en 100% respectievelijk. Bij chronische proces van ontsteking de positieve cellen demonstratrd s100 - 100%, Bcl2 - 78,25 ± 4,23% en myeloperoxidase -. 100% respectievelijk
Discussie Inloggen Deze studie heeft beweerd dat MPO in staat was om hoger te stimuleren van Bcl2 expressie in ontstekingscellen tijdens chronische en acute proces. Myeloperoxidase activiteit uitgedrukt in neutrofielen aangeworven om het tandvlees na chemische of immunologische beledigingen bijdraagt aan weefselvernietiging. Meloperoxidase kunnen beïnvloeden de omvang en /of de ernst van parodontale ziekten [17].
Hoog niveau van de MPO waargenomen in reuzencellen. Verhoogde expressieniveaus kunnen Bcl2 cellulaire apoptose voorkomen, waardoor ontstekingscellen induceren lokaal blijven in de periodontale weefsels, waardoor daaruit overmatige secretie van cytokinen die leidt tot de geleidelijke afbraak van periodontale weefsels [1]. Myeloperoxidase kan bevrijd worden van geactiveerde neutrofielen door degranulatie alleen in een gematigd niveau [18], en Bcl2 beschikbaarheid beschermt regio's. Cytolyse van neutrofielen tijdens ontsteking formatie kan een vrijgeefmechanisme [18, 19] te verschaffen en de hoge myeloperoxidase en S100 leggen. Activiteit van S100A12 en C-reactief proteïne kan zijn markers van inflammatoire activiteit in chronische periodontitis [20]. Eerdere studies hebben gesuggereerd dat apoptose is betrokken bij de pathogenese van inflammatoire parodontitis [21]. Ook is aangetoond dat de hogere frequentie van Bcl-2 expressie leidt tot progressieve parodontitis [22].
Gamonall et al. [23] is niet gevonden statistisch verschil in varions hoeveelheid Bcl2 bij gezonde tandvlees en tandvlees van de patiënten met parodontitis. Onze studies hebben het uitzicht op Pandilova [24] en Ellis et al bevestigd. [25] dat chronische progressie van ontsteking afname drukt bcl-2. In de menselijke gingivale fibroblasten met ontsteking activering van Bcl2 is niet waargenomen in verschillende stadia van de infectie en reuze-cell epulis. Sule Bulut et al. [26] Resultaten geven aan dat de pathogenese van cyclosporine A geïnduceerde gingivale overmatige remming van apoptose en overexpressie van Bcl-2 kan betrekken bij de vaststelling van hoge serum cyclosporine A. Ons onderzoek heeft aangetoond dat een hoog Bcl2 expressie en remming van apoptose in cellen gingivale epitheel. Wij geloven dat dit komt door het epitheel beschermende functies. In gingivale epitheel s100 ook samen met het differentiatiestadium [27]. Deze positieve cellen is bekend dat macrofagen en neutrofielen [28] te activeren. Onderzoek van Saito et al. [29] toonde talloze bcl-2-positieve epitheelcellen gingivale biopten van patiënten die het nemen van nifedipine en fenytoïne, wat aangeeft dat dit eiwit betrokken kan zijn bij de ontwikkeling van nifedipine geïnduceerde gingivale hyperplasie. Wij geloven dat de aanwezigheid van Bcl-2-eiwit is geen aanwijzing reuzencel epulis gunstige gangen.
S100 speelt een belangrijke rol bij de immuunrespons verband met periodontitis. s100 2 bindt Ca2 + en 2 Zn2 + -ionen. Als Zn2 + bindt S100 vermindert de Ca2 + affiniteit. S100 werkt eveneens met p53 in een Ca2 + -afhankelijke wijze, die de stabiliteit van S100-p53 interactie [30] Bovengenoemde s100-p53 interactie leidt tot remming van apoptose tijdens inflammatie op. Het Bcl-2 eiwit een krachtige remmer van celdood, terwijl het wild-type p53 eiwit activeert de apoptotische route [5].
Gemuteerde p53 verliest deze functie en staat de proliferatie van neoplastische cellen. Bcl-2 moduleert ook de functie van p53 en veroorzaakt proliferatie en transformatie [31] cellen.
Thr expressie van S100 zijn gedetecteerd als pro-inflammatoire fagocyten cellen op plaatsen van darmontsteking [32, 33]. Systemische auto-immuunziekten (dermatomyositis, systemische lupus erythematosus, ziekte van Kawasaki etc.) duidelijk verband met S100 expressie in macrofagen infiltraton met degeneratie van weefsels [34, 35].
Conclusie
Onderzoek naar Bcl2 marker in gingival cellen tijdens parodontale ontsteking we suggestie dat weefsels parodontium, continu blootgesteld aan bacteriële infecties kunnen cellen met een hoog niveau van myeloperoxidase resultaten die schade DNA per product van katalyse. Ondernemingen De hoogste niveaus van s100 activiteit bevatten, zijn gevonden op plaatsen met chronische ontsteking. Onze resultaten suggereren dat lage s100 expressie een belangrijke rol kunnen spelen in de activiteit van giant cellen in giant cell epulis. Dat wordt beschouwd als de belangrijkste factoren van prognose reuscel granuloom is. Door ons onderzoek hebben we een schema Fig. 3. Fig 3 S100, Bcl2 en myeloperoxid eiwit interacties tijdens parodontale ontsteking
verklaringen
Dankwoord
De auteurs willen graag aan het Laboratorium voor Immunologie danken aan de Sumy State University.
Open Access Dit artikel wordt verspreid onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution 4.0 International License (http:. //creativecommons org /licenties /door /4. 0 /), die het mogelijk maakt onbeperkt gebruik, distributie en reproductie in elk medium, mits u de juiste krediet aan de oorspronkelijke auteur (s) en de bron te geven, een link naar de Creative Commons-licentie, en aangeven of wijzigingen zijn aangebracht. De Creative Commons Public Domain Dedication waiver (http:. //Creativecommons org /publicdomain /zero /1 0 /) van toepassing op de ter beschikking gestelde in dit artikel, tenzij anders vermeld data
Competing. belangen Ondernemingen de auteurs verklaren dat ze geen concurrerende belangen.
auteurs bijdragen
PCCF waren verantwoordelijk voor de opzet van het onderzoek. SCT geanalyseerd en geïnterpreteerd de gegevens. MTX het rapport heeft geschreven. BFPP deed het laboratoriumwerk. RM, geholpen om het manuscript op te stellen. Alle auteurs lezen, commentaar en keurde het laatste artikel.
