Abstracte achtergrond
Om de antibacteriële werking van fotodynamische therapie op Enterococcus faecalis (E. faecalis)
biofilms bepalen experimenteel geïnfecteerde menselijke wortelkanaalbehandelingen in primaire infecties en endodontische herbehandeling.
Methods
honderdzestig single-geworteld geëxtraheerd tanden met een wortelkanaal werden bereid onder toepassing ProTaper instrumenten. Zeventig exemplaren werden achtergelaten zonder wortelkanaalbehandeling vullen en geautoclaveerd. De wortel grachten van nog eens 70 exemplaren waren gevuld met Thermafil en AH Plus en het wortelkanaal vullingen werden verwijderd na 24 uur met ProTaper D bestanden en plasma gesteriliseerd. De monsters werden geïnfecteerd met een klinisch isolaat van E. faecalis
gedurende 72 uur. Monsters werden genomen met behulp van steriele papier wijst op de aanwezigheid van E. faecalis
in de wortelkanalen bepalen. De monsters werden willekeurig verdeeld in groepen op basis van hun behandeling met 20 tanden en elke controle. In de PDT groep werden de tanden behandeld met PDT, bestaande uit de fotosensibilisator toluidine blauw en de PDT lichtbron bij 635 nm. In de NaOCl (natriumhypochloriet) groep werden de wortelkanalen gespoeld met 10 ml 3% NaOCl. In de NaOCl-PDT groep werden de wortelkanalen gespoeld met 10 ml 3% natriumhypochloriet en dan behandeld met PDT. De monsters werden genomen na behandelingen met steriele papier punten. Daarnaast werd de resterende wortelkanaalbehandeling vulmateriaal hersteld van het wortelkanaal muren. Overlevingsfracties van de monsters werd berekend door het tellen van kolonievormende eenheden. Een enkele variantieanalyse (ANOVA) werd toegepast op de gegevens om het effect van verschillende behandeltechnieken bepalen.
Resultaten
Antimicrobiële behandeling van wortelkanalen veroorzaakte een significante afname van bacteriële verontreiniging in alle groepen. NaOCl irrigatie geëlimineerd E. faecalis
het meest effectief. PDT alleen was minder effectief in vergelijking met NaOCl irrigatie en de combinatie van NaOCl irrigatie en PDT. CFU niveaus hersteld van het vulmateriaal na NaOCl irrigatie van het wortelkanaal werden hogere 10fold vergeleken met PDT en de combinatie van NaOCl irrigatie en PDT.
Conclusies
Photo Dynamische Therapie gedood E. faecalis
in experimentele primaire endodontische infecties en trok zich terug menselijk wortelkanalen. PDT is een effectieve aanvulling in wortelkanaal desinfectie, vooral in endodontische herbehandeling.
Sleutelwoorden
Photo Dynamische Therapie PDT gefotoactiveerd chemotherapie Fototherapie Laser wortelkanaalbehandeling desinfectie Endodontic infectie Enterococcus faecalis Electronic aanvullend materiaal
De online versie van dit artikel (doi :. 10 1186 /1472-6831-14-132) bevat aanvullend materiaal, dat beschikbaar is voor geautoriseerde gebruikers is achtergrond
een wortelkanaalbehandeling is de combinatie van mechanische instrumentatie van een wortelkanaalbehandeling systeem, ervan. chemische debridement en vullen met een inert materiaal, ontworpen om te behouden of te herstellen van de gezondheid van de periradiculaire weefsels. Hoewel infecterende micro-organismen tijdens mechanisch debridement gecombineerd met chemische irrigatie verwijderd, resterende bacteriën gemakkelijk detecteerbaar in ongeveer 50% op het moment van wortelkanaal vulling ondanks uitgebreid irrigatie met natriumhypochloriet [1]. Bacteriën gevonden in isthmi, laterale kanalen, vinnen, vertakkingen en anatomische structuren, die onbereikbaar blijven mechanische instrumenten [2, 3].
Bacteriën en bacteriële toxinen ervan in het wortelkanaal na chemo-mechanische voorbehandeling en wijzigingen in de gevulde wortelkanaal systeem via speeksel microlekkage, kan lekkage van de coronale restauratie of onvoldoende wortelkanaalbehandeling vulling leiden tot falen [4-7]. Post-behandeling van ziekten geassocieerd met een slechte endodontische behandeling kan worden veroorzaakt als gevolg van het niet gebruik van rubber dam, slechte toegang resulteert in gemiste onbehandelde wortelkanaalbehandelingen, onvoldoende instrumentatie, onvoldoende desinfectie, inadequate wortelkanaalbehandeling vulling of iatrogene fouten, bijv. gebroken instrument, perforatie, richel [8] wortelkanaalbehandeling herbehandeling.
wordt moeilijker geacht ten opzichte van de primaire behandeling wortelkanaalbehandeling want er zijn meestal wortelkanaal obstakels te overwinnen, bijvoorbeeld guttapercha verwijdering wortelkanaal materialen zoals zilver punten, palen of gebroken instrumenten corrigeren iatrogene fouten zoals richels of perforaties [8]. Eerdere studies hebben aangetoond dat wortelkanaalbehandeling vulmateriaal kan niet volledig worden verwijderd waardoor guttapercha en /of sealer op het wortelkanaal wand waardoor desinfectie van het wortelkanaal systeem moeilijker in vergelijking met de primaire wortelkanaalbehandelingen [9-11].
na verwijdering van wortelkanaal vullen en andere obstakels wortelkanaal heeft residuele bacteriële contaminatie wordt geminimaliseerd voor een succesvolle endodontische behandeling [12]. Een favoriete methode wordt afwisselend irrigatie met behulp van natriumhypochloriet en een chelaatvormer, bijv. ethyleendiaminetetra-azijnzuur of citroenzuur [13]. Chloorhexidine en jodium verbindingen zijn ook bepleit als extra irrigants voor wortelkanaalbehandeling (her) behandeling [14].
Endodontic storingen worden geassocieerd met een hoog gehalte aan gram-positieve aërobe en facultatieve micro-organismen [15]. Enterococcus feacalis
, die kan worden gevonden in de behandelde en onbehandelde wortelkanalen, is sterk geassocieerd met storingen [16]. Pseudomonas
, stafylokokken en streptokokken
zijn ook oorzakelijke voor mislukkingen.
Fotodynamische therapie (PDT), ook bekend als photoradiation therapie, lichttherapie, photochemotherapy of fotogeactiveerde chemotherapie (PACT) is een medische behandeling, die gebruik maakt de activering van een fotosensibiliserend middel (fotosensitizer) door blootstelling aan licht met een bepaalde golflengte in aanwezigheid van zuurstof [17]. Er is een energieoverdracht van de fotosensibilisator geactiveerd om zuurstof dat leidt tot de vorming van toxische zuurstofspecies, zoals singlet zuurstof en vrije radicalen. Singlet zuurstof radicalen veroorzaken een snelle en selectieve vernietiging van micro-organismen. De meeste fotosensitizers worden geactiveerd door licht tussen 630 en 700 nm. De belangrijkste fotogevoelige stoffen die in de literatuur hematoporfyrinederivaten (620-650 nm), fenothiazine, zoals toluidine blauw en methyleenblauw (620-700 nm), cyanine (600-805 nm), phytotherapic middelen (550-700 nm) en hytalocyanines (660-700 nm) [18-20].
PDT is aangetoond dat een aanvullende therapie bij conventionele endodontische behandeling om de microbiële reductie van wortelkanalen primaire endodontische infecties [21-23] optimaliseren. Garcez et al. [24] het effect van PDT bij endodontische herbehandeling in vivo. Zij vonden dat PDT als aanvulling bij conventionele endodontische behandeling leidt tot een aanzienlijke verdere reductie van bacteriële lading na irrigatie gebruikt natriumhypochloriet, waterstofperoxide en EDTA en is effectief tegen multiresistente bacteriën. In herbehandelingen is het onmogelijk om te verwijderen het wortelkanaal vullen volledig, belemmeren desinfectie van het wortelkanaal systeem. Op basis van eerdere bevindingen, wordt PDT verondersteld om een extra antimicrobiële werking na wortelkanaalbehandeling irrigatie, vooral op resistente micro-organismen hebben.
Het doel van deze studie is om de antibacteriële werking van fotodynamische therapie (PDT) op Enterococcus faecalis
biofilms in experimenteel geïnfecteerde menselijke wortelkanalen van primaire en secundaire endodontische infecties.
Methods
Tooth exemplaren
Voor deze studie hebben we gekozen honderdzestig intact gewonnen permanente menselijke voortanden en premolaren. Twee röntgenfoto's werden genomen van elk monster, een buccale-linguale /palatinale en één afbeelding mesiaal-distale, om ervoor te zorgen dat de monsters hadden een normale pulp kamers, patent wortelkanaalbehandelingen en volledig gevormde toppen zonder enig teken van resorptie. Tanden met wortelkanaalbehandeling vullingen werden uitgesloten.
De tanden aan het Centrum voor Dental Medicine, afdeling Kaakchirurgie, Universitair Medisch Centrum Freiburg werden geëxtraheerd, als gevolg van acute tand pijn, ernstige inflammatoire complicaties van systemische ziekten, in het kader van orthodontische behandeling, acute infecties (abces), slechte algemene gezondheid of, in het geval van verstandskiezen voordat complicaties van orthodontische behandeling. Patiënten gaven hun schriftelijke toestemming voor het gebruik van de geëxtraheerde tanden voor onderzoek, dat werd beoordeeld en goedgekeurd door de ethische commissie van de Universiteit van Freiburg (175/13) goedgekeurd.
Standard toegang holtes werden voorbereid en de precieze tand lengte werd bepaald door het invoegen van een ISO 10 K-bestand (VDW®, München, Duitsland) in het kanaal totdat het bestand was zichtbaar bij de apicale foramen. De punt van het bestand werd vervolgens precies op het apicale foramen van de tand aan de tand lengte te meten. Werklengte (WL) werd ingesteld 1 mm kort van tand lengte. Root grachten werden bereid met behulp ProTaper instrumenten (Dentsply®, Konstanz, Duitsland) volgens de instructies van de fabrikant in combinatie met een Endo IT Professional (VDW®, München, Duitsland) bij 250 rpm. Tijdens wortelkanaalvoorbereiding werd een 3% natriumhypochlorietoplossing irrigatiewaterverbruik [25]. Wortelkanaal preparaat werd uitgevoerd met behulp van ProTaper vormgeven bestanden S1 en S2 en afwerking files F1 en F2. Apicale preparaat werd uitgevoerd eindigt bij ProTaper F2-bestand op WL. Een ProTaper F2 guttapercha punt werd vastgesteld op WL en de apicale regio was bedekt met composiet gebruik OptiBond FL (Kerr Corporation, Orange, CA, USA) en CeramX mono (Dentsply®, Konstanz, Duitsland) voor een apicale afdichting. Tanden werden ingebed in methacrylaat (Techovit 4070 ™, Haereus Kulzer®, Wernheim, Duitsland) en vervolgens decoronated met behulp van een diamant roterende snij-instrument (6830 L.314.014, Gebr BRASSELER GmbH & amp;. Co. KG, Lemgo, Duitsland) bij 40.000 tpm op de cement-glazuur kruising. Na een laatste irrigatie met 3% natriumhypochloriet en 5% natriumthiosulfaat, werden de tanden vervolgens gedurende 18 minuten geautoclaveerd bij 134 ° C. Om te controleren of de wortelkanalen waren vrij van micro-organismen, werden monsters genomen van het wortelkanaal met behulp van steriele ProTaper F2 papier punten. Papierpunten geïncubeerd in het wortelkanaal gedurende één minuut en vervolgens overgebracht in een flacon met 750 pl steriele Ringer's oplossing, 30 seconden gewerveld en 100 ul werden gekweekt op een agar plaat gedurende 24 uur. Tanden met een positieve kweek werden uitgesloten
wortelkanaalbehandeling vulling. En herbehandeling
De wortel grachten van 70 exemplaren werden gevuld met behulp van een afmeting 25 Thermafil obturator (Dentsply®, Konstanz, Duitsland) in combinatie met een epoxy hars gebaseerde sealer (AH Plus, Dentsply®, Konstanz, Duitsland). Voor ontsmetting werden de Thermafil obturators geïncubeerd in een flacon met 3% natriumhypochlorietoplossing gedurende 10 minuten [26]. De sealer werd geplaatst in de coronale derde deel van het wortelkanaal met een steriel ProTaper F2 papier punt. Elke afsluiter werd verwarmd met behulp van een ThermaPrep Plus Oven (Dentsply®, Konstanz, Duitsland) tot een akoestisch signaal geeft aan dat de afsluiter klaar voor plaatsing was. Het werd vervolgens ingebracht in de voorbereide wortelkanaal met een langzame, stevig en continue beweging in apicale richting. De handgreep van elk afsluitorgaan gestabiliseerd tijdens het afkoelen. De drager werd gesneden in staat zijn om het gemakkelijk te verwijderen. 2 röntgenfoto's werden van elk monster, een buccale-linguale /palatinale en een beeld mesiaal-distale om volledige vulling van het wortelkanaal waarborgen.
Na 24 uur werden de dragers verwijderd en het wortelkanaal vulling werd verwijderd met ProTaper D1 en D2 instrumenten tot werklengte werd bereikt met behulp van 5 x vergroting. Na verwijdering van de wortelkanaalvulling 2 röntgenfoto werden van elk monster de resterende wortelkanaal vulmateriaal visualiseren.
Gedemonteerde wortelkanaalvulling de monsters werden coupes lengterichting met een slijptol diamantzaag onder waternevel. Monsters werden gesteriliseerd met behulp van plasma sterilisatie (H
2O 2). Na sterilisatie de twee delen van de monsters onder toepassing van een hechtmiddel (Heliobond, Ivoclar Vivadent, Ellwangen, Duitsland) werden aan elkaar gehecht.
Enterococcus faecalis
infectie
Wortelkanalen werden geïnfecteerd met een klinisch isolaat van E. faecalis. E. faecalis
werd overnacht gekweekt in Tryptic Soy Bouillon (TSB) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) bij 36 ° C 5 tot 10% CO 2 en ingespoten in de voorbereide wortelkanaal met behulp van een 30 gauge irrigatie naald. Root grachten werden besmet met E. faecalis
gedurende 72 uur om de vorming van biofilm mogelijk te maken. TSB werd elke 24 uur vervangen. Na 72 uur werden de wortelkanalen gespoeld met 5 ml steriele Ringer's oplossing en bemonsterd via 3 steriele ProTaper F2 papierpunten (Dentsply®, Konstanz, Duitsland) aan de aanwezigheid van E. faecalis
in de wortelkanalen evalueren. De papierpunten werden overgebracht in 750 pl steriele Ringer's oplossing. De monsters werden gekweekt op bloed agar om de aanwezigheid van E. faecalis
in de wortelkanalen bepalen. 10 exemplaren die niet wortel werden gevuld en 10 exemplaren met teruggetrokken wortelkanalen werden achtergelaten zonder besmetting met E. faecalis Kopen en diende als controlegroep.
Na 72 uur werden monsters genomen met behulp van papier punten en gekweekt op bloed agar aan te controleren of niet-geïnfecteerde wortelkanalen waren vrij van micro-organismen.
Antimicrobiële behandeling van primaire infecties
Zeventig specimens met primaire infecties werden willekeurig verdeeld in drie groepen. In de eerste groep (PDT groep), de wortelkanalen van 20 monsters werden behandeld met PDT (PACT200, Cumdente, Tübingen, Duitsland), die bestaat uit een lichtbron bij 635 nm in combinatie met de fotosensibilisator PACT fluïdum Endo, een toluïdine blauwe oplossing bij 13-15 mg /ml. PACT-Fluid Endo werd in het wortelkanaal met behulp van een 30 gauge naald gebracht. Na 60 seconden incubatie werd de PACT-Fluid Endo geactiveerd met de PACT-lichtbron met de PACT Light Guide Endo tip, een 100 mW LED-lichtbron bij 635 nm. De PACT lichtgeleider Endotip werd zo dicht mogelijk WL en geactiveerd gedurende 120 seconden volgens de instructies van de fabrikant. Root grachten werden gespoeld met 5 ml Ringer-oplossing voor het PACT-Fluid Endo oplossing te verwijderen, en bemonsterd met 3 steriele ProTaper F2 papier punten. Papierpunten werden overgebracht in 750 pl steriele Ringer's oplossing, 30 seconden gewerveld en 100 ul werden gekweekt op een agar plaat en kolonievormende eenheden werden geteld.
In de tweede groep (groep NaOCl), 20 wortelkanalen werden geïrrigeerd met 10 ml 3% NaOCl met een stroomsnelheid van 3-3,5 ml per minuut. NaOCl werd verwijderd door het spoelen van de wortelkanalen met 2,5 ml steriele Ringer's oplossing.
In de derde groep, werden 20 wortelkanaalbehandelingen behandeld met natriumhypochloriet en PDT (NaOCl-PDT groep). De wortelkanalen werden gespoeld met 10 ml 3% natriumhypochloriet met een 30 gauge naald irrigatie met een stroomsnelheid van 3-3,5 ml per minuut. Overmaat natriumhypochloriet werd verwijderd door te spoelen met 2,5 ml steriele Ringer's oplossing en de wortelkanalen werden behandeld met PDT en bemonsterd volgens het protocol van de PDT groep. In een controlegroep, werden 10 wortelkanalen gespoeld met 10 ml Ringer-oplossing.
Antimicrobiële behandeling van secundaire infecties
Voor antimicrobiële behandeling van de secundaire endodontische infecties, werden 70 monsters willekeurig verdeeld in drie groepen. In de eerste groep (PDT groep), werden 20 wortelkanaalbehandelingen behandeld met PDT (PACT, Cumdente, Tübingen, Duitsland) en bemonsterd op de behandeling van de PDT groep van de primaire infecties.
In de tweede groep (NaOCl groep) , 20 wortelkanalen werden geïrrigeerd met 10 ml 3% NaOCl met een stroomsnelheid van 3-3,5 ml per minuut. NaOCl werd uitgespoeld de wortelkanalen met 2,5 ml steriele Ringer's oplossing.
In de derde groep (NaOCl-PDT groep) werden 20 wortelkanalen gespoeld met 10 ml 3% natriumhypochloriet (NaOCl) met een 30 gauge irrigatie naald met een debiet van 3-3,5 ml per minuut. NaOCl werd verwijderd door irrigatie met 2,5 ml steriele Ringer's oplossing en een monster is genomen met 3 steriele ProTaper F2 papier punten. Daarna wortelkanalen werden behandeld met PDT en bemonsterd zoals hierboven beschreven.
In de controlegroep werden 10 wortelkanalen gespoeld met 10 ml Ringer-oplossing. Na
antimicrobiële behandeling werden monsters genomen van alle monsters met behulp 3 steriele ProTaper F2 papierpunten en overgebracht in een flacon met 750 pl steriele Ringer's oplossing de overlevingsfracties bepalen.
Monsters werden opnieuw gescheiden met een steriele scalpel en de resterende wortelkanaal vulling op het wortelkanaal wanden werd verzameld met een steriel handfile (VDW ®, München, Duitsland) in een flacon met 5 ml TSB en gedurende de nacht gekweekt. 100 pl van de monsters werden vervolgens op bloed agar. Overlevingsfracties van de monsters werd berekend door het tellen van kolonievormende eenheden.
Scanning elektronenmicroscopie (SEM)
voor SEM onderzoek tand specimens, monsters van Thermafil guttapercha en AH Plus bereid. Monsters van vers gemixte AH Plus werden gedurende 24 uur. AH Plus monsters en Thermafil monsters werden gedesinfecteerd met 70% ethanol. De tand monsters werden verticaal gesneden in twee stukken met behulp van een roterende snij diamantzaag. Tand specimen secties werden in een autoclaaf bij 134 ° C gedurende 18 minuten. De tand specimen secties en materiaal monsters werden besmet met E. faecalis
in TSB gedurende 72 uur in chambered dekglaasjes (μ-Slide 8 goed, ibidi GmbH, Martinsried, Duitsland). De materiaalmonsters en tand specimens werden verdeeld in drie groepen. De putjes van een groep heeft antimicrobiële behandeling krijgen en diende als controle. In groep twee monsters en de materiaalmonsters werden behandeld met PACT fluïdum Endo voor 1 minuut en de PACT Lichtbron gedurende 1 minuut. In groep drie de monsters en materiaalmonsters werden geïncubeerd met 3% NaOCl gedurende 1 minuut. Na antimicrobiële behandeling werden de putjes gewassen met 1 ml steriele Ringer's oplossing. De monsters en monsters werden gefixeerd in 8% formaldehyde gedurende de nacht bij 4 ° C en gedehydrateerd in gegradeerde alcohol (30%, 50%, 70%, 80%, 90% en eenmaal per twee in 99,8% gedurende 1 uur). Dan kritisch punt drogen (Critical Point Dryer CPD 030; Bal-Tec, Wallruf, Duitsland) met vloeibare kooldioxide werd volgens de standaard procedure uitgevoerd. De monsters werden gesputterd met goud per SCD 050 coater (Bal-Tec) en onderzocht met een Zeiss Leo 435 VP scanning elektronenmicroscoop (Leo Electron Microscopy Ltd Samenwerking Zeiss Leica, Cambridge, Engeland) en 10-12 kV.
statistische analyse
Een one-way variantie-analyse (ANOVA) werd met het oog op het effect van verschillende behandelingstechnieken op de reductie van E. faecalis
in wortelkanalen beoordelen toegepast op de gegevens. Het significantieniveau werd ingesteld op p & lt; 0.05
. Alle statistische tests werden uitgevoerd met SVP (15,0).
Resultaten
Effect van antimicrobiële behandelingen in primaire infecties
Figuur 1 toont 72 uur oud E. faecalis
biofilm. Bedoel E. faecalis
tellingen voor antimicrobiële behandelingen waren 2,32x10 6 CFU /ml. Figuur 1 Rasterelektronenmicrografieën van wortelkanaal dentine en de wortel vulmaterialen Thermafil guttapercha en AH Plus gekoloniseerd met E.faecalis bij een vergroting van 5000 ×. Behandelingen met behulp van 3% NaOCl of PDT ernstig verminderen E. faecalis
dentine en de oppervlakken van het wortelkanaal vulmaterialen. Er bleken weinig normale gevormde bacteriële cellen op guttapercha en AH Plus na de behandelingen. Resterende cellen op dentine nabehandelingen toonde abnormale vorm.
Behandeling van wortelkanalen met PDT alleen veroorzaakte een vermindering in bacteriële belasting, resulterend in een 92,7% doding van E. faecalis
. Spoelen wortelkanalen met 3% natriumhypochloriet (NaOCl) bereikte een vermindering van 99,9% en de combinatie van NaOCl desinfectie en PDT verminderde bacteriële levensvatbaarheid van 99,9%. Irrigatie met 3% natriumhypochloriet en de combinatie van NaOCl irrigatie en PDT tot een aanzienlijk grotere vermindering van E. faecalis
vergeleken PDT behandeling alleen (p & lt; 0,0001). gevallen na irrigatie met 3% NaOCl, 80% van de wortelkanalen waren cultuur negatief grachten. De aanvullende behandeling met PDT toename van het aantal van de cultuur negatieve kanalen tot 90%. Toen wortelkanalen werden behandeld met PDT alleen, 1 op de 20 gevallen (5%) was de cultuur negatief (tabel 1) .table 1 Vermindering van de E. faecalis na antimicrobiële behandeling
Besmetting met E. faecalis
CFU /ml × 106
behandeling
Contaminatie na behandeling CFU /ml x 106
Vermindering van E. faecalis
[%]
Cultuur negatieve monsters [%]
Mean
Std Dev
3% NaOCl
PDT
Mean
Std Dev
Primary infection
2.48
2.04
X
-
0.0006
0.0003
99.9a
80
2.22
1.92
-
X
0.16
0.14
92.7b
5
2.13
1.86
X
X
0.0004
0.0003
99.9a
90
Secondary infection
2.24
1.76
X
-
0.0005
0.0001
99.9a
55
2.57
2.21
-
X
0.02
0.04
99.9a
0
2.26
1.58
X
X
0.001
0.001
99.9a
30
Percentage van de cultuur negatieve monsters. Superscript letters geven statistische verschillen.
Effect van antimicrobiële behandelingen secundaire infecties
Antimicrobiële behandeling van de wortelkanalen teruggetrokken veroorzaakte een significante afname van bacteriële verontreiniging in drie groepen, resulterend in een 99,9% doding van E. faecalis
(Tabel 1). NaOCl irrigatie bereikt cultuur-negatieve wortelkanaalbehandelingen in 55% van de gevallen, terwijl in het gebit behandeld met PDT geen monster was de cultuur-negatief. Voor de combinatie van NaOCl irrigatie en PDT 30% van de gevallen bleken de cultuur-negatief.
E. faecalis
geïsoleerd van het wortelkanaal vulmateriaal
Figuur 1 toont 72 uur oud E. facealis
biofilm op Thermafil guttapercha en AH Plus. In alle groepen facealis E.
kon gekweekt uit het geïsoleerde vulmateriaal hersteld van het wortelkanaal muren. Er werden gelijke hoeveelheden CFU gewonnen uit wortel vulmateriaal exemplaren met PDT en de combinatie van NaOCl irrigatie gevolgd door PDT. CFU niveaus hersteld van het vulmateriaal na NaOCl irrigatie van de wortelkanalen waren ongeveer 10fold hoger vergeleken met PDT en de combinatie van NaOCl irrigatie en PDT.
Bespreking In deze studie PDT veroorzaakt een vermindering van de bacteriële levensvatbaarheid zowel de primaire endodontische infectie en trok zich terug wortelkanalen besmet met E. faecalis
. Behandelen wortelkanalen met natriumhypochloriet (NaOCl), PDT of een combinatie van NaOCl irrigatie en PDT veroorzaakte een significante afname van E. faecalis
in het wortelkanaal. In de gevallen van primaire infecties, de combinatie van NaOCl irrigatie en PDT NaOCl irrigatie bereikte het hoogste aantal van de cultuur-negatieve wortelkanalen (90%), NaOCl irrigatie alleen bereikt cultuur-negatieve wortelkanaalbehandelingen in 80%, terwijl na behandeling met PDT alleen één exemplaar was de cultuur-negatief. Voor secundaire infecties, NaOCl irrigatie bereikte het hoogste aantal van de cultuur-negatieve wortelkanalen, terwijl na behandeling met PDT alle exemplaren waren kweek-positief. Garcez et al. [24] het effect van PDT bij endodontische herbehandeling in vivo. Zij vonden dat PDT als aanvulling bij conventionele endodontische behandeling leidt tot een aanzienlijke verdere reductie van bacteriële lading na irrigatie behulp NaOCl, waterstofperoxide en EDTA en is effectief tegen multiresistente bacteriën. Op basis van deze bevindingen wordt verondersteld PDT een extra antimicrobieel effect na wortelkanaal irrigatie, vooral op resistente micro-organismen. De resultaten van dit onderzoek kan deze bevindingen in het geval van herbehandeling bevestigen. Micro-organismen zou kunnen dentine en dentinekanaaltjes onder wortelkanaalbehandeling vulmateriaal binnen te vallen en misschien niet toegankelijk zijn voor het desinfecteren van agenten of PDT componenten. Ook irrigularities in de vorm van wortelkanalen, vinnen en dentinetubuli kan diffusie van NaOCl of fotosensibilisator, zuurstof en licht beperken. De resterende wortelkanaalbehandeling vulmateriaal kan microorganismen haven waardoor het onmogelijk voor irrigatie oplossingen, de fotosensibilisator en het licht te dringen. Het uitgestraalde licht kan worden geabsorbeerd of gereflecteerd door residu wortelkanaalbehandeling vulmateriaal het beperken van het effect van PDT. In de onderhavige studie de geïsoleerde wortelkanaal vulmateriaal blijken lagere verontreiniging met E. faecalis
na behandeling met PDT en de combinatie van NaOCl irrigatie en PDT vergeleken met NaOCl irrigatie. De fotosensibilisator kunnen deze gebieden hechtende vulmateriaal zijn doorgedrongen tot het wortelkanaal wand beter dan NaOCl of NaOCl wordt geïnactiveerd wanneer het in contact komt met E.faecalis
of de biofilm structuur componenten [27]. Ondernemingen De resistentie van micro-organismen georganiseerd biofilms is eerder [28] beschreven. Bacteriën in diepe lagen van de biofilm zijn beter bestand door de beperking van de diffusie (fotosensibilisator zuurstof of licht of irrigatie agent) via de organische structuur [29]. Voorts organische verbindingen, zoals dode cellen of biofilm extracellulaire matrix, neutraliseren antimicrobiële middelen. Eerdere studies voorgesteld om PDT gebruiken als een adjuvante behandeling voor irrigatie in wortelkanaal desinfectie [21-23, 30]. De auteurs vonden irrigatie protocollen gebaseerd op NaOCl, waterstofperoxide en cheleermiddelen, zoals EDTA, superieur in endodontische antimicrobiële behandeling, vooral in termen van biofilm desintegratie. Echter, Garcez et al. [30] heeft een additioneel effect van PDT na de conventionele behandeling aangetoond en vond E. faecalis
om 100-1000 keer gevoeliger voor PDT-gemedieerde doden ten opzichte van Gram-negatieve soorten [31] zijn. De lagere antimicrobiële effect van PDT opzichte irrigatie kan worden verklaard door dode cellen en cellen resten die achterblijven in het wortelkanaal, op het wortelkanaal wand of kan nog worden geïntegreerd in de biofilm structuur neutraliseren de PDT gemedieerde doding, zodat de fotosensibilisator, zuurstof en het licht mogen geen bacteriën in diepe lagen te bereiken. Irrigatie verwijdert de dode cellen en de restanten.
In de huidige studie, een monospecies infectie model met een klinisch isolaat van E. faecalis
werd gebruikt. E. faecalis
is vaak gevonden in het primair en vooral secundaire infecties van wortelkanaal systemen [32, 33]. E. faecalis
Aangetoond is zeer goed bestand tegen ontsmettingsmiddelen en antibiotica [32] is. E. faecalis kan
effectief worden gekoloniseerd, vormt biofilm op wortelkanaalbehandeling muren en valt dentinekanaaltjes [34-36]. Dit monoinfection model werd gebruikt om dezelfde biofilm structuur in elk wortelkanaal van de monsters te reproduceren met een soort die bekend is moeilijk om te elimineren door chemo-mechanisch debridement [32]. Echter, wortelkanaalbehandeling infecties vaak geassocieerd met meerdere soorten [27, 37]. Een biofilm met meerdere soorten verschillen in de inhoud van de micro-organismen in elk specimen dat het effect van desinfectie [27] zouden kunnen aantasten.
Monsters van de wortelkanalen werden steriele ProTaper F2 papierpunten. Paper punten een deel van de bacteriën pas uit het wortelkanaal muur. Deze methode van de bemonstering zal de CFU niveaus in het wortelkanaal te onderschatten voor en na behandeling en geeft niet de totale E. faecalis
tellingen geven voor elk specimen. Een cultuur-negatieve monster betekent niet dat een steriele wortelkanaalbehandeling. Voor alle monsters werden ProTaper F2 papier punten gebruikt. Deze papierpunten hebben dezelfde grootte en oppervlak perfect passen in het bereide wortelkanaal te bemonsteren en deze methode is gebruikt in eerdere studies [24, 29, 32]. Moleculaire technieken, zoals PCR-technieken worden vaak gebruikt om micro-organismen in wortelkanalen [37, 38] te detecteren. Maar in de huidige studie, was het belangrijk om onderscheid te maken tussen leven (kweekbare) en dode (niet kweekbare) bacteriën. Moleculaire technieken zou tot vals positieve resultaten bij celrestanten en DNA worden achtergelaten in het wortelkanaal na antibioticabehandeling, overschatten de resterende contaminatie van het wortelkanaal. Deze overschatting zou hoger voor monsters behandeld met PDT vergeleken met irrigatie zijn geweest, omdat irrigatie veel dode cellen en cel restanten te verwijderen. Daarom werd een tweede monster dat na antimicrobiële behandeling met een steriel K-bestand dentine chips van het wortelkanaal wand te verwijderen. Zo resterende contaminatie van het wortelkanaal wand en dentinekanaaltjes onderzocht. Dit beperkt de onderschatting van de bacteriële besmetting door bemonstering van het gebruik van papieren punten.
Souza et al. [29] geïnfecteerde wortelkanalen voor het vormgeven. Instrumentatie en irrigatie procedures leiden tot extra stress op de micro-organismen en verstoren de biofilm. Aangetoond is dat instrumentatie wortelkanalen vermindert bacteriën in wortelkanalen [39, 40]. In de huidige studie is PDT getest in volledig gevormde wortelkanaalbehandelingen en in het geval van endodontische herbehandeling na wortelkanaalbehandeling vullen en het verwijderen van het wortelkanaal vulling. Dit betekent niet imiteren de klinische situatie. Deze monsters werden vervolgens geïnfecteerd met een klinisch isolaat van E. faecalis
. Binnen 72 uur van infectie, E. faecalis
kon een biofilm structuur en het effect van de verschillende antimicrobiële behandelingen E. faecalis
van wortelkanalen vormen kunnen worden onderzocht.
Conclusie
PDT reduceert E. faecalis
in geïnfecteerde primaire infecties en trokken zich terug wortelkanalen. Echter, irrigatie met 3% natriumhypochloriet is effectief in het elimineren E. faecalis
opzichte van PDT. PDT was in staat om E. faecalis
elimineren uit resterende wortelkanaalbehandeling vulmateriaal op het wortelkanaal wand effectiever in vergelijking met 3% NaOCl. PDT is geen alternatief, maar een effectieve aanvulling in wortelkanaal desinfectie, vooral in gevallen van herbehandeling. Verstoring van de biofilm voorafgaand aan PDT en de adjunct gebruik van een natriumhypochloriet gebaseerd conventionele benadering blijven verplicht.
Verklaringen
Erkenning Ondernemingen De auteurs danken dr Susanne Stampf en Kirstin Vach (Institute of Medical Biometrie en Medische Informatica Alle auteurs gelezen en goedgekeurd het definitieve manuscript.
