Abstracte achtergrond
De isolatie frequentie en gevoeligheid voor antischimmelmiddelen van orale Candida
isolaten van patiënten met orale candidiasis (OC) werden vergeleken tussen studies uitgevoerd in 2006-2007 en 2012-2013.
Methods
Een total158 stammen werd geïsoleerd van 112 patiënten die Kagoshima University Hospital bezocht om de behandeling van OC gedurende de 14 maanden vanaf februari 2012 en maart 2013, en beoordeeld op de isolatie frequentie van elke Candida
stam en de gevoeligheid voor antimycotica in vergelijking met die geëvalueerd 2006-2007.
Resultaten
Er werd een hogere frequentie van xerostomie als voornaamste klacht en auto-immuunziekten in de 2012-2013 studie dan in de 2006-2007 studie. Meer dan 95% van Candida
isolaten waren C. albicans Kopen en C. glabrata
. Bovendien is het aandeel van deze toegenomen van 12,3% in de 2006-2007 studie 23,4% in de 2012-2013 studie, terwijl het aandeel van de voormalige daalde van 86,2% tot 72,8%, respectievelijk. C. albicans
werd geïsoleerd in bijna alle patiënten, terwijl C. glabrata
werd pas gelijktijdig geïsoleerd met C. albicans
. Minimale remmende concentraties (MIC's) waren niet significant verschillend tussen de groepen met een paar uitzonderingen. Candida isolaten
, waarvan MIC overtroffen breekpunten, schijnbaar verhoogd miconazol en itraconazol tegen C. glabrata
in de 2012-2013 studie, maar dit was niet statistisch significant. Hierdoor meer gevallen van auto-immuunziekte, een groter aantal C. glabrata isolaten
en hogere weerstand tegen azolen werden waargenomen in de 2012-2013 studie dan in de 2006-2007 studie.
Conclusie
deze gegevens tonen aan dat met de recente toename van C. glabrata
infectie een oorzakelijke schimmel OC, en C. glabrata
resistentie tegen azolen is voorzichtigheid vereist bij de selectie van antifungale geneesmiddelen voor de behandeling van OC.
Trefwoorden
Candida glabrata
Candida albicans
klinisch geïsoleerde stammen Minimale remmende concentratie resistente stammen Yoshiaki Kamikawa, Youichirou Mori eveneens bijgedragen aan dit werk.
Electronic aanvullend materiaal
De online versie van dit artikel (doi:. 10 1186 /1472-6831-14-14). bevat aanvullend materiaal, dat beschikbaar is voor geautoriseerde gebruikers is achtergrond
In de vroege jaren 1990, Candida albicans
resistent tegen fluconazol werd gemeld vaak wordt geïsoleerd uit de mondholte van verworven immunodeficiëntiesyndroom patiënten. Een epidemiologische studie werd uitgevoerd op de gevoeligheid voor drugs van Candida
stammen geïsoleerd uit patiënten met invasieve candidiasis antifungale [1]. Global bewakingsprogramma's zijn uitgevoerd om met Candida resistentie tegen antimycotica, zoals SENTRY programma fungi resistent tegen amfotericine B in 2006-2007 [2] en rapporteert Candida gevoeligheid voor Candín type fungiciden [3-6]. Er zijn 2 verslagen over de binnenlandse surveillance in Japan: 99 Toezicht door de Japan Invasive Mycose Surveillance Study Group (JMS) [7] en Verslag van Japan Antifungale Surveillance Program (Jasp) [8-10]. Echter, deze surveillance programma's gericht op de stammen geïsoleerd uit klinische gevallen van diepgewortelde mycose, en slechts 1 verslag, onze vorige studie die werd uitgevoerd in 2006-2007, werd uitgevoerd op orale candidiasis [11]. Ondernemingen De isolatie frequentie van Candida
stammen waarschijnlijk de tijd veranderen, zoals blijkt uit de vergelijkingen van eerdere studies uitgevoerd in verschillende perioden. Bijvoorbeeld, C. glabrata
zelden werd geïsoleerd van AIDS-patiënten met orale candidiasis (OC) of oesofageale candidiasis in Sudo de studie gepubliceerd in 1997 [12]; daarentegen C. glabrata
werd gedetecteerd in 12,3% van de patiënten met OC in onze studie, waarbij itraconazol (ITCZ) effectief is ondanks de aanwezigheid van resistente C. glabrata
tegen ITCZ [11]. Bovendien, terwijl resistente C. glabrata
tegen ITCZ opgetreden bij hoge frequenties van 50% en 72,7% in OC en non-OC patiënten van deze studie, respectievelijk, [11], een eerdere Japanse surveillance studie toonde resistente C. glabrata
in slechts 1,0-9,3% van de patiënten met een schimmelinfectie, vooral diepgewortelde mycose [7-10]. Zo is de isolatie frequentie van Candida
soorten en hun resistente stammen varieert in de tijd, maar geen enkele studie heeft variaties in de frequentie van OC loop van de tijd in dezelfde zorginstelling gemeld. Ondernemingen De huidige studie werd uitgevoerd om te onderzoeken tegen antimycotica Candida
stammen geïsoleerde vorm van de mondholte van OC patiënten die Kagoshima University Hospital in 2012-2013 (14 maanden) bezocht en het isolement frequentie van Candida
soorten en hun resistente stammen te beoordelen in vergelijking met onze eerdere studie, uitgevoerd in 2006-2007 (24 maanden) om te onderzoeken het gebruik antifungale drugs in de behandeling van OC.
Methods
onderwerpen Inloggen Deze studie analyseerde 158 stammen geïsoleerd van 112 patiënten die de afdeling Kaakchirurgie, Kagoshima University bezocht ziekenhuis, voor de behandeling van OC gedurende de 14 maanden vanaf februari 2012 en maart 2013. Stammen verzameld van patiënten die antimycoticum therapie ontvangen binnen 3 maanden na collectie werden van deze studie uitgesloten.
Analyse achtergrondvariabelen van Candida
-geïsoleerde patiënten
Een analyse werd uitgevoerd voor leeftijd, geslacht, onderliggende systemische ziekte, steroïde hormoon gebruik, kunstgebit gebruik, chief klachten, en mondelinge ziekte in de 112 patiënten bij wie Candida
werd geïsoleerd.
verzameling van Candida
van de mondholte en bacteriekweek
voor de diagnose van OC, het getroffen gebied van de mondholte werd afgeveegd met een steriel wattenstaafje vooraf ondergedompeld in steriele fysiologische zoutoplossing. Vloeistofmonster verzameld op het wattenstaafje werd uitgesmeerd op een CHROMagar Candida
kweekmedium (Nippon Becton Dickinson en Company, Ltd.) en gedurende 48 uur bij 36 ° C.
Identificatie van Candida species
positieve cultuur van Candida
species werd bepaald door colorimetrische observatie van kolonies in de CHROMagar Candida
kweekmedium dat synthetische colorimetrische substraten die worden gewijzigd chromogene door enzymen die in Candida
soorten te zijn. Bevestiging van de bepaling van Candida soorten werd vervolgens uitgevoerd door PCR gebaseerd op de gerapporteerde van Kanbe e.a. methode. Kort schimmelcellen gekweekt in CHROMagar Candida kweekmedium door centrifugatie geoogst, drie keer gewassen met gedestilleerd water, en de DNA's werden geëxtraheerd en gezuiverd volgens het protocol van een DNA-zuivering kit, Fast DNA kit (BP Biomedical, VS). Vervolgens werden de DNA monsters geamplificeerd door PCR en PCR producten werden geanalyseerd door agarose gelelektroforese om de soort Candida species [13] bepalen.
Diagnose van OC
vloeistof verzameld op het staafje van het getroffen gebied werd overgebracht op een glasplaatje voor Gram kleuring door een routine werkwijze. Een diagnose van OC werd toen kolonievorming tijdens incubatie werd genoteerd en de aanwezigheid van pseudo mycelium werd aangetoond door Gram kleuring [14].
Evaluatie van gevoeligheid voor antimycotica
Candida stammen gedetecteerd door de hierboven genoemde werkwijzen werden opnieuw geënt op Sabouraud agarmedium (Nippon Becton Dickinson en Company, Ltd.), gevolgd door 48 uur incubatie bij 36 ° C. Vervolgens werd de kweek verdund en ingesteld op een McFarland van 0,5 door de optische dichtheid bij 530 nm met een spectrofotometer ViSpec II (Kyokuto, Japan), en toegepast voor de test om de gevoeligheid te bepalen. Een minimale remmende concentratie (MIC) van elk van AMPH-B, 5-FC, FLCZ, MCZ, ITCZ en MCFG tegen deze
Candida stammen werden bepaald met een gistachtige Fungal gevoeligheid Kit ASTY (Kyokuto Pharmaceutical) geschikt de Nationale Commissie voor Clinical Laboratory Standards (NCCLS) M-27A methode [15]. De kit bevat 11 concentraties van elk antimycoticum in een 96-well microplaat, dwz eindconcentraties 0, 0,03, 0,06, 0,125, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8 en 16 ug /ml voor amfotericine B, miconazol, en micafungine, 0, 0,125, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 16, 32, 64 ug /ml fluconazol en 5-FC, en 0, 0,015, 0,03, 0,06, 0,125, 0,25, 0,5, 1 , 2, 4 en 8 ug /ml voor itraconazol en micafungine. De concentratie "0 ug /ml" wordt beschouwd als een controle. Stammen met hoge MIC werden onderworpen aan re-meting van MIC met een gist-achtige Schimmel DP Eiken (Eiken Chemical) verenigbaar zijn met de Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) M27-A3-methode [10, 16]. MIC50 en MIC90, MIC vereist om de groei van respectievelijk 50% en 90% van Candida species
remmen, werden berekend. Resistente stammen werden bepaald door MIC criteria: AMPH-B, FLCZ, ≥64 ug /ml; 5-FC, ≥32 ug /ml; MCZ, ≥4 ug /ml; MCFG, & gt; 2 ug /ml; en ITCZ, ≥1 ug /ml.
Informed consent en ethische richtlijnen
Alle ingeschreven patiënten ontvangen schriftelijke toestemming van direct geven van mondelinge en schriftelijke gedetailleerde uitleg van dit onderzoek. Deze studie werd goedgekeurd door de Human ethische commissie van de Kagoshima University Medical and Dental Hospital (No.23-18 en 23-27).
Statistische analyse
Fisher's exacte waarschijnlijkheid test werd gebruikt om de verschillen in geslacht te bepalen (2 × 2), chief klachten (2 × 8), systemische ziekte (ja of nee; 2 × 2), het gebruik van steroïden (2 x 2), de aanwezigheid van kunstgebitten (2 x 2), orale candidiasis (2 × 4), de samenstelling van geïsoleerde Candida
soorten (2 × 7), en de incidentie van resistente stammen tussen de 2006-2007 studie en de 2012-2013 studie. Het verschil in leeftijd tussen de 2 studies werd onderzocht door Student's t-test
. P-waarde minder dan 0,05 werd beschouwd als statistisch significant.
Resultaten
Achtergrondvariabelen
Zoals getoond in Tabel 1, waren er geen statistische verschillen in achtergrondvariabelen met betrekking tot geslacht, leeftijd, gebruik van steroïde hormoonbehandeling, aanwezigheid en de aard van systemische ziekten en de aanwezigheid van kunstgebitten tussen patiënten in de studie 2006-2007 en van de 2012-2013 studie. Bij de patiënten met 1 voornaamste klacht, xerostomia was hoger in de 2012-2013 studie (23,2%) dan in de 2006-2007 studie (8,8%), terwijl tylosis linguae lager op 7,0% en 0% was, respectievelijk. Gezamenlijk de samenstelling van belangrijkste klachten was significant verschillend tussen de patiënten 2006-2007 en 2012-2013 patiënten geanalyseerd met Fisher's exacte waarschijnlijkheidstest (p & lt; 0,05). Ondanks geen significant verschil in het optreden van systemische ziekten tussen de 2 studies (77,2% vs. 86,6%), de aanwezigheid van auto-immuunziekten was hoger in de 2012-2013 studie dan in de studie 2006-2007 (27,6% versus 6,7% , respectievelijk) .table 1 Achtergrond variabelen van de patiënten met orale candidiasis ingeschreven in 2006-2007 en 2012-2013 studies
2006-2007
2012-2013
Test
onderwerpen number
Total
57
112
Gender
Male
19
(33.3)
30
(26.8)
Fisher’s exacte waarschijnlijkheid testen
Female
38
(66,7)
82
(73,2)
[2 × 2]
NS
Age
Gemiddeld [max-min]
67,9
[26 -90]
69,6
[21-97]
t-toets
NS
Chief Klachten
Warmte gevoel (HS)
23
(40,4)
46
(41,1)
Taste abnormaliteit (TA) kopen van 2
(3.5)
0
(0)
xerostomia (X)
5
(8,8)
26
(23,2)
Tylosis linguae (TL)
4
(7,0)
0
(0)
Fisher's exacte waarschijnlijkheid proef
Rubor /Erosie (R /E)
4
(7,0)
8
(7.1)
[2 × 8]
HS + TA + X
9
(15,8)
16
(14.3)
p & lt; 0.05
HS + TA + R /E
5
(8.8)
8
(7.1)
HS + TL
5
(8.8)
8
(7.1)
Total
57
(100)
112
(100)
Systemic ziekte
Ja
44
(77,2)
97
(86,6)
Fisher's exacte waarschijnlijkheid-test
Geen
13
(28,8)
15
(13,4)
[2 × 2]
Total
57
(100)
112
(100)
N.S.
Endocrine
22
(29.3)
22
(17.3)
Cardiovascular
18
(24.0)
28
(22.0)
Gastrointestinal
123
(16.0)
12
(9.4)
Fisher’s exacte waarschijnlijkheid testen
kwaadaardige tumor
8
(10,7)
12
(9.4)
[2 × 7]
CNS
4
(5.3)
10
(7.9)
N.S.
Viral
6
(8.0)
8
(6.3)
Autoimmune
5
(6.7)
35
(27.6)
Total
75
(100)
127
(100)
Steroid
Dose
12
(21.1)
28
(25.0)
Fisher’s exacte waarschijnlijkheid testen
Non-gedoseerd
45
(78,9)
84
(75,0)
[2 × 2]
Total
57
(100)
112
(100)
N.S.
Denture
Wearer
37
(64.9)
57
(50.9)
Fisher’s exacte waarschijnlijkheid testen
Non-drager
20
(35.1)
55
(49,1)
[2 × 2]
Total
75
(100)
112
(100)
NS
Orale candidiasis
Pseudomembraneuze
42
(73,7)
42
(37,5)
Erythemateuze
11
(19,3)
52
( 46.4)
Fisher's exacte waarschijnlijkheid proef
hypertrofische kopen van 2
(3.5)
4
(3.6)
[2 × 2]
Mixed
2
(3.5)
14
(12.5)
N.S.
Total
55
(100)
112
(100)
Cijfer tussen haakjes geeft het percentage behalve leeftijd.
Classificatie van orale candidiasis (OC)
classificatie van OC gediagnosticeerde gevallen wordt ook getoond in tabel 1. Van de 57 patiënten in de studie 2006-2007, OC vaakst geclassificeerd als pseudomembraneuze OC (73,7%), gevolgd door erythemateuze OC (19,3%). In de studie 2012-2013 echter erythemateuze OC voor de helft (46,4%) OC gevallen gevolgd door pseudomembraneuze OC (37,5%) en gemengde OC (erythemateuze en pseudomembraneuze, 12,5%), maar geen statistisch verschil werd opgemerkt.
geïsoleerde Candida
species
in totaal zijn 158 stammen van Candida
werden bij patiënten geïsoleerd in de 2012-2013 studie. De meest frequent geïsoleerde
Candida species waren Candida albicans
(C. albicans
, 116 stammen, 73,4%), gevolgd door C. glabrata
(36 stammen, 22,8%), C. tropicalis
(3 stammen, 1,9%), C. parapsilosis
(2 stammen, 1,3%) en C. krusei
(1-stam, 0,6%) (Tabel 2). Wanneer geanalyseerd op een patiënt basis, C. albicans
werd geïsoleerd bij alle patiënten (n = 112), terwijl C. glabrata
werd nooit gevonden op zijn eigen, alleen gelijktijdig met C. albicans
bij 36 patiënten . Meer dan één soort Candida
species werd geïsoleerd in 41 patiënten, met bijkomende C. albicans
en C. glabrata
de meest voorkomende combinatie in ongeveer 90% van deze patiënten. In tegenstelling tot 65 stammen van Candida
geïsoleerd bij patiënten in de studie 2006-2007, 56 stammen van C. albicans
(86,2%), 8 stammen van C. glabrata
(12,3%) en 1 stam van C. tropicalis
(1,5%) werden geïdentificeerd, en er geen stammen van C. parapsilosis Kopen en C. krusei
werden gedetecteerd. Zo is in de 2012-2013 studie, het aantal geïsoleerde stammen van C. glabrata
was bijna het dubbele van dat van de 2006-2007 studie, en de verhouding van C. albicans
alle Candida
stammen werd dus significant lager in de 2012-2013 studie wanneer geanalyseerd op een stam-basis of op een patiënt-basis. Dus in zowel de patiënt-basis en de stam-basis analyses, een statistisch verschil werd waargenomen tussen de 2006-2007 studie en de 2012-2013 studie (p & lt; 0,01) .table 2 Verdeling van Candida species geïsoleerd uit patiënten met orale candidiasis in de 2006-2007 en 2012-2013 studies
Candida species
Aantal patiënten (%)
Test
2006-2007
2012-2013
Single soorten geïsoleerd
Candida albicans
(CA )
49
(86,0)
71
(63,4)
Candida glabrata
(CG)
1
(1.8)
0
(0)
Candida tropicalis
( CT)
0
(0)
0
(0)
Candida parapsilosis
(CP )
0
(0)
0
(0)
Candida krusei
(CK)
0
(0)
0
(0)
Fisher's exacte waarschijnlijkheid proef
Meervoud species geïsoleerd
[2 × 10]
CA + CG
6
(10.5)
36
(32.1)
p & lt; 0.01
CA + CT
0
(0)
3
(2.7)
CA + CP
0
(0)
1
(0,9)
CA + CG + CT
1
(1.8)
0
(0)
CA + CP + CK
0
(0)
1
(0.9)
Total
57
(100)
112
(100)
Candida species
Totaal aantal Candida stammen geïsoleerd (%)
Test
2006-2007
2012-2013
Candida albicans
56
(86,2)
112
(72,8)
Candida glabrata
8
(12,3)
36
(23,4)
Candida tropicalis
1
(1.5)
3
(1.9)
Fisher's exacte waarschijnlijkheidstoets
Candida parapsilosis
0
(0) kopen van 2
(1,3)
[2 × 5]
Candida krusei
0
(0)
1
(0,6)
p & lt; 0.01
Total
65
(100)
154
(100
Gevoeligheid voor antimycotica
Sinds enkele (1-3 stammen) van de Candida
andere soorten dan C. albicans Kopen en C. glabrata
werden geïsoleerd in beide studie, MIC-waarden van antifungale geneesmiddelen tegen C. tropicalis
, C. parapsilosis, Kopen en C. krusei
, die nooit alleen werden geïsoleerd, maar alleen in combinatie met C. albicans Kopen en C. glabrata
, niet betrouwbaar waren. daarom zijn de resultaten van de testen van de gevoeligheid hebben voornamelijk betrekking op de MIC's van C. albicans Kopen en C. glabrata
(tabel 3) .table 3 schimmelwerende gevoeligheid profiel, tegen amfotericine B, flucytosine, fluconazol, miconazol, itraconazol en micafungine, van Candida species geïsoleerd van patiënten met orale candidiasis in de 2006-2007 en 2012-2013 studies
. amfotericine B (AMPH-B)
Jaar
Zeef
No. stammen
MIC (μg/mL)
MIC50
MIC90
<0.03
0.03
0.06
0.125
0.25
0.5
1
2
4
8
16
>16
2006-2007
C. albicans
56
8
43
3
2
0.5
0.5
C. glabrata
8
1 kopen van 2 kopen van 2 kopen van 2
1
0,5 kopen van 2
C. tropicalis
1
1
0.25
0.25
2012-2013
C. albicans
112
verhuur 4
12
86
9
1
0,5
1
C. glabrata
36
1 kopen van 2
16
14
2
1
0,5
1
C. tropicalis
3
1 kopen van 2
1
1
C. parapsilosis
2
2
Restaurant & lt; 0,03
& lt; 0,03
C. krusei
1
1
0.5
0.5
b. flucytosine (5-FC)
Jaar
Strain
Aantal stammen
MIC (ug /ml)
MIC 50
MIC 90
& lt; 0,125
0.125
0.25
0,5
1 kopen van 2
4
8
16
32
64
& gt ; 64
2006-2007
C. albicans
56
18
8
24
3
1
2
0,25
0,5
C. glabrata
8
4
1
1
kopen van 2
Restaurant & lt; 0,125
16
C. tropicalis
1
1
0,125
0,125
2012-2013
C. albicans
112
56
1
43
3
3
4
1
1
0.25
1
C. glabrata
36
20
6
6
2
1
1
& lt; 0,125
8
C. tropicalis
3
3
& lt; 0,125
& lt; 0,125
C. parapsilosis
2
verhuur 2 kopen van 2
C. krusei
1
1
1
0.25
0.25
c. fluconazol (FLCZ)
Jaar
Strain
Aantal stammen
MIC (ug /ml)
MIC 50
MIC 90
& lt; 0,125
0.125
0.25
0,5
1
Pagina 2
4
8
16
32
64
& gt; 64
2006-2007
C. albicans
56
22
22
5
1
1
1
1
3
0,5
4
C. glabrata
8
1
Pagina 2
2
1
1
1
2
& gt; 64
C. tropicalis
1
1
& gt; 64
& gt; 64
2012-2013
C. albicans
112
4
33
51
Pagina 2
1
3
3
3
0.5
Pagina 2
C. glabrata
36
4
1
5
6
7
7 kopen van 2
16
64
C. tropicalis
3
1
2
32
32
C. parapsilosis
Pagina 2
2
2 kopen van 2
C. krusei
1
1
2 kopen van 2
d. miconazol (MCZ)
Jaar
Strain
Aantal stammen
MIC (ug /ml)
MIC 50
MIC 90
& lt; 0,03
0.03
0.06
0.125
0,25
0,5
1 kopen van 2
4
8
16
& gt; 16
2006-2007
C. albicans
56
2
22
20
8
1
3
0,125
0.25
C. glabrata
8
1
2
2
1 kopen van 2
1
4
C. tropicalis
1
0,125
0,125
2012-2013
C. albicans
112
2
20
64
18
1
1
1 kopen van 2
3
0.25
0,5
C. glabrata
36
1
5
12
7
3
3 kopen van 2
3 kopen van 2
16
C . tropicalis
3
1
1
1
1
4
C. parapsilosis
2
1
1
1-2
Pagina 2
C. kurusei
1
1
verhuur 4
4
e. itraconazol (ITCZ)
Jaar
Strain
Aantal stammen
MIC (ug /ml)
MIC
