Abstracte achtergrond
De humane papillomavirussen (HPV) zijn een grote familie van niet-omhulde DNA-virussen, hoofdzakelijk geassocieerd met baarmoederhalskanker. Recente epidemiologische studies tonen aan dat HPV een onafhankelijke risicofactor voor orofaryngeale kanker kan zijn. Bewijs suggereert nu HPV kan de maligniteit proces te moduleren in sommige tabaks- en alcohol-geïnduceerde oropharynx tumoren, maar kan ook de belangrijkste oncogene factor voor het induceren van carcinogenese bij sommige niet-rokers zijn. Meer bewijs is echter nodig ten aanzien van mondelinge HPV prevalentie onder gezonde volwassenen om risico's in te schatten. Het doel van dit onderzoek was om een HPV-screening van de normale gezonde volwassenen uit te voeren om mondelinge HPV prevalentie beoordelen.
Methods
gezonde volwassen patiënten met een Amerikaanse tandschool werden geselecteerd om deel te nemen aan deze pilot studie. DNA werd geïsoleerd uit speeksel monsters en gescreend voor hoog-risico HPV stammen HPV16 en HPV18 en verder verwerkt met behulp van qPCR voor kwantificering en de analytische sensitiviteit en specificiteit te bevestigen.
Resultaten
Chi-kwadraat analyse bleek de patiënt steekproef representatief was voor de algemene kliniek bevolking ten aanzien van geslacht, ras en leeftijd (p Restaurant & lt; 0,05). Vier monsters van patiënten bleken HPV16 DNA haven, ofwel 2,6% van de totale (n = 151). Drie van de vier HPV16-positieve monsters waren van patiënten onder 65 jaar en alle vier waren vrouwen en Spaanse (niet-wit). Geen monsters testte positief voor HPV18.
Conclusies
De succesvolle werving en screening van gezonde volwassen patiënten bleek HPV16, maar niet HPV18, aanwezig in een klein deel was. Deze resultaten geven nieuwe informatie over orale HPV-status, die kunnen bijdragen tot de resultaten van andere studies die mondkanker tarieven aan te tonen zijn gestegen in de VS onder zowel vrouwen en minderheden en in sommige geografische gebieden die niet alleen worden verklaard door de prijzen van tabak en alcohol contextualiseren gebruiken. De resultaten van dit onderzoek kunnen van grote waarde zijn voor ons begrip van orale gezondheid en ziekte risico verder, alsook om ontwerpen toekomstige studies waarin de rol van andere factoren die orale blootstelling HPV beïnvloeden, alsmede de korte en lange . termijn gevolgen van mondelinge HPV-infectie
Electronic aanvullend materiaal
De online versie van dit artikel (doi:. 10 1186 /1472-6831-11-28) bevat aanvullend materiaal, dat beschikbaar is voor geautoriseerde gebruikers is. de achtergrond
humaan papillomavirus (HPV) is geïmpliceerd als de oorzaak van bijna alle cervicale kanker wereldwijd [1-3]. Deze vertegenwoordigen een grote familie van niet-omhulde DNA virussen die gevonden kunnen integreren in het gastheergenoom, niet-geïntegreerde of episomaal, of een combinatie of mengsel van deze in geïnfecteerde weefsels [4-9]. HPV infecteren vele soorten epitheliale cellen met intra-epitheliale neoplasie goed voor de overgrote meerderheid van HPV-gerelateerde kanker [5, 10, 11].
Recente epidemiologische studies tonen aan dat HPV ook een onafhankelijke risicofactor voor orofaryngeale kanker kan , openbaren HPV drie keer zoveel precancereuze orale laesies, en bijna vijf keer zoveel orofaryngeale kankers in vergelijking met normale orale mucosa [12-14]. Van alle types HPV, de risicogroep stammen HPV16, en in mindere mate HPV18, worden meestal geïdentificeerd orale biopsieën [15-21]. Hoewel de traditionele risicofactoren voor het ontwikkelen van kanker oropharyngeal het gebruik van tabak en overmatig alcoholgebruik en andere risicofactoren, zoals HPV blijven, kan een belangrijke rol spelen bij het bepalen of zij zich ontwikkelt en hoe snel het kan ontwikkelen [14, 19, 22-28]. Ondernemingen De relatief lage aanwezigheid van hoog-risico HPV in normale weefsels en nog veel hogere prevalentie in de pre-kanker en kankercellen oropharyngeal letsels kan erop wijzen dat HPV infecteert bij voorkeur al de ontwikkeling van orofaryngeale kankers [12-14]. Hoewel het mogelijk is dat de lage prevalentie in gezonde individuen wijten aan andere factoren, zoals illegale monsterverzameling of testgevoeligheid te passen, maar is ook mogelijk dat HPV kan functioneren om de maligniteit bij het vastleggen van of gevestigde orofaryngeale tumoren moduleren, zoals is waargenomen in studies van HPV-infectie in andere ontwikkelingslanden vormen van kanker [29-39]. Zo hebben recente epidemiologische en case-control studies aangetoond dat patiënten met HPV-positieve orofaryngeale tumoren significant verbeterd overlevingskansen [12, 40, 41] en therapeutische respons in vergelijking met HPV-negatieve controles [42]. Verscheidene in vitro
studies hebben onlangs onderzocht mogelijke mechanismen die mogelijk verantwoordelijk zijn voor deze fenotypische veranderingen in het orofaryngeale kankers [25-27]. Het bewijs is nu accumuleren dat HPV-infectie van een aantal orofaryngeale kankers correleert met een verhoogde tarieven overleving en betere prognose bij sommige patiënten als gevolg van deze veranderingen in de cellulaire responsiviteit [40-45]. Deze studies wijzen op de noodzaak om niet alleen de prevalentie van orale HPV-infectie, maar ook de duur en persistentie van dergelijke ziekten, vanwege hun vermogen om orofaryngeale tumorprogressie invloed begrijpen.
Waarschijnlijk HPV maligniteit werkwijze kan moduleren sommige tabaks- en alcohol geïnduceerde orofaryngeale kankers, maar kan ook de primaire oncogene factor voor het induceren van kanker in een subset van patiënten zonder deze traditionele risicofactoren. Enig bewijs heeft aangetoond dat niet-tabak en non-alcohol gerelateerde orofaryngeale kankers waren zes keer meer kans op HPV-infecties dan bij gematchte controles [46] haven. Om het risico nauwkeurig te evalueren, zijn meer schattingen van de orale HPV prevalentie onder gezonde volwassenen nodig. Internationale studies HPV prevalentie bij gezonde volwassenen via biopsie monsters onthullen prevalentie die varieerden van 0 tot 15% [20, 47-51]. Bovendien hebben andere studies begonnen minder invasieve speeksel en orale lavage gebaseerde testmethoden rapporteren aan HPV identificeren bij gezonde volwassen speekselmonsters, waaruit prevalentie tussen 2,8-25% [15, 52-60].
Sommige orale HPV screening werden uitgevoerd in de VS op normale, gezonde volwassenen, behalve orofaryngeale kankerpatiënten [57, 58, 61]. Deze studies hebben veel lagere gemeld, tussen 1,3 en 7%, dan in eerdere internationale studies [47, 50, 53]. Op basis van deze gegevens, het doel van dit project was om een screening uit te voeren voor de meest voorkomende hoog-risico HPV-stammen, HPV16 en HPV18, in normale gezonde volwassenen. Deze pilot studie werd uitgevoerd in Nevada, een staat onlangs gedocumenteerd aan het vergroten van de tarieven van de orofaryngeale kanker tussen 1997 en 2005 hebben - ondanks de dalende prijzen van tabak en alcohol gebruik in de staat, evenals de dalende prijzen van orofaryngeale kanker nationaal [23, 24] . Het lange-termijn doel is om meer gedetailleerde informatie over een hoog risico mondelinge HPV prevalentie te zorgen voor meer robuuste schattingen van oropharyngeal risico op kanker te bieden.
Methods
Mensgebonden
Het protocol voor dit onderzoek met de titel "De prevalentie van Oral Human Papilloma Virus (HPV) aan de Universiteit van Nevada, Las Vegas - School of Dental Medicine (UNLV-SDM) Clinic Bevolking "werd ingediend, gewijzigd en goedgekeurd door de UNLV Office of Research Integrity - Mensgebonden (OPRS # 1002 -3361) op 9 april 2010. in het kort, onderwerpen in dit gemak steekproef werden gerekruteerd door leden van de UNLV-SDM Clinic tijdens hun tandheelkundige bezoek aan één van de 15 kliniek data. Informed Consent nodig was en werd ter plaatse uitgevoerd. Inclusie criteria: proefpersonen moesten 18 jaar of ouder te zijn en moet instemmen om deel te nemen. Uitsluitingscriteria: patiënten jonger dan 18 jaar, onderwerpen die weigerde om deel te nemen, en patiënten met voorafgaande diagnose van orofaryngeale kanker waren uitgesloten
steekproefomvang Belgique Om een passende omvang monster te bepalen, eerdere studies die gescreend op hoge. risico mondelinge HPV bij gezonde volwassenen werden geëvalueerd om het bereik van de steekproefomvang, die sterk varieerden van 12 te bepalen - 1680 [47-62]. Eerder onderzoek bij UNLV en de UNLV-SDM kliniek aangetoond lage participatiegraad voor invasieve, op basis van bloed screenings [63], maar hogere tarieven van de participatie met behulp van niet-invasieve biomonitoring en screening methoden, waaronder speeksel verzamelen (ongepubliceerde gegevens). Deze studies hadden sample maten variërend van 16 - 200. Op basis van deze gecombineerde informatie de maximale steekproefgrootte werd geschat op 200.
Speeksel Collection Protocol
Kortom, gezonde volwassenen die ingestemd met deelname waren een kleine, steriele gegeven speeksel collectie container, een 50 ml steriele polypropyleen buis van Fisher Scientific (Fair Lawn, NJ). De deelnemers werd vervolgens gevraagd om op te kauwen op een klein stukje van de paraffine voor een minuut en vervolgens te spuwen. De monsters werden opgeslagen op ijs tot transport naar een biomedisch laboratorium voor analyse. Elk speeksel monster werd een unieke, willekeurig gegenereerde nummer onderzoek vooringenomenheid te voorkomen toegewezen. Demografische informatie over het monster werd gelijktijdig verzameld, die bestond uit leeftijd, geslacht en etniciteit alleen.
Celtelling en DNA isolatie Leer Alle monsters werden gedurende 10 minuten bij 2100 g
(RCF) en de pellet 1X gewassen met fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS) (HyClone: Logan, UT) en geresuspendeerd in 5 ml 1X PBS. Het aantal cellen werd bepaald met Trypan Blue (Fisher Scientific: Fair Lawn, NJ) gebruikmakend van een Zeiss Axiovert 40 omgekeerde microscoop (Göttingen, Duitsland) en een hemacytometer (Fisher Scientific: Fair Lawn, NJ). Te bepalen of er monsters geherbergd het HPV-virus, werd DNA geïsoleerd uit het speeksel monster met minimaal 3,5 × 10
5 cellen en de GenomicPrep DNA isolatie kit (Amersham Biosciences: Buckinghamshire, UK), volgens de procedure aanbevolen door de fabrikant, zoals eerder is beschreven [26, 27, 32]. DNA zuiverheid werd berekend op basis van metingen verhouding van de absorptie bij 260 en 280 nm (A260 /A280-verhouding tussen 1,7 en 2,0).
Polymerase kettingreactie (PCR)
DNA van elk monster werd daarna gebruikt om PCR uit te voeren met de Fisher exACTGene volledige PCR kit (Fisher Scientific: Fair Lawn, NJ) en een Mastercycler gradiënt thermocycler (Eppendorf: Hamburg, Duitsland) met de volgende primers voor HPV16 [26, 27], HPV18 [27, 32] en glyceraldehyde- 3-fosfaat dehydrogenase (GAPDH) [64], gesynthetiseerd door SeqWright (Houston, TX):
HPV16 forward primer, ATGTTTCAGGACCCACAGGA;
HPV16 omgekeerde primer, CCTCACGTCGCAGTAACTGT;
HPV18 forward primer, ATGGCGCGCTTTGAGGATCC;
HPV18 omgekeerde primer , GCATGCGGTATACTGTCTCT;
GAPDH voorwaartse primer, ATCTTCCAGGAGCGAGATCC;
GAPDH achterwaartse primer, ACCACTGACACGTTGGCAGT;
Eén ug matrijs-DNA werd gebruikt voor elke reactie. De initiële denaturatiestap liep gedurende drie minuten bij 94 ° C. Een totaal van 30 amplificatiecycli werden uitgevoerd, bestaande uit 30 seconden denaturatie bij 94 ° C, 60 seconden annealen bij 58 ° C en 30 seconden verlenging bij 72 ° C. Laatste verlenging werd gedurende vijf minuten bij 72 ° C. De PCR-reactieproducten werden gescheiden door gelelektroforese behulp Reliant 4% NuSieve ® 3: 1 Plus Agarose gels (Lonza: Rockland, ME). Banden werden zichtbaar gemaakt door UV-belichting van ethidium-bromide-gekleurde gels en opgenomen met een Kodak Gel Logic 100 Imaging System en 1D Image Analysis Software (Eastman Kodak: Rochester, NY)
kwantitatieve PCR (qPCR)
DNA-monsters. werden vervolgens verwerkt met behulp van qPCR meer specifieke en gevoelige kwantificatie leveren. Primers en probes werden ontworpen met behulp van Roche Universal Probe bibliotheek (UPL) test design software naar de regio overlappende E6 en E7-gen sequentie van HPV16 versterken [GenBank: K02718] en het menselijke β-actine housekeeping gen [GenBank: M10277]. Alle primers werden gekocht bij Sigma-Aldrich (St. Louis, MO.) En probes gekocht bij Roche Applied Science (Indianapolis, IN.)
HPV16 E6 /E7 forward primer 5'-CAACTGATCTCTACTGTTATGAGCAA-3 ', HPV16 E6 /E7 reverse primer 5'-CCAGCTGGACCATCTATTTCA-3 ', HPV16 E6 /E7 hydrolyse "Taqman" probe 5' - (fam) -AGGAGGAG- (donker quencher kleurstof) -3 '(UPL probe # 63) werd gebruikt om de 73 basenparen amplificeren (bp) gebied tussen de positie 535 nucelotide (nt) en 607 nt positie. Humane β-actine forward primer 5'-GTGGGGTCCTGTGGTGTG-3 ', humaan β-actine 5'-GAAGGGGACAGGCAGTGA-3', humaan β-actine hydrolyse "Taqman" probe 5 '- (fam) -GGGAGCTG- (donker quencher kleurstof) - 3 '(UPL probe # 24) versterkt de 61 bp tussen 2642 en 2702 nt positie nt positie. Ondernemingen de real-time reactiemengsel werd op een LightCycler ® 480 multiwell plaat 96 met 1 x LightCycler ® 480 Probes Master (Roche Applied Sciences), 1 uM van elke respectievelijke primer set (vooruit en achteruit), 0,2 uM van de respectieve sonde, en 2 pl DNA-template; in een 20 pl uiteindelijk reactievolume. De sondes master mix bevatte reactie buffer, dNTP mix (met inbegrip van dUTP in plaats van dTTP), 3,2 mm MgCl 2, en Taq
DNA polymerase. De real-time PCR werd uitgevoerd op een LightCycler 480 systeem (Roche Applied Science) met de volgende cyclusparameters: pre-incubatie gedurende initiële enzymactivering op 95 ° C gedurende 10 minuten, gevolgd door 45 cycli van 95 ° C gedurende 10 seconden (ramp rate 4,4 ° C /seconde), 60 ° C gedurende 30 seconden (ramp rate 2,2 ° C /seconde) en 72 ° C gedurende 1 seconde (helling snelheid 4,4 ° C /seconde). Na amplificatie fase wordt een koelstap uitgevoerd bij 40 ° C gedurende 30 seconden (helling van 2,2 ° C /seconde). Overname van het fluorescentiesignaal werd uitgevoerd middels Mono hydrolyseprobe instelling (465-510 nm) na de 72 ° C verlenging van elke cyclus. Alle monsters werden in drievoud uitgevoerd
analytische gevoeligheid
CaSki (American Type Culture Collection, Manassas, VA). Cervicaal adenocarcinoom cellijn werd gebruikt om standaardcurves voor zowel het HPV16 (600 exemplaren /genoom) ontwikkelen en β actine (2 kopieën /genoom) genen. DNA geëxtraheerd uit CaSki-cellen werd serieel verdund tienvoudig vanaf 50 ng tot 0,0005 ng [65]. Deze stap toegestaan relatieve kwantificatie van de inbreng DNA niveau en laatste deel als het aantal virale kopieën /genoom /cel. Kwantificering werd bereikt met behulp van Cycle Drempel (C T) gemeten met de tweede afgeleide maximum methode (LightCycler 480 Software versie 1.5.0.39; Roche Applied Science). Speekselmonsters & gt; 0.001 copy /genoom werden beschouwd HPV-positief. Specificiteit werd uitgevoerd op qPCR assay tegen HPV18 en bleek 100% specifiek (gegevens niet getoond)
Statistische evaluatie
Sensitiviteit en specificiteit werden berekend als de verhouding van ware positieven en ware negatieven (afkapwaarde & GT;. 0,001 kopieën /genoom), respectievelijk. Na de overname van speekselmonsters en HPV screeningresultaten, demografische informatie van elk monster werd vergeleken met de algemene demografisch profiel van de UNLV-SDM aantal patiënten (N = 71, 051) met een chi-kwadraat (χ2) test om te bepalen of alle kenmerken (geslacht, ras, leeftijd) was dan verwacht bij de patiënten die in dit onderzoek (n = 151). Een kans niveau van alfa (α) = 0,05 werd gebruikt om statistische significantie te bepalen.
Resultaten
Monsters van speeksel werden verzameld van 151 UNLV-SDM patiënten tussen 2 juni en 1 oktober 2010 van wie de patiënten monsters werden verzameld en gescreend waren niet statistisch verschillend van de totale UNLV-SDM clinic bevolking ten aanzien van geslacht, ras of leeftijd (tabel 1). Meer specifiek, het totale aantal vrouwen en mannen in het monster was ongeveer gelijk (52,3% en 47,7%, respectievelijk) en niet significant verschillend van de totale kliniek populatie (p = 0,589
). Er waren iets White patiënten in de steekproef (48,3%) dan in de algemene populatie UNLV-SDM (40,8%) (p = 0,133
). Daarnaast waren er iets minder 18-64-jarigen in de steekproef (80,8%) dan in de totale kliniek (85,3%) (p = 0,354
) .table 1 demografische analyse van de studie deelnemers
Variabelen
UNLV-SDM
steekproef
Statistische analyse
Geslacht
|
|
Female
n = 35.952 (50,6%)
n = 79 (52,3 %)
χ2 = 0,119, df = 1
Man
n = 35.099 (49,4%)
n = 72 (47,7%)
p = 0,589
Race
|
|
|
White
n = 28.989 (40,8%)
n = 73 (48,3%)
χ2 = 1.621, df = 1
Non-White
n = 42.062 (59,2%)
n = 78 (51,7%)
p
= 0,133
Age
|
|
|
18-64 jaar
n = 60.598 (85,3%)
n = 122 (80,8%)
χ2 = 1.056, df = 1
65 +
n = 10.453 (14,7%)
n = 29 (19,2%)
p
= 0,354
Analyse van speekselmonsters onthuld cel-tellingen variërend tussen 0,8-2,4 × 10 6 cellen /ml (tabel 2). DNA werd succesvol geïsoleerd uit alle verzamelde speeksel monsters met gemiddelde DNA concentraties variërend tussen 820 - 1047 ng /ul. Absorptie metingen en A260 /A280-verhouding analyse bevestigde de zuiverheid van het DNA-isolaten, die gemiddeld tussen de 1,87 en 2.05.Table 2 cellen en DNA-isolatie
Cell count (cellen /ml)
Gemiddeld DNA-concentratie (ng /ul)
A260 /A280
Monsters (n)
0,8-1,2 × 106
915
2.05
31
1.6- 1.9 × 106
820
1,87
94
2,1-2,4 × 106
1047
1.95
26
De geëxtraheerd DNA werd vervolgens gescreend op de aanwezigheid van HPV16 en HPV18 met PCR (figuur 1). Uit deze screening, vier patiënten monsters werden bepaald op HPV-positieve, die 2,6% van de totale gescreende (n = 4/151) vertegenwoordigd. Alle vier monsters koesterde HPV16 DNA en geen bleken positief voor HPV18 te zijn. Hoewel een positief monster pool van de slechts vier patiënten niet mogelijk voor een bredere gevolgtrekkingen of conclusies, een eerste beschrijvende analyse van demografische gegevens bleek deze vier monsters waren afkomstig van vrouwen, die ook minderheid (niet-blanke, Latijns-Amerikaans) (tabel 3) waren. Drie van de vier monsters waren van patiënten tussen 18 - 64 jaar (2,0%) en één monster afkomstig is van een patiënt gedurende 65 jaar (0,7%). Figuur 1 Screening van patiëntenmonsters voor HPV. PCR met behulp van DNA geëxtraheerd uit patiëntenmonsters (n = 151) werd gescreend onder gebruikmaking van HPV16- en HPV18-specifieke primers, werden vier monsters geherbergd HPV16 (2819, 2718, 2527 en 2430) geopenbaard. Geen monsters bleken HPV18 haven. DNA geëxtraheerd uit eerder cervicaal adenocarcinoom cellijnen CaSki en GH354, werd gebruikt als HPV16 en HPV18 positieve controles, respectievelijk.
Tabel 3 Analyse van HPVscreening
Variables
HPV16-positive
HPV18-positive
HPV-negative
Gender
|
|
Female
n = 4 (2,6%)
n = 0
n = 75 (49,7%)
Man
n = 0
n = 0
n = 72 (47,7%)
Race
|
|
|
Wit
n = 0
n = 0
n = 73 (48,3%)
Non-White
n = 4 (2,6%)
n = 0
n = 74 (49,0%)
Age
|
|
|
18-64 jaar
n = 3 (2,0%)
n = 0
n = 119 (78,8%)
65 +
n = 1 (0,7%)
n = 0
n = 28 (18.5 %)
DNA-monsters werden vervolgens verwerkt met behulp van kwantitatieve qPCR om kwantitatieve beoordeling, evenals het meten van de gevoeligheid en specificiteit (figuur 2) te verstrekken. Analyse van het bereik van het aantal kopieën /genoom voor de huishoud-gen (β-actine) binnen HPV-negatief (bereik: 4-363 kopieën /genoom) en HPV-positieve monsters (bereik: 75-1096) waren vergelijkbaar en ver boven het cutoff waarde (& gt; 0,1 kopieën /genoom). Analyse van de qPCR resultaten in aantal kopieën /genoom voor HPV onthulde opvallende verschillen in kopie-aantallen tussen HPV-negatief (bereik: 0,0001-0,000004 kopieën /genoom) en HPV-positief (bereik: 70 - 111), die gemakkelijk werden onderscheiden met behulp van de cutoff waarde (& gt; 0.001 kopieën /genoom). Geen valse positieven of valse negatieven gevonden, waaruit voldoende gevoeligheid en specificiteit het percentage ware positieven (4/4 of 100%) en ware negatieven (147/151 of 100%) vaststellen. Figuur 2 Grafische analyse van qPCR HPV-screening resultaten. Plotten van copy number /genoom voor het huishouden gen (β-actine) was vergelijkbaar uit monsters van HPV-positieve (bereik: 75-1096) en de HPV-negatieve monsters (bereik: 4-363 kopieën /genoom). Nummer kopiëren /genoom met behulp van qPCR aanzienlijk hoger was dan de grenswaarde (& gt; 0,1 kopieën /genoom), bevestiging van de HPV-positieve monsters deed haven HPV16 DNA (bereik: 70-111 kopieën /genoom), maar niet HPV18. Waarden voor HPV-negatieve monsters waren goed onder de grenswaarde (bereik: 0,0003-0,000004 kopieën /genoom)., Met uitzondering van de drie monsters (2867, 2854, 2792), die onder de detectiegrens waren
Discussie
Het primaire doel van deze studie was om een mondelinge screening van normale gezonde volwassenen uit te voeren in Nevada voor hoog-risico HPV. Vorige pogingen om deze instelling en binnen de staat om op basis van bloed monsters te verkrijgen voor andere vormen van screenings, zoals lood (Pb) levels, zijn grotendeels succesvol geweest als gevolg van de patiënt vrees en angst voor bloedafname [63]. Om deze specifieke problemen te voorkomen, deze studie gebruik gemaakt van niet-invasief verzameld speeksel om deze analyse uit te voeren. Deze inspanningen uiteindelijk toegelaten voor de inzameling en het screenen van tientallen patiënten monsters; een duidelijke verbetering van de patiënt participatiegraad ten opzichte van andere vroegere, maar vergelijkbaar, pogingen om biologische monsters te verzamelen van de lokale bevolking. De resultaten van de huidige studie geven nieuwe gegevens uit een onuitgegeven patiëntenpopulatie en geografisch gebied aan de groeiende corpus van informatie over orale HPV prevalentie bij gezonde volwassenen vullen.
Deze gegevens toonden een prevalentie van hoog-risico HPV orale (2,6 %) vrijwel gelijk aan de meest recente studies multinationale gezonde, kanker-vrije volwassenen (3,1% tot 5%) [61, 62]. In de afgelopen decennia hebben internationale studies HPV prevalentie onderzocht bij gezonde volwassenen met behulp van biopsie monsters, die op grote schaal variabele prevalentie die varieerden van 0 gemeld - 15% [47-51]. Echter, andere recent gepubliceerde rapporten screening voor orale HPV-infectie bij gezonde volwassenen met behulp van speeksel en orale lavage testen gemeld totale prevalentie tarieven die ook dicht bij deze range (1,3%, 2,8%, 7%) [52-59] waren.
Bovendien, hoewel de resultaten van deze studie bleek oraal HPV-infectie alleen bij vier patiënten, die minderheid en vrouwelijke waren de meeste vrouwen en minderheid patiënten in deze studie had geen bewijs van orale HPV-infectie. In een eerste pilot-studie, suggereren deze gegevens een meer uitgebreide en diepgaande analyse van deze populatie kan het nodig zijn, zoals de recente epidemiologische studies hebben aangetoond dat de prijzen van orofaryngeale kanker haven sterk gestegen onder vrouwen minderheid in de VS, ondanks de algemene dalende prijzen [ ,,,0],66]. Meer in het algemeen, de tarieven van orofaryngeale kanker zijn gestegen onder sommige minderheidsgroepen subgroepen [67], ondanks een algemene daling onder de algemene bevolking in de VS [23, 24, 68]. Dit kan worden verklaard, gedeeltelijk, door hogere prijzen van tabak en alcohol gebruik, maar kan ook worden toegeschreven aan andere factoren, zoals opleiding, inkomen, stress, voeding, gezondheid geletterdheid en de blootstelling aan orale besmettelijke stoffen [22, 25] zijn. Deze pilot studie geeft voorlopige informatie over orale HPV prevalentie en de resultaten suggereren dat nader onderzoek kan worden gerechtvaardigd, met name in het licht van de gezondheidszorg verschillen geconfronteerd met zowel vrouwen en minderheden in Nevada en de VS, in het algemeen [23, 24].
deze studie bleek ook de aanwezigheid van de hoog-risico-stam HPV16, maar niet HPV18. Hoewel sommige rapporten hebben gesuggereerd dat orale HPV infectie verschillende HPV-stammen [15-21, 69] kan omvatten, is dit resultaat niet onvergelijkbaar is met andere vaststellingen suggereren HPV16 kan verantwoordelijk zijn voor de overgrote meerderheid van HPV-positieve monsters orale [48, 49, 53, 57, 59]. Het is waarschijnlijk dat verdere uitbreiding van dit project om grotere steekproeven onder meer extra HPV stammen zullen ontdekken om meer uitgebreide raming van de mondelinge HPV-infectie in deze populatie.
Deze studie had een aantal beperkingen die moeten worden overwogen. Ten eerste, hoewel het niet-invasieve karakter van deze studie voldoende is voor de aanname en screening van een groot aantal patiënten was de totale monstergrootte was enigszins beperkt in vergelijking met de grotere multinationale studies voornoemde [57, 58, 61]. Het aantal gezonde volwassenen gescreend voor orale HPV in deze pilot-studie, echter, steekt gunstig af met een aantal andere verslagen - met sample maten variërend 12-97 [20, 47-53]. Ten tweede werden gedetailleerde demografische en gedrags-gegevens niet als kritiek op de oorspronkelijke doelstellingen van deze pilot studie is echter de opname van roken en het gebruik van tabak, evenals meer gedetailleerde informatie over andere gedragingen, huisvesting, onderwijs, inkomen en andere sociaal-economische indicatoren alsmede seksuele handelingen aanvullende inzichten kunnen verschaffen in toekomstig onderzoek [55, 58, 59, 70]. Tot slot, het screenen voor een extra hoog-risico HPV-stammen [71-75] en andere orale besmettelijke stoffen kunnen mogelijk in de toekomst studies met meer aanzienlijke middelen en personeel
zijn. Conclusies Inloggen Deze studie met succes geworven patiënten en gescreend speekselmonsters voor hoog-risico HPV, het bevestigen van HPV16, maar niet HPV18, was aanwezig in een klein deel van de gezonde volwassen patiënten in een Amerikaanse tandschool kliniek bevolking. Deze patiënten waren vrouwen en minderheden. Veel gezondheid verschillen geconfronteerd met vrouwen en minderheden in de VS, en met een aantal aanwijzingen dat roken en orofaryngeale kanker tarieven kunnen worden steeds meer in deze subgroepen van de bevolking, kunnen de resultaten van deze studie van grote waarde zijn voor andere tandheelkundige, medische en beroepsbeoefenaren in de gezondheidszorg voor een goed begrip van de orale risico voor de gezondheid en de ziekte verder
Afkortingen
(HPV).
Human papillomavirus
(US): Hotel Verenigd Staten
(DNA):
Desoxyribonucleïnezuur
(UNLV-SDM):
Universiteit van Nevada, Las Vegas - School of Dental Medicine
(PCR):
polymerase kettingreactie
(GAPDH):
glyceraldehyde-3- fosfaat dehydrogenase
(qPCR):
kwantitatieve polymerase chain reaction
(bp):
basenparen
(nt):
nucleotide
(RCF):
Relatieve centrifugale kracht
( PBS):
fosfaatgebufferde zoutoplossing
(dNTP):
deoxyribonucleotidetrifosfaat
(dUTP):
2'-deoxyuridine trifosfaat
(dTTP).
deoxythymidine trifosfaat
verklaringen
Dankwoord
De auteurs willen graag bedanken de Universiteit van Nevada, Reno (UNR) School of Medicine, de UNLV School of Community Health Sciences en UNLV-SDM Departement Biomedische Wetenschappen en Bureau voor Onderzoek voor het verstrekken van de leveringen en reagentia voor deze eerste pilot-studie. KK wil Laurel Pritchard, Kenneth Fernandez en Chandler Marrs bedanken voor hun hulp. 'Originele ingediende dossiers voor afbeeldingen
Hieronder staan de links naar de auteurs'
Auteurs originele ingediende dossiers voor afbeeldingen. 'Originele bestand voor figuur 1 12903_2010_195_MOESM2_ESM.pdf Authors' 12903_2010_195_MOESM1_ESM.pdf Auteurs originele bestand voor figuur 2 Concurrerende belangen Ondernemingen De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende belangen. Bijdragen
Authors '
KK, SW, AB en RW opgevat, gemonitord en coördineerde de experimentele opzet. RB, JC, JF, DM, en JM waren verantwoordelijk voor het werven van patiënten, informed consent, het verzamelen van monsters, en een aantal biomedische analyse. DT, KK, en SW voerde de DNA extracties, PCR en qPCR analyse. KK, SW en DT waren verantwoordelijk voor de gegevensanalyse, alsmede het schrijven en redigeren van dit manuscript. Alle auteurs hebben gelezen en goedgekeurd het definitieve manuscript.
| | 