Abstracte achtergrond
mutans streptococcen (Streptococcus mutans
en S. sobrinus
) worden beschouwd als belangrijke etiologische agenten van cariës. Met behulp van een polymerase kettingreactie methode ontdekt we die bacteriën van 145 poliklinische patiënten (6-30 jaar) met een verstandelijke handicap (ID) en hun aanwezigheid werd vergeleken met de incidentie van tandcariës.
Methods
Plaque monsters werden verzameld uit alle uitgebarsten tand sites in patiënten met een steriele tandenborstel. Een tandheelkundig onderzoek werd uitgevoerd om het aantal rotte tanden en gevuld (DFT score) tot blijvende gebit met behulp van de WHO cariës diagnostische criteria vast te stellen. Een Mann-Whitney U-test werd gebruikt om de cariës scores te vergelijken tussen combinaties van de bacteriën, en met een Wilcoxon rank test gebruikt om cariës scores te vergelijken tussen de baseline en na 1 jaar.
Resultaten
Van alle vakken, S. mutans
en S. sobrinus
bezeten waren door de 78,7 en 83,5%, respectievelijk, terwijl 13,1% positief voor S. mutans waren alleen
, 17,9% voor S. sobrinus
alleen, en 65,6 % voor beide organismen, met 3,4% negatief voor beide. De gemiddelde DFT score van de proefpersonen positief voor zowel S. mutans
en S. sobrinus
na 1 jaar was significant hoger dan dat van degenen positief voor S. mutans
alleen (P Restaurant & lt; 0,01 ). De toename van cariës increment was ook significant hoger bij patiënten met beide gedetecteerde bacteriën (P Restaurant & lt; 0,001).
Conclusie
Onze resultaten geven aan dat patiënten met een ID herbergen zowel S. mutans Kopen en S. sobrinus heb je al een significant hogere incidentie van cariës dan die met S. mutans
alleen. achtergrond
mutans streptococcen (Streptococcus mutans
en S. sobrinus
) worden beschouwd als belangrijke etiologische agenten van cariës bij mensen [1-3]. Deze bacteriën zijn de meest voorkomende vermoedelijke pathogenen geïsoleerd uit menselijke tandplak en hun prevalentie is gemeld in epidemiologische studies [4-7]. Verscheidene werkwijzen zijn gebruikt voor de detectie van mogelijke pathogenen, waaronder directe microscopie, kweken, enzymatische tests enzymgekoppelde immunosorbent assays en species-specifieke DNA probes. Verschillende onderzoekers hebben ook polymerasekettingreactie (PCR) werkwijzen ontwikkeld en gerapporteerd dat ze gevoeliger voor detectie zijn in vergelijking met conventionele kweektechnieken [8, 9], zoals die zijn getoond opsporen van lage aantallen worden (5-100) van bacteriële cellen [9, 10], terwijl ze ook snel en relatief eenvoudig uit te voeren. Verder zijn PCR-tests zijn geschikt voor specifieke detectie en identificatie van de menselijke cariogene bacteriën, waaronder S. mutans
en S. sobrinus
[10, 11] gevonden.
In vorige cross-sectionele en longitudinale studies, we gemeld dat kleuters met primaire gebit herbergen zowel S. mutans
en S. sobrinus
hadden een significant hogere incidentie van cariës dan die met S. mutans alleen [6, 12]
. Onlangs hebben we ook opgemerkt dat scholieren herbergen zowel S. mutans
en S. sobrinus
hadden een significant grotere cariës ervaring in zowel vaste en de primaire tanden in vergelijking met die van S. mutans alleen
[13] . Aldus identificatie en bepaling van de prevalentie van pathogenen van fundamenteel belang voor het begrijpen van de initiatie en ontwikkeling van cariës, en voor het bepalen betere vormen van behandeling en preventie. Echter, weinig longitudinale studies naar de relatie tussen deze twee soorten en cariës activiteiten bij kinderen [12, 14] of personen met een verstandelijke handicap (ID) [15] en het syndroom van Down [16] zijn uitgevoerd.
Personen met ID die worden thuis verzorgd door familieleden kunnen ook last hebben van een slechte mondhygiëne, zoals hogere bacteriële tellingen werden gevonden bij patiënten met een ID in vergelijking met mensen zonder handicap [17]. De voor het behandelen en voorkomen tandcariës en betere mondhygiëne personen met ernstige beperkingen werkwijzen beperkt. Het is echter belangrijk om clinici te kiezen uit de verschillende technieken beschikbaar voor het voorkomen van cariës bij hun patiënten met ID volgens risico. In de huidige studie hebben we ontdekt S. mutans
en S. sobrinus
in de Japanse patiënten met ID met behulp van een PCR-methode, en vervolgens vergeleken hun aanwezigheid met de incidentie van tandcariës gedurende een periode van 1 jaar.
Methods
honderd vijfenveertig poliklinische patiënten met ID (een Intelligentie Quotiënt (IQ) ≤ 70) de leeftijd van 6 tot 30 jaar en elk met gemengde of permanente gebit, die Hiroshima University Hospital bezocht, werden Hiroshima Stad ingeschreven. De demografische data van de deelnemende poliklinische patiënten en gegevens over hun status handicap, IQ, systemische ziekten en geschiedenis van reguliere medicijnen (indien aanwezig) werden verzameld uit de medische dossiers. De proefpersonen werden samengesteld uit 135 met ID en 10 met het syndroom van Down, en een totaal van 106 (73,1%) mannen en 39 (26,9%) vrouwen werden onderzocht (tabel 1). Toestemming voor deelname werd verkregen uit ten minste één van de ouders voorafgaand aan het onderzoek volgens de ethische richtlijnen van de Verklaring van Helsinki (1975) en ethische goedkeuring werd verkregen van de Ethische Commissie van Hiroshima University (Epidemiologie-nr. 34). Elk onderwerp onderging een tandheelkundig onderzoek in de Special Care Dental Clinic uitgevoerd door een enkele goed opgeleide tandarts (MO) zittend in een tandartsstoel in een liggende positie, met behulp van de WHO cariës diagnostische criteria om de rotte en gevuld tanden te bepalen (DFT) index [18]. Degenen die antibiotica in de afgelopen 3 maanden of met systemische ziekten hadden gekregen waren excluded.Table 1 Study bevolking naar leeftijd en geslacht
Age
Male
Female
Total
(years)
No.
%
No.
%
6–10
12
92.3
1
7.7
13
11–15
19
86.4
3
13.6
22
16–20
21
77.8
6
22.2
27
21–25
32
69.6
14
30.4
46
26–30
24
64.9
13
35.1
37
Tandplaque werd verkregen van een uitgebroken tanden door borstelen met een steriele tandenborstel gedurende 1 minuut onder toepassing van een eerder beschreven werkwijze [19]. Tijdens tandenpoetsen, plaque vastzit aan de tandenborstel werd verwijderd door meerdere malen wassen in een buis van steriel gedestilleerd water. De plaquemonsters in de buis werden onmiddellijk getransporteerd naar ons lab en bewaard bij -20 ° C vóór extractie van genomisch DNA.
Streptococcus mutans
JCM5175 en S. sobrinus
ATCC27607 werden als controle species . PCR detectie van de doelsoort werd uitgevoerd met primers door Igarashi et al. [8, 10]. Oligonucleotide primers werden ontworpen om de dex
DNA-sequentie van S. mutans
(GenBank no. D49430) en S. sobrinus
(GenBank nr. M96978). S. mutans
de voorwaartse primer, 5'-TAT GCT GCT ATT GGT GGA TC 3 ', complementair aan de sequentie 973-992 en de omgekeerde primer 5' AAG GTT GAG TTG CAA AAT CG 3 ', is complementair aan de sequentie 2225-2244. S. sobrinus
de voorwaartse primer 5 'TGC TAT CTT TCC CTA GCA TG 3', complementair aan de sequentie 134-153 en de omgekeerde primer 5 'GGT ATT CGG GAC TTT TGC 3', is complementair aan de sequentie 1726-1743. Ondernemingen de primers voor eubacteriën 16S ribosomale RNA-sequentie (GenBank toegangsnummer M75035) werden gebruikt om de aanwezigheid van bacteriën in plaquemonsters als positieve controle [20] bevestigen. De voorwaartse primer 5 'CAG GAT TAG ATA CCC TGG TCC ACG TAG C 3', complementair aan de sequentie 783-810 en de omgekeerde primer 5 'GGG CGG GAC TGT GTA CAA GGC CCG GGA ACG 3', complementair aan de sequentie 1378-1407. De grootte van het verwachte PCR-product was 625 bp.
Plaque monsters werden eerst gecentrifugeerd bij 1600 xg gedurende 20 min
. Vervolgens werd supernatant verwijderd en individuele celpellets werden bewaard bij -20 ° C tot DNA-isolatie, waarbij de pellets werden geresuspendeerd in 180 pl enzymatische lysis buffer (20 mM Tris-HCl, pH 8,0; 2 mM EDTA; 1,2% Triton X-100, 20 mg /ml lysozym). Een genomisch DNA preparaat van elke plaque monster werd verkregen met een DNeasy® Blood and Tissue Kit (Qiagen, Austin, TX, USA) voor DNA extractie van Gram-positieve bacteriën, waarbij voegden we een RNase behandeling [21]. DNA-concentraties in de tandplaque monsters werden bepaald door een
260, terwijl de kwaliteit werd geschat met behulp van de A
260 /A
280 ratio [22].
polymerase kettingreactie amplificatie werd uitgevoerd in een reactiemengsel (25 pi) bestaande uit PCR kralen (GE Healthcare plc, Little Chalfont, Buckinghamshire, UK) die een enzym bevat (twee eenheden Taq DNA polymerase
) en de vereiste reagentia en 25 pmol van elke primer en 20 tot 50 ng van het matrijs-DNA-oplossing in een thermische cycler (DNA Engine PTC-220 DYAD TM, MJ Research, Hatoboro, PA, USA). Elk stel PCR analyses omvatte een negatieve controle (water blanco) naast de positieve controle. Het reactiemengsel werd gedenatureerd bij 95 ° C gedurende 3 min gevolgd door 26 cycli van denaturatie bij 95 ° C gedurende 1 minuut, hybridisatie bij 55 ° C gedurende 1 minuut en verlenging bij 72 ° C gedurende 1 min, met een laatste cyclus van 94 ° C gedurende 1 min, 55 ° C gedurende 1 min en 72 ° C gedurende 5 min [8]. Na amplificatie werd 15 gl van de PCR producten geanalyseerd door elektroforese op een 1,0% agarosegel en, na kleuring met ethidiumbromide werden de nieuw gesynthetiseerde DNA-fragmenten onder ultraviolet licht gevisualiseerd 302 nm. De groottes van de PCR-producten werden geschat uit de elektroforetische migratie van de producten ten opzichte van een 100-base ladder marker (Amersham Pharmacia Biotech AB, Uppsala, Zweden). De gevoeligheid van de PCR-methode werd getest met bekende hoeveelheden gezuiverd S. mutans
JCM5175 en S. sobrinus
ATCC27607 als een matrijs. Serieel verdund DNA werd gebruikt als een matrijs, en de detectielimiet was 1 pg DNA van S. mutans
(12 cellen) en 100 fg van matrijs DNA voor S. sobrinus
(9 cellen) (gegevens niet getoond).
Beschrijvende statistiek en statistische analyses werden uitgevoerd met een software statistisch pakket (SPSS 14.0, Inc., Chicago, IL, USA). Een Mann-Whitney U-test werd gebruikt om de cariës scores te vergelijken tussen onderwerpen die over de verschillende combinaties van bacteriën en een Wilcoxon rank test om cariës te vergelijken scores tussen de basislijn en 1 jaar later.
Resultaten
Tabel 2 laat zien cariës prevalentie bij personen met ID bezit van S. mutans
alleen of in combinatie met S. sobrinus
bij aanvang en na 1 jaar. S. mutans Kopen en S. sobrinus
gevonden in 78,7 en 83,5%, respectievelijk, van onze patiënten met ID. Bovendien, 13,1% was positief voor S. mutans
alleen al 17,9% voor S. sobrinus
alleen, en 65,6% voor beide, terwijl 3,4% was negatief voor zowel S. mutans
en S. sobrinus
. De DFT score in die positief voor beide organismen na 1 jaar was significant hoger dan die van de positieve S. mutans
alleen (P
& lt; 0,01). Bovendien, dat de score bij patiënten positief voor zowel na 1 jaar was significant hoger dan bij aanvang (P Restaurant & lt; 0,001) en de toename van de DFT score in die positief voor zowel was significant hoger dan bij patiënten positief voor S. mutans
alleen (P
& lt; 0,01)
Tabel 3 toont patiënten met eerdere cariës bij aanvang en cariës stapsgewijze verhogingen na 1 jaar, samen met de combinatie van mutans streptococcen gedetecteerd.. Zeventien (89,5%) met S. mutans alleen
, en 86 (90,5%) met zowel S. mutans
en S. sobrinus
had afgelopen cariës ervaringen. Vier (21,1%) van de patiënten met S. mutans
alleen, 9 (34,6%) met S. sobrinus
alleen en 54 (55,7%) met beiden toename van cariës verhogen, terwijl geen van de proefpersonen bezitten geen organisme bleek een toename van de toename. Ook, ongeveer 60% van de proefpersonen met beide hadden een stijging van de increment cariës over de 1-jaar durende studie periode, terwijl ongeveer 20% van de mensen met S. mutans
alleen al zo'n increase.Table 2 cariës prevalentie bij patiënten met aangetoonde S. mutans
alleen of in combinatie met S. sobrinus
bij aanvang en na 1 jaar
Oraganism aanwezig
Mean (SD) DFT
Toename DFT
Range
S. mutans
S. sobrinus
No. van de patiënten (%)
Baseline
Na 1 jaar
Mean (SD)
+
-
19 (13.1)
6,47 (4,64)
6,95 (4,61) *
0,47 (1,22) *
0 -5
-
+
26 (17,9)
5,96 (5,03)
6,42 (5,33)
0,46 (0,71)
0-2
+
+
95 (65,6)
8,65 (7,60) †
10,31 (8,13) * †
1,65 (2,04) *
0-9
-
-
5 (3.4)
0,60 (1,34)
0,60 (1,34)
0.00 (0.00)
0
statistische significantie tussen groepen: * P Restaurant & lt; 0,01, Mann-Whitney U-toets; † P
. & Lt; 0,001, Wilcoxon rank test
Data voor DFT scores worden gepresenteerd als gemiddelde (SD)
Tabel 3 Patiënten met een eerdere cariës ervaring bij aanvang en incrementele stijgt na 1 jaar, en de combinatie van mutans streptococcen gedetecteerd
organisme
Vorige tandbederfgegevens
cariës oplopende verhoging
S. mutans
S. sobrinus
No.
%
No.
%
+
-
17
89.5
4
21.1
-
+
22
84.6
9
34.6
+
+
86
90.5
54
55.7
-
-
1
20.0
0
0.0
PCR-analyse met 16S rRNA primers bevestigde de aanwezigheid van bacterieel DNA in alle plaque monsters (gegevens niet getoond).
Discussie
Personen die een verstandelijke beperking en thuis verzorgd door familieleden hebben vaak last van een slechte mondhygiëne, zoals zij zijn hoger te liggen bacteriële tellingen in vergelijking met personen zonder handicap [17]. De voor het behandelen en voorkomen cariës en verbetert ook mondhygiëne voor patiënten met een ernstige handicap werkwijzen zijn beperkt, maar het is belangrijk dat artsen een geschikte techniek voor het voorkomen van tandcariës basis van het risico van de ontwikkeling van hun patiënten te kiezen ID.
We voerden deze longitudinale studie van de aanwezigheid van mutans streptokokken vergelijken met het voorkomen van tandcariës bij Japanse patiënten met id gedurende 1 jaar met een PCR-methode. De gemiddelde concentratie van DNA werd uit borstelen plaquemonsters ongeveer 700 pg /ml, die voor het uitvoeren van deze PCR-gebaseerde enquête voldoende geacht. De aanwezigheid van een bacteriële representatieve steekproef in alle gevallen en afwezigheid van PCR remmende stoffen te waarborgen, hebben we een brede range PCR assays toepassing eubacteriële 16S rRNA-gebaseerde primers en het onderwerpen van alle monsters verkregen met de werkwijze tandenpoetsen. Dit bevestigde de aanwezigheid van bacteriën en bacterieel DNA in alle plaquemonsters (gegevens niet getoond). Deze methode is aangetoond dat een gevoeligere detectiemiddelen van cariogene micro-organismen in vergelijking met de conventionele kweektechnieken [8-11]. Ondernemingen De huidige studie geven aan dat de prevalentie van mutans streptococcen bij patiënten met ID leeftijd 6-30 jaar is 96,6%, wat overeenkomt met gelijke enquêtes schoolkinderen in andere delen van de wereld [23-26], terwijl de prevalentie van mutans streptococcen bij volwassenen gemeld meer dan 60% te zijn [27] en 82,7% bij personen met het syndroom van down 1-48 jaar oud [16]. De prevalentie van S. sobrinus
alleen in de huidige studie was hoger dan in die studies. Echter, deze studies gebruikt cultuurmethoden en eerdere bevindingen blijkt dat mitis-salivarius bacitracine agar remt de groei van S. sobrinus
in grotere mate dan dat van S. mutans
[28, 29]. Aldus kan de contrasterende resultaten te wijten zijn aan het gevoeliger isolatie- en detectiemethode voor S. sobrinus
in onze studie vergeleken met die gebruikt in het verleden, en de verschillen in type en het stadium van carieuze lesies in de onderwerpen. Aangezien echter deze cohort beperkt aanvullende studies nodig. Ondernemingen De DFT score in die positief voor beide organismen op na 1 jaar was significant hoger dan die van de positieve S. mutans
alleen. Bovendien, dat de score bij patiënten positief voor zowel na 1 jaar was significant hoger dan bij aanvang en de toename van de DFT score in die positief voor zowel was significant hoger dan bij patiënten positief voor S. mutans
alleen. De cariës incrementele verhoging voor patiënten bezitten beide organismen was 3,5 keer hoger dan voor die met S. mutans
alleen aangeeft dat mensen met ID bezitten zowel hogere cariës activiteiten die slechts S. mutans
. In onze vorige studie, de verhoging van de DFT score voor melkgebit bij kleuters bezit van beide was vier keer hoger dan voor degenen bezitten S. mutans
alleen [12]. Deze PCR-resultaten toonden aan dat patiënten met ID bezitten zowel S. mutans Kopen en S. sobrinus
een significant hogere cariës en increment verhogen in vergelijking met die van alleen S. mutans
op na 1 jaar die ook eens met de resultaten van eerdere studies van schoolkinderen 11-12 jaar oud [30, 31], evenals studies van voorschoolse kinderen 3-5 jaar oud [6, 12, 32]. In tegenstelling, was er geen significant verschil in de baseline score voor DFT tussen proefpersonen positief voor zowel S. mutans
en S. sobrinus
en mensen met S. mutans
alleen, hoewel de DFT score van hen positief voor zowel S. mutans
en S. sobrinus
toonde een trend naar hoger dan die van mensen met een S. mutans
alleen te zijn. Ondernemingen De huidige proefpersonen werden als poliklinische patiënten behandeld en werd verwezen lokale tandheelkundige klinieken vanwege hun slechte tandheelkundige samenwerking en had al onbehandeld rotte tanden. Alle rotte tanden werden onmiddellijk in de Special Care Dental Clinic behandeld, waardoor de cariës stapsgewijze verhoging van de proefpersonen positief met zowel S. mutans
en S. sobrinus
was significant hoger dan bij patiënten met S. mutans
alone . In vorige studies, patiënten die zowel bacteriën bezat hadden een toename in cariës verhogen gedurende een periode van 1 jaar [14, 33]. De resultaten van deze vroegere studie suggereerde dat de prevalentie van S. sobrinus and more nauw verbonden met toekomstige cariësactiviteit, vooral een toename in gladde-cariës increment, dan de prevalentie van S. mutans
. De vakgebiedpopulatie in het onderhavige onderzoek was beperkt, waardoor verdere studies nodig. Bovendien blijft onbekend hoe gemengde kolonisatie de cariogeniciteit bacteriën toeneemt terwijl kwantitatieve studies met een real-time kwantitatieve PCR moeten de mechanismen van verhoogde risico cariës begrijpelijk voor toekomstig onderzoek.
Zeventien (89,5%) met S. mutans
alleen, en 86 (90,5%) met zowel S. mutans
en S. sobrinus
had afgelopen cariës ervaringen. Vier (21,1%) van de patiënten met S. mutans
alleen, 9 (34,6%) met S. sobrinus
alleen en 54 (55,7%) met beiden toename van cariës verhogen, terwijl geen van de proefpersonen bezitten geen organisme bleek een toename van de toename. Ook, ongeveer 60% van de proefpersonen met beiden een cariës incrementele stijging ten opzichte van de 1-jaar durende studie periode, terwijl ongeveer 20% van de mensen met S. mutans alleen een dergelijke verhoging
aangetoond.
Conclusies
In Kortom, de huidige longitudinale studie resultaten geven aan dat mensen met een ID herbergen zowel S. mutans
en S. sobrinus heb je al een significant hogere incidentie van cariës dan die positief voor S. mutans
alleen.
verklaringen logo VPRO AccessThis artikel wordt gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution 4.0 International License (http:. //creativecommons org /licenties /door /4. 0 /), die onbeperkt gebruik toestaat , distributie en reproductie in elke vorm, mits je de juiste krediet te geven aan de oorspronkelijke auteur (s) en de bron, een link naar de Creative Commons-licentie, en aangeven of wijzigingen zijn aangebracht. De Creative Commons Public Domain Dedication waiver (http:. //Creativecommons org /publicdomain /zero /1 0 /) van toepassing op de ter beschikking gestelde in dit artikel, tenzij anders vermeld data
Competing. belangen
de auteurs verklaren dat ze geen concurrerende belangen.
auteurs bijdragen
YO, FH en MO desighned de studie. MO deed het tandheelkundig onderzoek. YO en MO verzamelde plaque samples. YO en FH voerde de conventionele PCR-test. YO en MO waren verantwoordelijk voor data-analyse. Alle auteurs hebben deelgenomen aan het manuscript verwerking en goedkeuring van de definitieve versie.
