Abstract achtergrond
Tandcariës ontwikkelt als gevolg van het metabolisme van koolhydraten door cariogene bacteriën in een biofilm complex. Deze studie gericht op het onderzoeken of bacteriën in samengevoegde subgingivale plaque monsters gekwantificeerd onder toepassing van een "schaakbord DNA-DNA-hybridisatie" based panel van cariës verwante bacteriën kan weerspiegelen de cariës op een wijze vergelijkbaar met speeksel monsters geanalyseerd met een stoel-side methode in een vorig onderzoek.
Methods
een totaal van 86 moeders en hun kinderen in de leeftijd 4-6 jaar en 12-16 jaar oud deelnamen. Cariës (DMFT /DMFT; Rotte, ontbrekende en gevulde tanden voor permanente en primaire tanden) werd klinisch en radiografisch geregistreerd. Cariës werd opgenomen in de D
3-niveau (cariës in dentine). De D /d component werd verdeeld in drie categorieën. Een gepoolde supragingivale plaque monster per deelnemer werd verkregen uit posterior approximale sites. Analyses van 15 bacteriesoorten werden uitgevoerd met behulp van het dambord DNA-DNA hybridisatie techniek.
Resultaten
geen significante verbanden gevonden tussen de bacteriële scores en DMFT /DMFT noch D /d groepen.
Conclusies
In tegenstelling tot de speekselmonsters en de stoel-side methode, interproximale gepoolde plaque monsters geanalyseerd met behulp van het "dambord DNA-DNA hybridisatie techniek" leverde geen significante relatie tussen de bacteriële tellingen en het tandbederf niet onthullen.
Anette Carlén, Guglielmo Campus en Peter Lingström eveneens bijgedragen aan dit werk. achtergrond
cariës is een multifactoriële aandoening geïnitieerd en beïnvloed door een aantal belangrijke factoren [1]. Bovendien, speeksel speelt een belangrijke rol bij het handhaven van de integriteit van tanden bufferen zuren geproduceerd door cariogene bacteriën en tanden beschermd. Speeksel kan de orale microflora beïnvloeden door adsorberen aan het tandoppervlak die de pellicle, die bepaalt welke micro-organismen kunnen hechten en te koloniseren [2]. Speeksel werd gewoonlijk gebruikt als een diagnostisch hulpmiddel om afzonderlijke cariës activiteit en risico bepalen [3, 4]. Een dergelijke beoordeling omvat de opname van speeksel buffercapaciteit en tellingen van cariogene bacteriën voornamelijk mutans streptococcen en lactobacillen met behulp van de stoel-side testen.
Hoewel speeksel analyse een algemeen overzicht van de mondelinge ecologie als gevolg van de cariës risico kan bieden, cariës is voornamelijk een -biofilm-geïnduceerde ziekte [5]. Die dit biofilm (tandplak) als een complex microbieel ecosysteem het begrip van de rol verbeterd cariës ontwikkeling en progressie [6]. Cariogene plaques ontstaan wanneer acidogene en aciduric bacteriesoorten te verhogen na een hoge frequentie blootstelling aan koolhydraten. Het microbiële metabolisme van dergelijke koolhydraten leidt tot verzuring van de biofilm, wat weer kan leiden tot zuur-geïnduceerde demineralisatie van het tandheelkundige harde weefsels [6]. Een van de moleculaire technieken die de diverse microbiële samenstelling van de tandheelkundige biofilm gebleken is de "dambord DNA-DNA hybridisatie techniek" [7, 8]. Er is echter geen cariës specifiek panel nog niet voorgesteld. Het zou dan ook interessant zijn om het schaakbordpatroon DNA-DNA hybridisatie techniek met cariës specifiek paneel om de relatie tussen individuele tandbederf en het graven van verschillende cariës gerelateerde supragingivale plaquebacteriën onderzoeken. Ondernemingen De onderhavige studie werd uitgevoerd als onderdeel van een reeks studies over Saoedi-moeders en hun kinderen. Een deel gericht op het beschrijven van de cariës ervaring met betrekking tot diverse cariës factoren en een duidelijk verband tussen de stoel-side speeksel bacteriële tellingen en tandbederf werd gevonden [9]. Een ander deel is ontworpen om te bepalen of gepoolde interproximale plaque monsters geanalyseerd met behulp van het "dambord DNA-DNA hybridisatie techniek" kan weerspiegelen de cariës. Ondernemingen De hypothese van deze cross-sectionele studie is dat hogere cariës ervaringen worden geassocieerd met een hogere tellingen van -cariës verwante bacteriën in subgingivale plaque. Het doel van deze studie was dan ook om te onderzoeken of bacteriën in samengevoegde subgingivale plaque monsters gekwantificeerd onder toepassing van een "schaakbord DNA-DNA-hybridisatie" based panel van cariës verwante bacteriën kan weerspiegelen de cariës op een wijze vergelijkbaar met speeksel monsters geanalyseerd met een chair-side methode, in een vorig onderzoek.
Methods
onderwerpen
de studie ethische goedkeuring door de Faculteit der Tandheelkunde werd gegeven op King Abdulaziz Universiteit in Jeddah, Saoedi-Arabië. De gebitsgegevens aan de Dental Health and Emergency Clinics aan de Faculteit der Tandheelkunde werden gescreend om geschikte kandidaten te identificeren familie. De studie omvatte 86 vrijwilligers gezinnen. Van elke familie, de moeder (gemiddelde leeftijd 37,0 ± 4,5 jaar) en twee van haar kinderen, in de leeftijd 4-6 jaar oud (gemiddelde leeftijd 5,0 ± 0,9 jaar) en 12-16 jaar oud (gemiddelde leeftijd 13,0 ± 1,4 jaar) vrijwillig. Mondelinge informatie over het onderzoek werd gegeven aan de ouders en schriftelijke toestemming werd verkregen. Alle onderzoeken werden uitgevoerd door een van de auteurs (AM) uitgevoerd.
Cariës registratie & De status gebit werd uitgedrukt met behulp van de DMFT index (rotte, ontbrekende en gevulde tanden) voor permanente tanden en DMFT voor melkgebit. Derde kiezen werden uitgesloten. Cariës werd klinisch en radiografisch geregistreerd bij de D 3-niveau [10]. Bitewing röntgenfoto's werden genomen voor elke deelnemer om approximale verval te nemen. Alle approximale oppervlakken van het gebit van de mesiale oppervlak van de eerste premolaren /melkmolaren met het distale oppervlak van de tweede molaren /melkmolaren opgenomen.
Bacteriële plaquemonsters
Samengevoegde supragingivale plaque werd bemonsterd uit de bijeen liggende plekken tussen de tanden 16/15, 25/26, 35/36 en 46/45 in de moeders en oudere kinderen en tanden 55/54, 64/65, 74/75 en 85/84 in de jongere kinderen met steriele Gracey curettes. Als een van de tanden in de approximale plaats ontbrak, werd een aangrenzende terrein gebruikt. Elke plaque monster werd geplaatst in een Eppendorf buis met 150 μ l
steriele TE-buffer (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 7,6). Dan 100 μ l
van 0,5 M NaOH werd aan het pellet toegevoegd en plaque de bacteriële suspensie werd bewaard bij -20 ° C in afwachting van verdere verwerking [11].
Schaakbord DNA-DNA hybridisatie
analyse van bacteriële species werd uitgevoerd met de checkerboard DNA-DNA hybridisatie methode [12]. Totaal genomisch probes werden bereid uit de 15 bacteriële stammen bekend met betrekking cariës zoals getoond in Tabel 1. De evaluatie van het aantal bacteriën in de monsters werd uitgevoerd door vergelijking van de verkregen signalen met die die door de gepoolde standaardmonsters die een telling van 10 6 en 10 5 van elke bacteriële soorten, respectievelijk. De signalen waren als volgt gecodeerd op een schaal van 0 tot 5: 0 = geen signaal; 1 = een signaaldichtheid zwakker dan die van de lage standaard (& lt; 10 5 bacteriën); 2 = een signaal dichtheid gelijk aan die van de lage standaard (= 10 5 bacteriën); 3 = een signaal dichtheid hoger dan die van de lage standaard maar lager dan die van het hoge niveau (& gt; 10 5 maar & lt; 10 6 bacteriën); 4 = een signaal dichtheid gelijk aan die van het hoge niveau (= 10 6 bacteriën) en 5 = een signaal dichtheid hoger dan die van het hoge niveau (& gt; 10 6 bacteriën). Meer details over de techniek zijn in Mannaa et al. [13]. Alle beoordelingen werden uitgevoerd door een onderzoeker (AM) .table 1 De 15-cariës gerelateerde bacteriestammen voor de bereiding van DNA-probes en verdere vergelijking met klinische cariës gegevens
Bacterial Strain nomenclatuur
info & amp; bron
mutans streptococcen
Streptococcus mutans
ATCC-25175
Streptococcus sobrinus
CCUG-27507
Non-mutans streptococcen
Streptococcus mitis
ATCC-49456D-5
Streptococcus gordonii
ATCC-35105D-5
Streptococcus sanguinis
ATCC-10556D-5
Streptococcus salivarius
ATCC-9759D-5
Lactobacilli
Lactobacillus casei
ATCC-334D-5
Lactobacillus salivarius
CCUG-55845
Lactobacillus fermentum
OMGS -3182
Actinomyces
Actinomyces odontolyticus
NCTC-9935
Actinomyces oris
ATCC-12104D-5
Veillonella parvula
ATCC-10790D-5
Rothia dentocariosa
CCUG-17835
Bifidobacterium dentium
OMGS-1956
Parvimonas micra
ATCC-33270
data-analyse Leer Alle gegevens werden geanalyseerd met behulp van de IBM ® SPSS ® statistisch pakket (PASW versie 18.0, IBM ®, Chicago, Illinois ., VERENIGDE STATEN VAN AMERIKA). De D /d component werd onderverdeeld in laag: ≤ 1, medium: 2-5 en hoog: & gt; 5 voor de moeders en oudere kinderen, en een laag: ≤ 3, medium: 4-9 en hoog: ≥ 10 voor de jongere kinderen. Cohen's Kappa voor de bepaling van de intra-onderzoeker betrouwbaarheid van de registratie cariës berekend. Beschrijvende statistiek, zoals de gemiddelde en standaardafwijking werden afzonderlijk berekend voor de drie groepen. Betreffende het schaakbordpatroon scores slechts enkele signaal "0" gegevens werden vastgelegd en dus gecombineerd met signaal "1" gegevens in "≤1". One-way ANOVA werd gebruikt om gemiddelde verschillen in cariës in verband met de bacteriële scores vergelijken. Fisher's exact test werd gebruikt om de D /d groepen koppelen aan de bacteriële scores. Het niveau van de statistische significantie werd vastgesteld op 5%.
Resultaten en discussie
Cohen's kappa waarden voor de cariës registratie voor de moeders, jongere kinderen en oudere kinderen waren respectievelijk 0,88, 0,90 en 0,82. Tabel 2 geeft een overzicht van de bacteriële telt voor elke soort. De cariës ervaringen (DMFT /DMFT) van de moeders, zijn jongere en oudere kinderen samengevat in tabel 3.Table 2 Score distributie voor de 15 bacteriestammen verkregen door Schaakbord DNA-DNA hybridisatie techniek in de moeders, 4- tot 6-jaar -old (C 4-6) en 12- tot 16-jaar-oude (C 12-16) kinderen
Bacteriële stammen
Schaakbord scores
Moeders
C4-6
C2-16
n = 86
n = 86
n = 86
≤1
2
3
4
5
≤1
2
3
4
5
≤1
2
3
4
5
S. mutans
77
8
1
0
0
68
15
3
0
0
10
76
0
0
0
S. sobrinus
6
80
0
0
0
79
3
4
0
0
9
77
0
0
0
S. sanguinis
17
69
0
0
0
19
66
1
0
0
68
17
1
0
0
S. salivarius
84
2
0
0
0
80
6
0
0
0
83
3
0
0
0
S. gordonii
67
16
3
0
0
67
16
3
0
0
66
16
3
1
0
S. mitis
72
12
2
0
0
72
10
4
0
0
74
12
0
0
0
L. casei
81
5
0
0
0
82
4
0
0
0
81
5
0
0
0
L. fermentum
84
2
0
0
0
82
4
0
0
0
84
2
0
0
0
L. salivarius
84
2
0
0
0
84
2
0
0
0
83
3
0
0
0
A. odontolyticus
83
3
0
0
0
80
6
0
0
0
81
5
0
0
0
A. oris
55
27
4
0
0
40
40
6
0
0
55
30
1
0
0
V. parvula
56
28
1
1
0
50
29
7
0
0
54
29
3
0
0
R.dentocariosa
74
12
0
0
0
72
14
0
0
0
71
14
1
0
0
B. dentium
81
5
0
0
0
81
5
0
0
0
83
3
0
0
0
P. micra
20
28
24
14
0
24
26
28
8
0
29
19
29
8
1
Table 3 Gebit-status (DMFT /DMFT) en tandbederf (D /d) van de moeders, 4- tot 6-jaar-oude (C 4-6) en 12- tot 16-jaar-oude (C 12-16) kinderen
Variabele
Moeders
C4-6
C12-16
n = 86
n = 86
n = 86
DMFT /behendige (gemiddelde ± SD)
12,4 ± 5,3
9,0 ± 5,0
5.8 ± 4.1
d /d (gemiddelde ± SD)
5,5 ± 3,9
8,0 ± 5,1
4,5 ± 3,7
DMFT /behendige = 0 (n [%])
3 [3,5]
8 [9,3]
10 [11,6]
d /d = 0 (n [%])
10 [11,6]
9 [10.5]
12 [14,0]
Low
17 [19.8]
23 [26.7]
23 [26.7]
Medium Posters
31 [36,0]
25 [29,1]
32 [37,2]
hoge
38 [44,2]
38 [44,2]
31 [36,0]
Er was een niet-gelijkmatige verdeling van onderwerpen binnen de scores op het dambord schaal, met de meerderheid van bacteriële tellingen in de lagere bereiken van de schaal. De analyse toonde geen verband tussen de bacteriële uitslag en tandbederf voor een van de cariës-verwante bacteriën. Bovendien werden geen significante associaties aangetoond tussen de bacteriële scores en de D /d categorieën in de moeders of hun jongere en oudere kinderen behalve een tendens waargenomen geassocieerd met Streptococcus mutans
zoals getoond in Tabel 4 Verdeling 4.Table d /d ten opzichte van S. mutans scores in de moeders, 4- tot 6-jarige (C4-6) en 12 tot 16 jaar oud (C12-16) kinderen
S. mutans count
d /d
Moeders
C4-6
C12-16
Low
Medium
High
Low
Medium
High
Low
Medium
High
(≤1)
(2–5)
(>5)
(≤3)
(4–9)
(>9)
(≤1)
(2–5)
(>5)
1
17
29
31
20
18
30
23
30
27
2
0
2
6
3
4
8
0
2
4
3
0
0
1
0
3
0
-
-
-
The meerderheid van de studies met behulp van het dambord DNA-DNA hybridisatie techniek hebben zich gericht op het bestuderen van plaque bacteriële ecologie in relatie tot parodontitis [14-17]. Deze studies toonden een recht evenredig verband tussen het aantal bacteriën en parodontale pocket diepte. De huidige studie zou een relatie tussen de graven van supragingivale bacteriën en cariës ervaring (DMFT /DMFT) niet aantonen. Een relatie tussen cariës en cariës gerelateerde speeksel bacteriële tellingen (mutans streptococcen en lactobacillen) beoordeeld met behulp van CRT Bacteriën ® werd gevonden in dezelfde studie monster [9]. In de huidige studie, geen relatie tussen de gekwantificeerd in de samengevoegde plaque monsters bacteriën en cariës ervaring was gevonden. Dit komt goed overeen met de eerdere studie waarin een sterkere associatie tussen cariës en cariogene organismen per kweektechniek ten opzichte van het schaakbordpatroon werkwijze geanalyseerd werd gevonden [18]. Een aantal factoren met betrekking tot de kenmerken van tandplaque, de cariës ziekteproces en de keuze van de bemonsteringsmethode, kan de huidige bevindingen verklaren. De bacteriële interactie in de tandplaque kan een grotere bijdrage aan de ontwikkeling van cariës dan de specifieke telling van bepaalde cariogene soorten te maken. Daarnaast is de plaquette microbiële gemeenschap verschilt in verschillende stadia van plaque rijping (vroege plaque versus
volwassen plaque). Bovendien is de locatie van de bemonsteringsplaatsen en het aantal plaatsen is geselecteerd, kan de relatie beïnvloeden. De telling van plaque bacteriën kan ook worden beïnvloed door een aantal van cariës gerelateerde andere dan de werkelijke cariës factoren ervaren zoals de locatie /diepte (email versus
tandbeen), fase (beginnende versus
holten), niveau ( acute, chronische of gearresteerd), en de activiteit van de carieuze laesie (actieve versus
inactief). Voorts het schaakbordpatroon DNA-DNA hybridisatie techniek heeft een hoge afsnijgrens voor bacteriële kwantificatie maken de detectie van bacteriën in lage aantallen problemen, die verder kan worden gecompliceerd door kruisreacties [19]. Tenslotte zou de ongelijke verdeling van de vakken in het dambord scores met een meerderheid van lage bacteriële tellingen in deze studie verklaren het ontbreken van significante resultaten.
Naast de eerder genoemde nadelen, zijn er twee beperkingen van de bemonsteringsmethode gebruikt in de onderhavige studie. In tegenstelling met speeksel, is het moeilijk om de hoeveelheid bacteriën in een plaque standaardiseren monster. Normalisatie kan gemakkelijk worden bereikt met speeksel dat de hoeveelheid bacteriën in een 1 mL monster. Bovendien pooling supragingivale plaque in een reageerbuis kan moeilijkheden bij het lyseren alle bacteriële cellen aanwezig zijn in een zeer dichte bacteriesuspensie [20] te creëren. Om deze reden werd zware plaque bemonstering in de huidige studie geminimaliseerd door het nemen van slechts een voldoende zichtbaar hoeveelheid supragingivale plaque. Echter, de vraag of te weinig plaque werd verzameld niet worden uitgesloten.
In tegenstelling tot de huidige studie, Aas et al. toonde aan dat een hogere tellingen van specifieke bacteriesoorten werden geassocieerd met gezondheid, cariës initiatie, en cariës progressie met behulp van een reverse-capture essay [21]. Bovendien is de onderhavige studie geanalyseerd gepoolde plaquemonsters tegenstelling tot monsters van verschillende caries-gevoelige plaatsen in de mondholte. Bovendien kan de DMFT /DMFT index worden beschouwd als een ruwe methode om de individuele cariës beschrijven en brengt geen informaties cariësactiviteit. Een relatie tussen plaque bacteriële tellingen en tandbederf kan zijn verkregen, indien het onderzoek was op een site-specifieke niveau uitgevoerd en als-cariës gerelateerde parameters zoals diepte, het podium en de activiteit was rekening gehouden.
Conclusies
In tegenstelling tot de speekselmonsters en de methode stoel-side, interproximale gepoolde plaque monsters geanalyseerd met behulp van het "dambord DNA-DNA hybridisatie techniek" leverde geen significante relatie tussen de bacteriële tellingen en het tandbederf niet onthullen.
Notes
Anette Carlén, Guglielmo Campus en Peter Lingström eveneens bijgedragen aan dit werk.
verklaringen
Dankwoord
Wij danken Ann-Britt Lundberg (Department of Cariologie, Universiteit van Göteborg) en Susanne Blomqvist (Department of Oral Microbiologie en Immunologie, Universiteit van Gothenburg) voor hun technische ondersteuning. Met speciale dank aan Dr. Nadia Al-Hazmi, hoofd van gebitsgegevens en archiveren, Dr. Sahar Bukhary, hoofd van de Oral Biology Division, en Dr. Motaz Ghulman, vice-decaan van studentenzaken aan de faculteit van de tandheelkunde in EEA, Koninkrijk Saoedi-Arabië. De studie werd ondersteund door het Saoedische ministerie van Hoger Onderwijs.
Concurrerende belangen Ondernemingen De auteurs melden geen belangenconflicten. Bijdragen
Authors '
AM deelnamen aan de studie ontwerp, uitgevoerd verzamelen van gegevens en bemonstering , liep de "Checkerboard DNA-DNA-hybridisatie" analyse, uitgevoerd statistische analyse en was verantwoordelijk voor het manuscript schrijven. AC deel aan de studie ontwerp en begeleid het manuscript schrijven. GC bijgestaan in de statistische analyse en geholpen om het manuscript op te stellen. PL deel aan de studie ontwerp en begeleid het manuscript schrijven. Alle auteurs gelezen en goedgekeurd het definitieve manuscript.
