Abstracte achtergrond
Met het oog op de lange termijn prognose te voorspellen en te definiëren individuele behandeling modaliteiten voor patiënten met orale plaveiselcelcarcinoom (OSCC), zijn betrouwbaarder tumor biomarkers die nodig zijn tijdens de voorbehandeling opwerking periode. De huidige studie had als doel om meer betrouwbare immunohistochemische tumor prognostische markers in de voorbehandeling biopten van patiënten met OSCC identificeren.
Methods
Wij selecteerden 57 patiënten met primaire OSCC werden gediagnosticeerd door middel van histopathologische analyse. Voorbehandeling biopsie monsters werden immunohistochemisch geanalyseerd op de transcriptiefactor NANOG, kanker stamcel marker CD44 en mutant tumor eiwit 53 (mutant p53). De immunokleuring patronen werden beoordeeld op hun associatie met de klinisch-pathologische kenmerken van OSCC en de algehele overleving.
Resultaten
Late tumor stadium, positieve nek knooppunt metastase, en high-grade differentiatie werden in verband gebracht met een significant slechtere overlevingskansen. Verhoogde expressie van NANOG en mutant p53 positiviteit waren significant geassocieerd met klinisch laat stadium tumoren, positieve nek knooppunt metastase, histologisch high-grade tumoren, en een slechte algehele overleving tarieven. OSCCs met een sterke co-detectie van NANOG en mutant p53 werden gekoppeld aan significant lagere overlevingskansen dan die met zowel zwakke NANOG expressie en p53 negativiteit. Verhoogde expressie van CD44 had een beperkte correlatie met ongunstige klinische en pathologische kenmerken.
Conclusie
Hoge expressie van NANOG en positieve expressie van mutant p53 in de voorbehandeling biopten van patiënten met OSCC werden geassocieerd met slechte overlevingskansen en ongunstige clinicopathologische functies. Deze resultaten demonstreren dat NANOG, mutant p53 en CD44 kunnen worden gebruikt als immunohistochemische markers in de voorbehandeling van monsters OSCC. In het bijzonder moet de analyse voor co-expressie van NANOG en mutant p53 zeer beschikbaar worden gesteld als een instrument voor de prognose en het selecteren van de individuele behandelingen.
Sleutelwoorden
Oral plaveiselcelcarcinoom Tumormarkers Immunohistochemie NANOG Mutant p53 Achtergrond
orale plaveiselcelcarcinoom (OSCC) is een veel voorkomende kwaadaardige tumor in het hoofd-halsgebied; Patiënten met OSCC een 5-jaars overleving van minder dan 50%. De traditionele TNM staging en histopathologische grading systemen niet de artsen in staat om nauwkeurig te voorspellen een tumor agressiviteit of selecteer behandelingen op individuele basis [1]. Daarom is onderzoek gaande is effectiever en definitieve tumor prognostische merkers voor patiënten onderzocht met OSCC [2, 3]. Als de kanker stamcellen (CSC) hypothese is één van de belangrijkste theoretische verklaringen tumor-initiërende capaciteit en heterogeniteit van tumorcellen, hebben verschillende stamcel markers bestudeerd hun correlatie met klinische en pathologische tumor eigenschappen en lange termijn prognose [4 bepalen -8]. Ondernemingen de vroege transcriptiefactoren NANOG, OCT4 en SOX2, die een centrale rol in de handhaving van pluripotentie en zelfvernieuwing capaciteit in zowel embryonale en volwassen stamcellen spelen, zijn ook gerapporteerd als belangrijke factoren in de regulering CSCs van het hoofd en de nek plaveiselcelcarcinoom (HNSCC) [7, 8]. Hoge expressie van NANOG en OCT4 is positief gecorreleerd met histologisch hoogwaardig carcinomen en klinisch slechte prognose [7-10]. CD44 was de eerste CSC marker in vaste maligniteit [5] beschreven, en een hoge frequentie van CD44 positieve cellen in HNSCC sterk correleert met recidief tumor agressiviteit [11]. Tumor eiwit 53 (p53) wordt beschouwd als een traditionele tumor biomarker in plaveiselcelcarcinoom (SCC); echter zijn nut als voorspellende indicator blijft onduidelijk [1]. Wildtype p53-eiwit nauwelijks detecteerbaar in normale weefsels vanwege de korte halfwaardetijd van ongeveer 20 min. [12] De tumorsuppressorgen p53 gemuteerd in ongeveer 40-60% van de OSCC gevallen en deze mutant p53 speelt een belangrijke rol bij de tumorontwikkeling en progressie [12, 13]. Interessant, mutant p53 proteïne gewoonlijk detecteerbaar via immunohistochemie (IHC) [14, 15].
Om lange termijn prognose voorspellen en bepalen individuele behandelingsmogelijkheden voor patiënten met OSCC, betrouwbaarder tumor biomarkers (inclusief immunohistochemische prognostische merkers) nodig tijdens de voorbehandeling opwerken periode. Deze studie gericht op de expressie van verschillende tumormarkers via IHC, waaronder stamcellen en tumor-gerelateerde biomarkers onderzoeken betrouwbaardere prognostische markers in OSCC biopten voorafgaand verzameld behandeling van kanker te identificeren. In deze studie, observeerden we een positieve correlatie tussen de klinische en pathologische kenmerken van OSCCs en immunohistochemische expressiepatronen van NANOG, menselijke mutant p53 en CD44. Bovendien zijn de immunokleuring intensiteiten van deze merkereiwitten (NANOG en mutante p53) positief gecorreleerd met de totale overleving van patiënten met OSCC.
Werkwijzen Patiënten
Tussen 2004 en 2014 werden in totaal 92 patiënten gediagnosticeerd met OSCC bij de afdeling Mondziekten en Kaakchirurgie van Gyeongsang National University Hospital (GNUH) op basis van de histopathologische analyse van biopten voorafgaand aan de behandeling van kanker verzameld. Onder hen, 57 patiënten met primaire OSCC (exclusief patiënten met metastatische kanker en recidiverende, 36 mannen en 21 vrouwen) geselecteerd voor deze studie. De inclusiecriteria waren patiënten die ingestemd met deelname aan de studie afgerond ten minste 3 maanden follow-up na voorbehandeling biopsie ondergaan en over voldoende weefselvolume in de voorbehandeling biopt immunohistochemische kleuring uitgevoerd. De medische dossiers van de geselecteerde patiënten werden retrospectief geanalyseerd. Geïnformeerde toestemming voor het gebruik van hun weefselmonsters werd verkregen van alle patiënten, en deze studie werd goedgekeurd door de Ethische Commissie voor Klinisch Onderzoek bij GNUH (GNUH IRB-2012-09-004-002). IHC werd uitgevoerd op de voorbehandeling biopsie specimens van de 57 patiënten, die werden verkregen uit de periferie van de tumor marge met een minimale lengte van 5 mm en minimale breedte en diepte 2 mm, de verhouding tussen eiwit expressiepatronen en clinicopathologische tumor eigenschappen analyseren . De duur van de follow-up van de 57 patiënten varieerde 3-127 maanden, met een gemiddelde van 35,9 maanden. De patiënten werden klinisch geëvalueerd volgens de TNM classificatiesysteem door het Gemengd Comité American ontwikkeld on Cancer (7
e editie, 2010) voor tumorstadium en nek knooppunt metastase, en de algehele overleving tarieven werden ook bepaald. Biopsie monsters werden histopathologisch gesorteerd, en tumoren werden gecategoriseerd als goed, matig of slecht gedifferentieerde volgens de WHO classificatie van tumoren [16].
Immunohistochemische analyse van biopten
biopsie specimens in 10% neutraal gebufferde formaline werden vastgesteld gedurende 24 uur, ingebed in een blok paraffine, gesneden in 4-um secties en bevestigd op objectglaasjes SuperfrostPlus (Fisher Scientific, Rochester, NY, USA). De secties werden bij kamertemperatuur gedurende 12 uur gehandhaafd. Na hydratatie IHC voor NANOG, CD44 en mutante p53 werd uitgevoerd met een geautomatiseerde immunostainer (BenchMark XT, Ventana Medical System Inc., Tucson, AZ, USA), en visualisatie is verricht met de Ultraview DAB kit (Ventana Medical System Inc. ) volgens het protocol van de fabrikant. Voor immunokleuring van de drie markereiwitten, gebruikten we konijn monoklonale antilichamen (Abcam ™, Cambridge, UK). De verdunning en lotnummers van de primaire antilichamen zijn samengevat in Tabel 1. In het kort coupes werden ontdaan van paraffine middels EZ Prep oplossing; Vervolgens CC1 standaard (pH 8,4 buffer die Tris /boraat /EDTA) werd toegepast antigen retrieval voor 60 min bij 100 ° C. De schijfjes werden geïncubeerd bij 37 ° C gedurende 4 minuten met een DAB inhibitor (3% H 2O 2) te blokkeren endogene peroxidase activiteit. Vervolgens werden objectglaasjes geïncubeerd met het primaire antilichaam bij 37 ° C gedurende 32 min, gevolgd door incuberen met het secundaire antilichaam (HRP Universal multimeer) gedurende 8 minuten bij 37 ° C. Plaatjes werden behandeld met DAB + H 2O 2 substraat gedurende 8 minuten gevolgd door hematoxyline II en blauwen reagens bij 37 ° C gedurende nucleaire tegenkleuring. Voor negatieve controles alleen incubatie met het tweede antilichaam werd uitgevoerd worden, terwijl incubatie met een primair antilichaam, in coupes van dezelfde monsters onder dezelfde omstandigheden. Bovendien werden humane embryonale urineblaas en huidcarcinomen weefsels als positieve controles voor NANOG, CD44 en mutante p53, respectievelijk, volgens de fabrikant antilichaam recommendations.Table 1 Samenvatting van klinische en pathologische kenmerken van OSCCs en IHC expressiepatronen van NANOG, CD44 en mutant p53
NANOG
CD44
mutant p53
Total No.
+++
++
+&–
++
+
–
+
–
No. van cases
57
21
18
18
28
21
8
34
23
Tumor plaatsen
Gingiva
27
13
8
6
10
11
6
13
14
Cheek
4
0
3
1 kopen van 2 kopen van 2
0
3
1
Palate
10
4
3
3
9
1
0
10
0
Tong
9
0
2
7 kopen van 2
5 kopen van 2
4
5
FOM
7
4
2
1
5
2
0
4
3
Tumor stadium
I + II
24
6
4
14
10
9
5
11
13
III + IV
33
15
14
4
18
12
3
23
10
Neck knooppunt
N0
34
9
10
15
13
15
6
16
18
N+
23
12
8
3
15
6
2
18
5
Histo rang
Nou
22
4
4
14
9
9
4
6
16
Mod + Poor
35
17
14
4
19
12
4
28
7
Antibody
Verdunning
1: 250
1: 100
1: 200
Source (Lot No.)
Abcam ™ (ab109250)
Abcam ™ (ab51037)
Abcam ™ (ab32049)
Afkortingen: FOM
verdieping van mond, N0
negatieve nek knooppunt, N +
positief nek knooppunt Well
goed gedifferentieerd OSCC, Mod + Poor
matig en slecht gedifferentieerde OSCC
Tissue plakjes waren semi-kwantitatief geanalyseerd op antilichaam afzetting in cellulaire componenten door twee pathologen die werden verblind voor de studie-informatie. Gebaseerd op een eerder beschreven werkwijze met modificatie [10], positieve immunokleuring van NANOG en CD44 werd gescoord door de combinatie van intensiteit (0, negatieve kleuring, 1, zwakke kleuring, 2 matige kleuring en 3, sterke kleuring) en het percentage positief gekleurde tumorcellen in hoge krachtvelden (0, negatief, 1, & lt; 25%; 2, 25-50%, 3, 51-75% en 4, & gt; 75%). De som van de kleurintensiteit en percentage positieve tumorcel scores werd als volgt beoordeeld: +++ (sterk, 6-7); ++ (Matig, 4-5); + (Zwak, 2-3); en - (negatief, 0-1). De expressie patroon van mutant p53 werd ook gescoord met behulp van de combinatie van de kleurintensiteit en het percentage positieve tumorcellen en eenvoudig ingedeeld als + voor positief (som van de score meer dan 3) en - voor het negatief (2 of minder, negatieve expressie of zwak expressie in minder dan 25% van de cellen), in overeenstemming met eerdere rapporten [10, 17, 18]. Ten minste drie verschillende gebieden onder hoge vergroting (× 400) per objectglaasje werden geanalyseerd op immunokleuring intensiteit. Een samenvatting van de immunohistochemische kleuring resultaten zijn te vinden in tabel 1.
Statistische analyse en de algehele overleving analyse
De relatie tussen de expressie intensiteiten van NANOG, mutant p53 en CD44 in OSCC monsters werd statistisch geëvalueerd met behulp van de chi kwadraat-test. Ook de correlatie tussen de eiwitexpressie patronen en kenmerken van clinicopathologische OSCC, waaronder tumor stadium hals metastase en histologische graad, werd ook geanalyseerd met behulp van de chi-kwadraat-test. De totale overleving analyse werd uitgevoerd met behulp van de Kaplan-Meier-methode en de gegevens werden vergeleken met behulp van een log-rank test voor de 57 OSCC exemplaren. Eerst werd overall survival analyse uitgevoerd met betrekking tot de behandelingsmodaliteit en clinicopathologische tumor functies, waaronder tumor stadium hals metastase en histologische waardering (Fig. 5a-d). In de huidige studie werden de patiënten ingedeeld naar behandelingsmethoden in drie groepen: alleen chirurgie (Surg), chirurgie in combinatie met adjuvante radiotherapie (Surg + RT, met inbegrip van gelijktijdige chemoradiotherapie), en radiotherapie alleen (RT). De meeste patiënten in de RT-groep onderging palliatieve radiotherapie omdat ze weigerden een operatie ondergaan of hun tumoren waren onbruikbaar. Ten tweede, werd overleving analyse wat betreft de immunokleuring intensiteiten van NANOG, mutant p53 en CD44 in de voorbehandelingsvloeistof biopten (Fig. 5e-h). Univariate en multivariate survival analyses werden uitgevoerd met behulp van een Cox proportionele risico's regressie model. Alle analyses werden uitgevoerd met SPSS Statistics IBM software (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). De zaken werden gecensureerd op de datum van hetzij de dood van de patiënt of de laatste follow-up. De resultaten waren significant bij p Restaurant & lt beschouwd; 0,05, en deze verschillen werden aangeduid met een sterretje of verschillende letters.
Resultaten
Informatie van de patiënten geselecteerd
Een totaal van 57 patiënten met OSCC bestaande uit 36 mannen en 21 vrouwen werden opgenomen in deze studie. Leeftijd van de patiënt varieerde 17-90 jaar (gemiddeld, 65,4 ± 13,9 jaar). De site van OSCC bij de patiënten onder het tandvlees (27 gevallen), gehemelte (10 gevallen), tong (9 gevallen), vloer van de mond (7 gevallen), en wang (4 gevallen) (tabel 1). Patiënten werden verdeeld volgens behandelingsvorm als volgt: 15 patiënten in de Surg groep, 22 patiënten in de Surg + RT groep en 20 patiënten in de RT-groep. De gemiddelde follow-up periode bij alle patiënten was 35,9 maanden; Ondertussen, 24 patiënten (19, 4, en 1 patiënt in de RB Surg + RT en Surg groepen, respectievelijk) stierf na gemiddeld 18,4 maanden en 33 patiënten waren in gemiddeld follow-up van 48,7 maanden. In alle gevallen van chirurgie, werden tumor resectie marges ten minste 2 cm, en het gebied resectie werd bevestigd tumorvrij middels biopsie ingevroren secties.
Expressiepatronen van NANOG, mutant p53 en CD44 in OSCC voorbehandeling biopsie specimens
NANOG werd voornamelijk gedetecteerd in de kernen van cellen OSCC, maar NANOG expressie werd gedetecteerd in het cytoplasma van kankercellen. Mutant p53 werd gelokaliseerd in de kernen van kankercellen, terwijl CD44 op het celmembraan van OSCC cellen (Fig. 1) werd gedetecteerd. Het aantal positieve cellen en de expressie intensiteiten waren meestal groter in high-grade OSCCs (matig of slecht gedifferentieerde) dan in de low-grade tumoren (goed gedifferentieerd) (fig. 1 en 2). Van de 57 OSCC specimens, de expressie van NANOG was sterk in 21 monsters, matig 18 monsters en zwak of negatief in 18 monsters. Matig, zwak en negatieve expressie van CD44 werd waargenomen bij 28, 21 en 8 OSCC specimens, respectievelijk. Bovendien, 34 monsters waren positief voor mutant p53, terwijl 23 monsters waren negatief (Tabel 1). Fig. 1 Immunohistochemische kleuring van NANOG, mutant p53 en CD44 in OSCCs. een seriële secties van matig gedifferentieerde OSCC exemplaren vertonen matige expressie van NANOG en CD44, en positieve expressie van mutant p53. b Bij sterkere vergroting gebieden seriecoupes NANOG wordt voornamelijk aangetroffen in de kern, maar wordt ook tot expressie gebracht in het cytoplasma van bepaalde tumorcellen. Mutant p53 gedetecteerd in de kernen van tumorcellen, terwijl CD44 gelokaliseerd in de membranen van kankercellen. De pijlen geven de co-expressie plaatsen van NANOG, mutant p53 en CD44 in OSCCs. Schaal bar = 50 pm
Fig. 2 Immunokleuring goed (a & amp; b) en slecht (c) gesplitste OSCCs. In een seriecoupes, de negatieve uitdrukking van NANOG, mutant p53 en CD44 wordt gedetecteerd in een exemplaar van goed gedifferentieerd OSCC (* geeft kankerweefsel). b In een ander geval van goed gedifferentieerd OSCC, NANOG en mutante p53 bijna negatief, waargenomen bij minder dan 25% van positieve cellen dat CD44 zwak gedetecteerd in de kankercel membraan (pijlen). c In een slecht gedifferentieerde OSCC specimen, verhoogde expressie van NANOG, mutant p53 en CD44 wordt gedetecteerd. De pijlen geven co-lokalisatie van de merker drie eiwitten. Schaal bar = 50 pm
Directe relaties tussen de expressie intensiteiten van NANOG, mutant p53 en CD44 werden waargenomen (figuur 3a.). Tumoren met sterke expressie van NANOG ook vaak geëxposeerd positieve mutant p53 expressie (p
= 0,002) en verhoogde CD44 expressie (p Restaurant & lt; 0,001). Ook tumoren met positieve mutant p53 expressie weergegeven verhoogde expressie van CD44 (p Restaurant & lt; 0,001) (fig. 3a). In sommige gevallen, co-expressie van NANOG, mutant p53 en CD44 werd gedetecteerd in seriële secties van dezelfde OSCC monsters, wat aangeeft dat sommige kankercellen vertonen co-expressie van deze drie marker eiwitten. Interessant is dat de co-expressie van alle drie eiwitten vaker gezien bij matig tot slecht gedifferentieerde OSCCs (fig. 1b en 2c). Fig. 3 Correlatie van de expressie patronen van NANOG, mutant p53 en CD44 en de histologische graad van OSCCs. Tumoren met een verhoogde expressie van NANOG hebben een hogere frequentie van mutant p53 positiviteit (p
= 0,002) en verhoogde CD44 expressie (p
& lt; 0,001). Ook OSCCs met positieve expressie van mutant p53 vertonen hogere expressie van CD44 (p Restaurant & lt; 0,001). b Sterke of matige expressie van NANOG is significant gerelateerd aan histopathologisch hoogwaardige OSCCs (p Restaurant & lt; 0,001); echter zwak of negatieve uiting van NANOG correleert met goed gedifferentieerd carcinoom (p
= 0,018). Bovendien is positief mutant p53-expressie significant geassocieerd met high-grade carcinoom (p Restaurant & lt; 0,001). Op dezelfde manier wordt versterkt CD44 expressie geassocieerd met high-grade tumoren, maar er is geen statistische significantie werd waargenomen (p
= 0,058). Gegevens stellen het aantal gevallen met positieve expressie van elk eiwit, en een sterretje (*) geeft significante verschillen (p
& lt; 0,05). [Afkortingen: NANOG (++ /+++), sterke of matige expressie van NANOG; NANOG (+/-), zwak of negatieve uiting van NANOG; p53 (+), positieve uitdrukking van de mutant p53; p53 (-), negatief expressie van mutant p53; CD44 (++), meer dan matige expressie van CD44; CD44 (+), zwakke expressie van CD44; CD44 (-), negatief expressie van CD44; Nou, goed gedifferentieerde OSCCs; Mod + Arme, matig en slecht gedifferentieerde OSCCs]
Vereniging tussen clinicopathologische tumor kenmerken en de expressie patronen van NANOG, mutant p53 en CD44
sterke expressie van NANOG was significant gecorreleerd met histologisch hoogwaardige OSCCs (p
& lt; 0,001), terwijl zwakke of negatieve uitdrukking van NANOG voornamelijk voorgedaan in goed gedifferentieerde carcinomen (p
= 0,018). Ook werd positief mutant p53-expressie significant geassocieerd met high-grade carcinomen (p Restaurant & lt; 0,001) (Fig 3b.). Hoogwaardige tumors vertoonden verhoogde expressie van CD44, maar deze bevinding was niet statistisch significant (Fig. 3b). Bij de beoordeling van de relatie tussen eiwit expressie en tumor stadium, sterke en matige expressie van NANOG weergegeven direct associaties op met een laat stadium tumoren (stadium III en IV; p Restaurant & lt; 0,05), terwijl zwakke expressie van NANOG direct werd geassocieerd met een vroeg stadium tumoren (stadium I en II; p
= 0,018) (Fig 4a.). Positieve mutant p53 expressie werd frequent waargenomen in een laat stadium tumoren (p
= 0,049). Evenzo werd een hogere expressie van CD44 frequent waargenomen in laat stadium tumoren, maar het verschil was niet statistisch significant (Fig. 4a). Bij de analyse van de nek knooppunt metastase, werd zwakke of negatieve expressie van NANOG significant gerelateerd aan negatieve nek knooppunt metastase in OSCCs (p
= 0,005) (Fig. 4b). Evenzo werden negatieve expressie van mutant p53 (p
= 0,007) en zwakke expressie van CD44 (p
= 0,049) significant gerelateerd aan een hogere frequentie van negatieve hals metastasen (fig. 4b). Fig. 4 Correlatie van de tumor stadium of nek knooppunt metastase en de immunokleuring patronen van NANOG, mutant p53 en CD44. Een sterke of matige expressie van NANOG is rechtstreeks verbonden met een laat stadium tumoren, terwijl zwakke of negatieve uiting van NANOG direct gerelateerd is aan een vroeg stadium carcinoom (p Restaurant & lt; 0,05). Positieve expressie van mutant p53 is ook significant geassocieerd met een laat stadium tumoren (p
= 0,039). Hogere expressie van CD44 wordt vaak geassocieerd met een laat stadium tumoren, maar er is geen statistische significantie werd waargenomen (p Restaurant & gt; 0,05). b Tumoren met een zwakke of negatieve uitdrukking van NANOG (p
= 0,004), negatieve expressie van mutant p53 (p
= 0,006), en zwakke expressie van CD44 (p
= 0,049) een significant hogere frequentie negatieve nek knooppunt metastase. Hogere expressieniveaus van de drie eiwitten zijn niet geassocieerd met nek metastase (p
& gt; 0,05). Gegevens stellen het aantal gevallen met positieve expressie van elk eiwit, en een asterisk (*) betekent een significant verschil (p
& lt; 0,05). [Afkortingen: I + II, tumor stadium I & amp; II; III + IV, tumor stadium III & amp; IV; N0, negatieve nek knooppunt metastase; N +, positieve nek knooppunt metastase]
Survival analyse
De analyse van de totale overleving van patiënten tarieven in termen van clinicopathologische tumor functies bracht een aantal significante resultaten (fig. 5a-d). Patiënten met een laat stadium OSCC (stadium III en IV) had een statistisch significant lagere overlevingskans dan die met een vroeg stadium tumoren (fase I en II) (p Restaurant & lt; 0,05, figuur 5a.). Patiënten met OSCC en positieve nek knooppunt metastase toonde een significant slechtere overleving dan die met negatieve nek knooppunt metastase (p Restaurant & lt; 0,01, figuur 5b.). Bovendien, patiënten met een histopathologisch hoogwaardige OSCC had een slechtere prognose dan die met goed gedifferentieerde tumoren (p Restaurant & lt; 0,01, figuur 5c.). In termen van de behandeling modaliteit, de RT-groep vertoonde een significant slechtere overleving dan de Surg en Surg + RT groepen (p Restaurant & lt; 0,01, figuur 5d.). Fig. 5 De totale overleving van patiënten OSCC volgens clinicopathologische tumor kenmerken, behandeling modaliteit, en immunokleuring patronen van NANOG, mutant p53 en CD44. Patiënten met een laat stadium tumoren (stadium III & amp; IV) blijkt significant slechtere overleving (p Restaurant & lt; 0,05). b-d Een positieve associatie tussen de totale overleving van OSCC patiënten en histopathologische tumor rang, nek knooppunt metastase, en de behandeling modaliteit wordt waargenomen. De goed gedifferentieerde OSCC groep, negatieve nek knooppunt groep, en chirurgische behandeling groepstentoonstelling significant betere lange-termijn overleving tarieven dan de overeenkomstige tegengestelde groepen (p Restaurant & lt; 0,01). e Verbeterde expressie van NANOG wordt geassocieerd met een slechte overleving; in het bijzonder, patiënten met een sterke of matige expressie van NANOG vertonen significant lagere overlevingskansen dan die met een zwakke of negatieve NANOG expressie (p Restaurant & lt; 0,01). f Patiënten met mutant p53 (+) - tot expressie tumoren een lagere overleving dan die met tumoren negatief voor mutant p53 (-) (p
& lt; 0,01). g Verbeterde CD44 expressie heeft de neiging te correleren met een slechte overlevingskansen, maar er is geen statistische significantie werd gevonden (p Restaurant & gt; 0,05). h OSCCs met co-expressie van verhoogde NANOG en mutante p53 [NANOG (++) /p53 (+)] correleren met een significant lagere totale overleving dan die met zwakke NANOG en p53 negativiteit [NANOG (+/-) /p53 ( -)] (p
= 0,014). Met name waren er geen doden in de 12 gevallen van NANOG (+/-) /p53 (-) tijdens de follow-up periode. Verschillende letters geven significante verschillen tussen de groepen (p
& lt; 0,05)
Bovendien overlevingsanalyse wat de immunokleuring patronen van NANOG, mutant p53 en CD44 toonde statistisch significante verschillen (figuren 5e-h.). De expressie intensiteit van NANOG was rechtstreeks verbonden met de algehele overleving; patiënten met een sterke NANOG uitdrukken tumoren [NANOG (+++)] had slechtere overlevingskansen dan die met een zwakke of negatieve NANOG uitdrukken tumoren [NANOG (+/-)] (p
. & lt; 0,01, Fig 5e) . Ook een positieve associatie tussen mutant p53 expressie en de algehele overleving werd waargenomen; in het bijzonder, patiënten met p53-positieve OSCC hadden lagere overlevingskansen dan die met p53-negatieve OSCC (p
. & lt; 0,01, figuur 5F). Verbeterde CD44 expressie werd geassocieerd met een slechte overlevingskansen, maar deze bevinding was niet statistisch significant (p Restaurant & gt; 0,05, figuur 5g.). Interessant patiënten met co-expressie van verhoogde NANOG (matige tot sterke expressie) en p53 positiviteit [NANOG (++) /p53 (+)] was significant korter overlevingskansen dan patiënten met zwakke NANOG en negatieve p53 [NANOG (+ /-) /p53 (-)] (p = 0,014
, figuur 5h).. Van belang, een van de 28 patiënten met NANOG (++) /p53 (+) tumoren, 17 patiënten overleden, terwijl er waren geen doden in de 12 patiënten met NANOG (+/-) /p53 (-) laesies tijdens de volgende up periode (afb. 5h). Univariate Cox proportional hazards regressie-analyse toonde aan dat de nek knooppunt metastase, histologisch high-grade tumor, en late tumor stadium werden in verband gebracht met een significant slechtere prognose. Bovendien was verhoogde expressie van NANOG en mutant p53, met name co-detectie van deze twee eiwitten, in het OSCC voorbehandeling biopsie specimens rechtstreeks bij lagere overleving (tabel 2). Ook de multivariate Cox proportional hazards regressiemodel aangetoond dat hals metastase, histologische graad, en immunohistochemische expressiepatroon van NANOG rechtstreeks verband met de totale overleving van patiënten met OSCC (tabel 3) .table 2 univariate Cox proportional hazards regressieanalyse verhouding tot de totale overleving van de 57 OSCC patiënten
totale overleving
Variable
P
waarde
Hazard ratio
95% CI
Neck knooppunt
& lt; 0,001 *
6,795
2,745-16,817
histologische graad
0.003 *
12,271
2,336-64,465
Tumor stage
0.009*
3.718
1.385–9.980
NANOG
0.019*
4.494
1.275–15.839
Mutant p53
0.016*
3.747
1.279–10.977
CD44
0.263
2.315
0.532–10.097
NANOG + P53
0.028 *
0,741
0,217-2,531
Afkorting: BI
betrouwbaarheidsinterval
* Statistisch significant ( p Restaurant & lt; 0,05)
Tabel 3 Multivariate Cox proportional hazards regressie-analyse met betrekking tot de totale overleving van de 57 OSCC patiënten
totale overleving
Variable
P
waarde
Hazard ratio
95% Cl
Neck knooppunt
0.004 *
6,549
1,800-23,822
histologische graad
0.012 *
3,598
1,330-9,937
Tumor stage
0.254
3.546
0.403–31.225
NANOG
0.035*
4.319
3.351–27.476
Mutant p53
0.180
1.195
1. 713-5,754
Afkorting: BI
betrouwbaarheidsinterval
* Statistisch significant (p Restaurant & lt; 0,05)
Discussie
Sinds de opkomst van de CSC hypothese sleutel theorie progressie van kanker leggen, de expressiepatronen van verscheidene pluripotente stamcel markers en transcriptiefactoren werden onderzocht bij verschillende kanker weefsels of cellijnen hun correlatie met de lange termijn prognose te bepalen. In de onderhavige studie werden de vroege transcriptiefactor NANOG, de CSC marker CD44 en humaan mutant p53 immunohistochemisch onderzocht in de voorbehandeling biopten van 57 patiënten met OSCC een verband hun expressiepatronen met clinicopathologische tumor eigenschappen en prognose voor de patiënt te identificeren. De resultaten van deze studie toonden dat de immunohistochemische expressiepatronen van NANOG en mutante p53 rechtstreeks waren geassocieerd met overlevingscijfers en clinicopathologische functies, waaronder tumor stadium hals metastase en histologische graad. Patiënten met OSCC wie de tumoren hadden hogere expressie van NANOG en mutant p53 had minder gunstige clinicopathologische functies en lagere overlevingskansen. Verhoogde expressie van CD44 werd ook geassocieerd met een slechte prognose en lagere overleving, maar geen statistische significantie werd waargenomen. Onlangs heeft een gemeenschappelijke modaliteit voor het voorspellen kankerprognose de meting van intra-tumor genetische heterogeniteit [19, 20] is. Heterogeniteit geeft aan dat tumoren zijn samengesteld uit meerdere klonale subpopulaties van verschillende karakteristieke cellen en dus histologisch onderzoek blijkt vaak verschillen in celmorfologie en eigenschappen, onder cellen in hetzelfde specimen kanker [20]. Verbeterde intra-tumor heterogeniteit werd direct gecorreleerd met een verhoogde sterfte; in het bijzonder, een hoge heterogeniteit en p53 mutatie positiviteit werden geassocieerd met een hogere sterfte in een grote cohort studie van hoofd en hals kanker [19]. In deze studie seriële secties van tumor specimens vaak bleek de co-expressie van NANOG, mutant p53 en CD44, die werd geassocieerd met een slechtere prognose. De co-detectie van deze verschillende markereiwitten in dezelfde kankercel of tumor hetzelfde gebied kan hoge tumor heterogeniteit vertegenwoordigen.
NANOG is een vroege transcriptiefactor en pluripotente marker die de zelfvernieuwing van embryonale cellen en mesenchymale stamcellen [8 handhaaft ]. Uit recente studies is gebleken dat NANOG sterk gedetecteerd in slecht gedifferentieerde carcinomen en een laat stadium tumoren [8-10]. Alle auteurs gelezen en goedgekeurd het definitieve manuscript.
