Abstracte achtergrond
Patiënten met type 2 diabetes mellitus (T2DM) zijn toegenomen ernst van parodontitis. Toll-like receptor (TLR) 4, de co-receptoren CD14 en MD-2, en adapter MyD88 spelen een centrale rol in lipopolysaccharide (LPS) -triggered weefsel ontsteking en parodontitis. Deze studie onderzocht de effecten van T2DM en parodontitis op TLR4, CD14, MD-2 en MyD88 mRNA expressie in chirurgisch verwijderd periodontale weefsels.
Methods
Periodontal weefselmonsters werden verzameld van 14 patiënten zonder periodontitis en T2DM (groep 1) , 15 patiënten met parodontitis alleen (groep 2) en 7 patiënten met zowel parodontitis en T2DM (groep 3). Het mRNA van TLR4, CD14, MD-2 en MyD88 werd gekwantificeerd middels real-time PCR en vergeleken tussen de groepen.
Resultaten
Statistische analyse toonde dat periodontale expressie van CD14 mRNA was significant verminderd in de groepen 1, 2 en 3 (p
= 0,02), terwijl de mRNA expressie van TLR4, MD-2 en MyD88 was niet significant verschillend tussen de groepen. Bovendien wanneer patiënten in Groepen 1 en 2 werden gecombineerd (n = 22), was de CD14 mRNA expressie significant lager dan bij patiënten van groep 1 (p
= 0,04).
Conclusies
CD14 mRNA was downgereguleerd in patiënten met niet parodontitis of T2DM patiënten met parodontitis staan patiënten met beide ziekten suggereert dat CD14 mRNA-expressie is geassocieerd met een positieve respons gastheer of aan een negatieve feedback regulatie.
Sleutelwoorden
periodontitis CD14 TLR4 diabetes Genexpressie Achtergrond
Gram-negatieve bacteriën zijn belangrijke pathogenen betrokken bij periodontitis, die wordt gekenmerkt door inflammatoire weefselvernietiging van tandondersteunende structuur [1]. Studies hebben die host immune ontstekingsreactie vastgesteld Gramnegatieve bacterie afgeleid lipopolysaccharide (LPS) speelt een centrale rol in de ontwikkeling en progressie van periodontitis [2]. Als een belangrijke doorbraak in parodontale onderzoek, Beutler en zijn collega's ontdekten in 1998 dat toll-like receptor (TLR) 4 is LPS receptor en bemiddelt LPS-getriggerd signaaloverdrachten [3]. -LPS geactiveerd TLR4 activatie leidt tot een verhoogde uitscheiding van pro-inflammatoire cytokinen, mediatoren en matrix metalloproteinases (MMP's) uit verschillende cellen zoals monocyten, macrofagen, neutrofielen, lymfocyten, en gingivale fibroblasten die bijdragen periodontale ontsteking en weefselvernietiging [4]. Naast TLR4, hebben studies goed gedocumenteerd dat TLR4 co-receptoren CD14 en MD-2 en TLR4 adapter eiwitten zoals myeloïde differentiatie primaire respons-gen 88 (MyD88) is het van wezenlijk betrokken bij LPS-geactiveerd inflammatoire signalering [5-8 ].
Het is algemeen bekend dat parodontitis komt vaker en ernstiger bij patiënten met een slecht gereguleerde type 2 diabetes mellitus (T2DM) dan niet-diabetische individuen [9-11]. Bevindingen uit mechanistische studies geven aan dat slecht gereguleerde T2DM leidt tot een hyperinflammatory gastheerrespons periodontale microbiota en belemmert ook de resolutie van ontsteking en reparatie, wat leidt tot versnelde parodontitis [10]. In lijn met deze begrippen, verhoogde parodontale expressie van interleukine (IL) -6 en MMP-8 over patiënten met parodontitis noch noch T2DM patiënten met parodontitis alleen en patiënten met beide ziekten werd gemeld door onze fractie [12-14]. Verder hebben we ook aangetoond door onze in vitro studies die
hoog glucosegehalte verhoogt LPS geactiveerd expressie van ontstekingsbevorderende genen in macrofagen en gingivale fibroblasten [15-19], wat aangeeft dat T2DM-geassocieerde factoren zoals hyperglycemie verbeteren periodontale ontsteking en weefsel vernietiging en derhalve parodontitis verergeren.
in de studies te begrijpen hoe T2DM verhoogt gastheer respons op LPS, is aangetoond dat T2DM verhoogt de expressie van TLR4 in gastheercellen zoals monocyten [20, 21]. Aangezien TLR4 is de receptor voor LPS is het aannemelijk dat opregulatie van TLR4-expressie op het celoppervlak maakt meer bindingsplaatsen voor LPS en verhoogt celrespons op LPS uitdaging. Daarom is het belangrijk om te bepalen of T2DM verhoogt gastheer respons op LPS door verhogen van de expressie van TLR4 en TLR4-geassocieerde eiwitten in periodontale weefsels. Het effect van periodontale T2DM op expressie van TLR4 en TLR4-geassocieerde eiwitten bij patiënten met periodontitis is niet goed vastgesteld.
In deze studie hebben we de hypothese dat de expressie van TLR4 of TLR4-geassocieerde moleculen zoals CD14, MD -2 en MyD88 worden gereguleerd door parodontitis en T2DM. Om onze hypothese te testen hebben we verzameld periodontale weefsels van patiënten met en zonder parodontitis en T2DM ten tijde van noodzakelijke operaties en bepaalde de mRNA expressie van TLR4, CD14, MD-2 en MyD88 met behulp van kwantitatieve real-time polymerase-kettingreactie (PCR).
methoden
patiënten
Zesendertig patiënten werden geselecteerd uit de Post-doctorale Parodontologie Program in het College van Dental Medicine aan de Medische Universiteit van Zuid-Carolina, Charleston, South Carolina, bedoelde bevolking. Gerekruteerde patiënten opgenomen 14 personen die niet over parodontitis en T2DM (groep 1), 15 patiënten met parodontitis (groep 2) en 7 patiënten met beide ziekten (groep 3). De patiënten in groep 1 die niet periodontale ziekte gerelateerde operaties zoals kroon verlengen en extracties vereist dienden als controle. Alle verzamelde weefsels waren parodontale weefsels genomen als kragen uit de gingivarand zowel epitheel en bindweefsel bevatten Ondernemingen De patiënten uit groep 2 en groep 3 met de volgende diagnostische criteria voor parodontitis [12-14]. Een parodontale indringende diepte (PD) van ≥ 5 mm op twee of meer tanden of klinische aanhechtingsniveau (AL) van ≥ 5 mm op twee of meer tanden. De uitsluitingscriteria waren als volgt: Patiënten die zwanger zijn of onzeker over zwangerschap staat waren, serumcreatinine ≥ 1,6 mg /dL, abnormale leverfunctie, hemoglobinopathie (sikkelcel trait /hemolytische anemie) interfereren met hemoglobine A1c (HbA1c) monitoring, agressieve parodontitis, bloedplaatjes en stollingsstoornissen, en /of onwil om de informed consent formulier te ondertekenen of voer de studie. Een mondeling examen met inbegrip van parodontale PD en klinische AL werd uitgevoerd. Zes sites (mesio-buccale, buccale, disto-buccale, disto-lingual, meertalige en mesio-lingual) werden onderzocht voor elke tand, met uitzondering van de derde molaren. Sonderingsdiepte werd gedefinieerd als de afstand van het vrije gingivarand onderaan de sulcus terwijl gingivale recessie is gedefinieerd als de afstand tot de kruising cementoenamel de vrije tandvleesrand. Klinische AL werd berekend als de som van de PD en tandvlees recessie. De patiënten in groep 2 en 3 hadden periodontale chirurgie voor de behandeling van periodontitis en de periodontale weefsels, waaronder epitheel en bindweefsel werden verwijderd uit sites op basis van de grootste PD en /of AL. De PD en AL die in dit onderzoek waren gerelateerd aan de operatie sites. De HbA1c test werd uitgevoerd bij alle patiënten uitgevoerd om hun glycemische status van documenteren. T2DM was eerder voor alle patiënten in groep 3. Alle patiënten voorzien geïnformeerde toestemming voor specimeninzameling gediagnosticeerd. De studie protocol en toestemming formulieren werden goedgekeurd door de Medische Universiteit van Institutional Review Board South Carolina (erkenningsnummer: Pro00010000).
Isolatie van RNA en RNA reverse transcriptie (RT)
Totaal RNA werd geïsoleerd uit parodontale weefselmonsters met behulp de RNeasy minikit (Qiagen, Santa Clarita, CA). De eerste streng complementair DNA (cDNA) werd gesynthetiseerd met de iScript ™ cDNA synthese kit (Bio-Rad, Hercules, CA) volgens de instructies van de fabrikant. Het reactiemengsel werd gefietst gedurende 5 minuten bij 25 ° C, 30 minuten bij 42 ° C en 5 minuten bij 85 ° C met een PTC-200 DNA Engine (MJ Research, Waltham, MA).
Kwantitatieve real-time PCR
de RT-reactiemengsel uit de bovenstaande experimenten werd dan onderworpen aan real-time PCR-amplificatie. The Beacon ontwerpsoftware (Premier Biosoft International, Palo Alto, CA) werd gebruikt voor het ontwerpen van primers (Tabel 1). Primers werden gesynthetiseerd door Integrated DNA Technologies, Inc. (Coralville, IA). PCR werd uitgevoerd in duplo met gebruikmaking van een 25 ui reactiemengsel dat 1,5 pl RT reactiemengsel, 0,2 uM van beide primers en 12,5 pl iQ ™ SYBR Green Supermix (Bio-Rad) bevatte. De PCR reactie werd uitgevoerd met de iCycler ™ Real-Time Detection System (Bio-Rad). Veertig cycli bestaande uit denaturatie (95 ° C gedurende 10 s) en annealing /uitbreiding (56 ° C gedurende 45 s) werden uitgevoerd. Een smelt-curve experiment werd vervolgens uitgevoerd (55 ° C gedurende 1 min en vervolgens de temperatuur verhoogd met 0,5 ° C elke 10 s) de primer dimeren detecteren. Gegevens werden geanalyseerd met de SmartCycler II software. De gemiddelde drempelcyclus (Ct
) fluorescente eenheden werd gebruikt voor analyse. Kwantificering werd berekend met de Ct Website van doelsignaal opzichte van die van glyceraldehyde-3-fosfaatdehydrogenase (GAPDH) signaal in dezelfde RNA sample.Table 1 De primer sequenties voor real-time PCR
Genes
5 'Primer sequentie
3' Primer sequence
CD14
CCGCTGCCTCTGGAAG
GGCGAGTGTGCTTGGG
TLR4
GTCCTCAGTGTGCTTGTAG
ATCCTGGCTTGAGTAGATAAC
MD-2
CACCATGAATCTTCCAAAGC
CTTGAAGGAGAATGATATTGTTG
MyD88
CGGATGGTGGTGGTTGTCTC
CGCTTCTGATGGGCACCT
GAPDH
CTGAGTACGTCGTGGAGTC
AAATGAGCCCCAGCCTTC
Statistische analyse
De leeftijd, geslacht en ras van de deelnemers aan de studie worden gepresenteerd als tellingen en de continue variabelen worden gepresenteerd als medianen. De GraphPad Instat 3 software (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) werd gebruikt voor statistische analyse. Parametrische analyse testen op verschillen in continue variabelen tussen groepen groter dan twee zijn uitgevoerd met de Kruskal-Wallis procedure. Parametrische analyse testen eventuele verschillen variabelen tussen twee groepen werd uitgevoerd met de Mann-Whitney procedure. Een waarde van p
& lt; 0,05 werd significant geacht. De correlatie analyse van de relatie tussen CD14 mRNA expressie en PD, AL of HbA1c werd geëvalueerd door de methode van Pearson. Onze vorige studies hebben aangetoond dat de steekproefomvang van 7 of meer voldoende kracht om het verschil van parodontale mRNA expressie van IL-6 en MMP-8 in controlepersonen die geen parodontitis en T2DM patiënten met parodontitis staan patiënten hadden detecteren zowel parodontitis en diabetes [13, 14].
Resultaten
Studiepopulatie
De klinische gegevens van de patiënt leeftijd, geslacht, ras, rookgedrag, HbA1c, parodontale PD, en AL werden gepresenteerd in tabel 2.Table 2 Patiënten en parodontale aandoeningen in drie groepen
Groep 1: Patiënten zonder diabetes en parodontitis
Groep 2: Patiënten met alleen parodontitis
Groep 3: Patiënten met zowel parodontitis en diabetes
Patient aantal
14
15
7
Leeftijd
58 ± 11
56 ± 11
63 ± 6
Geslacht (man /vrouw)
03/11
10 /5
7/0
Race en etniciteit
Kaukasiërs /Afro-Amerikanen (nonhispanic)
6,0 (02/12)
2,8 (04/11)
0,17 (1/6) *
Rokersstatus (rokers /niet-rokers )
0,4 (4/10) +
1.5 (9/6)
2,5 (5/2)
HbA1c (% )
5,81 ± 0.55
5.60 ± 0.56
8.19 ± 1.24 *
PD (mm)
2,45 ± 0.86 +
4.20 ± 2.00
4.80 ± 2.32
AL (mm)
2,48 ± 0,89 +
5.03 ± 2.48
5.24 ± 2.39
De gegevens zijn gemiddelde ± SD. * P
& lt; 0,05 versus groep 1 of groep 2; + P
& lt; 0,05 versus groep 2 of groep 3. PD
sonderingsdiepte, AL
bevestigingsniveau
Leeftijd - De leeftijd van de patiënten in groepen 1, 2 en 3 varieerde 42-79, 40-79, en 52 tot 71 met een gemiddelde ± standaardafwijking van 58 ± 11 56 ± 11 en 63 ± 6 resp. Geen significant verschil tussen de groepen werd gevonden
Gender -. De verhoudingen van mannelijke /vrouwelijke geslacht in de groepen 1, 2, en 3 waren 3,7 (03/11), 2 (10/5) en 7 (7/0) respectievelijk. Geen significant verschil gevonden tussen de groepen
Race -. De verhoudingen van blanken versus Afro-Amerikanen in de groepen 1, 2, en 3 waren 6,0 (02/12), 2,8 (4/11), en en 0,17 (1 /6), respectievelijk. Statistische analyse gaf aan dat Afrikaanse Amerikanen in groep 3 waren significant meer dan in groep 1 of groep 2, wat overeenkomt met eerdere verslagen dat de Afrikaanse Amerikanen hebben een hoog risico op T2DM en periodontitis [22, 23].
Roken status - De roker /niet-roker verhoudingen in groepen 1, 2 en 3 waren 0,4 (4/10), 1,5 (9/6) en 2,5 (5/2), respectievelijk. Statistische analyse gaf aan dat rokers in groep 2 en groep 3 waren significant meer dan in groep 1, die in overeenstemming met eerdere verslagen dat roken wordt geassocieerd met een verhoogd risico op parodontitis [24]
parodontitis -. De PD groepen 1, 2 en 3 was 2,45 ± 0,86, respectievelijk 4,20 ± 2,00 en 4,80 ± 2,32 mm. De AL in groepen 1, 2 en 3 was 2,48 ± 0,89, respectievelijk 5,03 ± 2,48 en 5,24 ± 2,39 mm. Een belangrijk verschil van PD en AL gevonden tussen groep 1 en groep 2 of groep 3, maar geen significant verschil PD en AL gevonden tussen groep 2 en groep 3
Diabetes - Patiënten in groep 3 rapporteerden T2DM. De gemiddelde HbA1c in 3 groepen varieerde van 7,0% tot 10,7% met een gemiddelde ± standaardafwijking van 8,19 ± 1,24% dat significant hoger is dan 5,81% ± 0,55 en 5,60 ± 0,56%, respectievelijk in groep 1 en groep 2 Vier van de zeven patiënten werden alleen of in combinatie met Glucotrol (Glipizide, Pfizer) of NPH insuline (Humulin, Eli Lily and Company) voorgeschreven metformine. Een patiënt was voorgeschreven insuline glargine (Lantus, Sanofi-Aventis), één patiënt werd voorgeschreven insuline aspart (NovoLog, Novo Nordisk), en één patiënt maakte geen melding van het nemen van medicatie voor diabetes.
Periodontal expressie van CD14, TLR4, MD -2 en MyD88 in drie groepen Ondernemingen De expressie van CD14, TLR4, MD-2, en MyD88 in operatief verwijderd periodontale weefsels werd succesvol gekwantificeerd middels real-time PCR. Zoals getoond in tabel 3, CD14 expressie was hoogst onder vier genen bij patiënten zonder parodontitis en T2DM (groep 1). De statistische analyse met parametrische Kruskal-Wallis test toonde aan dat de expressie van parodontale TLR4, MD-2 en MyD88 geen significant verschil tussen de 3 groepen. Interessant is dat CD14 expressie significant neerwaarts gereguleerd worden in groepen 1, 2 en 3 (p = 0,020
). We vergeleken ook de CD14 expressie tussen de twee groepen. Resultaten bleek dat, hoewel CD14 expressie in groep 2 (patiënten met alleen parodontitis) lager dan in groep 1 (zowel patiënten zonder parodontitis en T2DM), het verschil niet statistisch significant. Wanneer de patiënten in groep 2 werden gecombineerd met groep 3 (patiënten met zowel parodontitis en T2DM), was de CD14 expressie significant lager dan in groep 1 (p
= 0,04) (Tabel 4). Bovendien vonden we dat CD14 expressie in groep 3 is significant lager dan in groep 1 (p
= 0,003), wat aangeeft dat periodontale CD14 expressie in patiënten met zowel parodontitis en T2DM significant lager dan bij patiënten zonder parodontitis en T2DM .table 3 parodontale expressie van CD14, TLR4, MD-2 en MyD88 in drie groepen
Groep 1 (n
= 14)
Groep 2 (n
= 15)
Groep 3 (n
= 7)
parametrische analyses (Kruskal-Wallis test) voor eventuele verschillen in groepen
Zonder zowel parodontitis en diabetes
Met parodontitis, zonder diabetes
Met zowel parodontitis en diabetes
Test statistiek
P
-value
CD14
1.92
1.39
0.68
7.81
0.02
(0.78, 11.88)
(0.30, 17.80)
(0,17, 1,66)
TLR4
0.74
0,58
0.74
0.97
0.62
(0,28, 5,25)
(0.15, 18.31)
(0,14, 1,25)
MD-2
0.46
0.35
0,50
1.49
0.48
(0,21, 2,96)
(0,04, 5,76)
(0,19, 1,66)
MyD88
0.81
0.61
0.71
3.32
0.19
(0.50, 1.21)
(0,22, 2,19)
(0,45, 1,01)
gepresenteerde gegevens zijn medianen (minimum, maximum)
Tabel 4 Het verschil van CD14 expressie tussen patiënten in groep 1 en gecombineerd patiënten in groep 2 en groep 3
groep 1 (patiënten zonder parodontitis)
Combinatie van groep 2 (patiënten met parodontitis alleen) en groep 3 (patiënten met zowel parodontitis en diabetes )
Tweezijdige
P
waarde
Patient aantal
14
22
0.04
Median (minimum, maximum)
1,92 (0,78, 11,88)
1,22 (0,17, 17,80)
gepresenteerde gegevens zijn medianen (minimum, maximum)
De relatie tussen CD14 mRNA expressie en PD, AL of HbA1c Ondernemingen De relatie tussen CD14 mRNA expressie en PD, AL of HbA1c werd statistisch geanalyseerd en er geen significante correlaties werden gevonden tussen CD14 mRNA expressie en deze klinische parameters (Tabel 5) .table 5 De relatie tussen CD14 mRNA expressie en PD, AL of HbA1c
PD
AL
HbA1c
CD14 mRNA expression
n
36
36
36
r
-0.1271
-0.1862
-0.1967
p
0,4602
0,2770
0,2500
PD
Probing diepte, AL
Attachment niveau
discussie
Onze huidige studie toonde aan dat CD14 mRNA was significant verminderd in patiënten met niet parodontitis of T2DM patiënten met periodontitis alleen, en patiënten met zowel periodontitis en T2DM suggereert dat periodontitis en T2DM regelt CD14 negatief genexpressie in periodontale weefsels. Onze bevindingen komen overeen met die van Jin et al., Die meldden dat het CD14 eiwit niveau biopsie gingivale weefsel van patiënten met parodontitis was significant lager dan bij personen zonder parodontitis [25]. Zij rapporteerden ook dat het niveau van uitgescheiden CD14 in creviculaire vloeistof (GCF) lager bij patiënten met diepe zakken dan bij patiënten met minder diepe zakken [26] was. Sinds hun studies waren gericht op CD14 eiwitgehalte in parodontale weefsel, blijft het onduidelijk of de verminderde CD14 eiwit niveau is het resultaat van downregulatie van CD14 mRNA expressie die de betrokkenheid van transcriptionele regulatie van CD14 expressie kan suggereren. Onze huidige studie voorziet het nieuwe inzicht in de bij de regulatie van CD14 expressie mechanismen.
In de huidige studie, gebruikten we real-time PCR-techniek met het mRNA expressieniveau van TLR4, CD14, MD-2 en MyD88 kwantificeren in parodontale weefsel. Het is bekend dat regulering van cytokine-expressie op mRNA niveau via nuclear factor-kappa B (NFKB) gemedieerde transcriptionele activatie een cruciale rol bij periodontitis [27] speelt. Daarom studies die genexpressie op het mRNA-niveaus zijn belangrijk voor het begrijpen van de moleculaire mechanismen van de pathogenese van parodontitis. Aangezien real-time PCR is een volledig kwantitatieve methode en goed gecontroleerd door normalisatie naar het huishoud-gen, de gegevens zijn waardevol voor evaluatie van genexpressie. Naast real-time PCR kwantificering van genexpressie op het mRNA-niveau, immunohistochemie en immunofluorescentie worden ook vaak toegepast in de studie van gen-expressie op eiwitniveau. Hoewel deze werkwijzen hebben voordeel bij de karakterisatie van weefsel of celspecifieke genexpressie op het eiwitniveau, ze hebben ook nadelen als semi-kwantitatieve benadering [28] die kunnen leiden tot onderling studie variabiliteit. Bijvoorbeeld, door immunohistochemie, een studie toonde aan dat periodontitis verlaagde TLR4 [29] maar andere studie toonde aan dat parodontitis verhoogde TLR4 niveau in de gingivale epitheel [30].
CD14 is gekarakteriseerd als LPS receptor in 1990 [31], bijna tien jaar vóór de ontdekking van TLR4. Terwijl TLR4 een transmembraandomein LPS-geactiveerd signaaltransductie, CD14 ontbreekt het transmembraandomein en kan niet LPS signalering verzenden. CD14 verankerd met glycosylfosfatidylinositol (GPI) op het celoppervlak tot expressie gebracht als een 55-kDa glycoproteïne [32]. Naast de membraangebonden vorm (mCD14), CD14 wordt ook uitgedrukt als een oplosbare vorm (sCD14) van uitscheiding van CD14 zonder koppeling aan de GPI anker of afstoten of afsplitsing van mCD14 [33]. De belangrijkste functie van CD14 dient als een eerste receptor voor LPS en de binding van LPS vergemakkelijken TLR4 /MD-2 complex [34]. Bovendien, CD14 herkent ook andere pathogeen-geassocieerde moleculaire patronen zoals lipoteichoïnezuur [35].
Eerdere studies hebben aangetoond dat CD14 heeft twee rollen in reactie op Gram-negatieve bacteriën [36]. Voor voorbeelden, een studie toonde dat neutralisatie van CD14 voorkomen LPS geïnduceerde pro-inflammatoire reactie ongecontroleerd en daaropvolgende dood gastheer [37], onthullen een pro-inflammatoire effect van CD14. Een andere studie meldde echter dat wanneer CD14 is geblokkeerd, dieren geïnfecteerd met Shigella, een diarree pathogeen, vertoonde een 50-voudige toename in bacteriële invasie en ernstiger weefselbeschadiging tegen dieren zonder CD14 blokkeren [38] wijst op een anti-inflammatoir effect van CD14. Deze studies suggereren dat terwijl downregulatie van parodontale CD14 expressie het stimulerende effect van LPS aan proinflammatoire signalering vermindert, kan het ook beïnvloeden de aangeboren immuniteit tegen LPS-onafhankelijke pathogenen en verhoogt weefselontsteking.
Vorige studies hebben ook aangetoond de dubbele rol van CD14 in T2DM. Enerzijds werd gemeld dat CD14-expressie geassocieerd is met T2DM en gecorreleerd met serumconcentraties van C-reactief proteïne [39]; Anderzijds, werd gemeld dat injectie van recombinant humaan oplosbaar CD14 diabetische muizen verhoogde insulinewerking [40] en de muizen met CD14-deficiëntie weergegeven significante glucose-intolerantie [41], hetgeen een gunstige rol van CD14 bij insuline signalering en glucose homeostatsis. Ondernemingen De bevinding dat CD14 werd neerwaarts gereguleerd bij patiënten met parodontitis kan ook wijzen op een negatieve feedback mechanisme waardoor parodontale weefsel van patiënten met parodontitis voorkomen dat verdere schade als gevolg van herhaalde aanvallen van bacteriën afgeleid LPS. Interessant Nemoto et al. gemeld dat CD14 expressie op humane gingivale fibroblasten (HGFs) werd duidelijk verminderd door forbol 12-myristaat 13-acetaat (PMA) geactiveerde polymorfonucleaire leukocyten (PMN) in een gemengde cultuursysteem van HGF en PMN's [42]. Verder onderzoek toonde aan dat als gevolg van CD14 reductie LPS-geïnduceerde productie van inflammatoire cytokines zoals IL-8 door HGFs werd onderdrukt. Deze bevindingen gesuggereerd dat terwijl geactiveerde PMN's een cruciale rol in het weefsel ontsteking spelen, HGFs hebben een potentieel negatieve feedback mechanisme om de ontsteking te controleren door downregulatie van CD14 expressie.
Naast CD14, onze huidige studie onderzocht ook de parodontale expressie van TLR4, MD-2 en MyD88. De resultaten toonden aan dat de parodontale mRNA blijken van TLR4, MD-2 en MyD88 geen significant verschil in de 3 groepen. Terwijl onze huidige studie is de eerste een over TLR4 mRNA expressie Promsudthi et al. en Rojo-Botello et al. het effect van T2DM en chronische periodontitis op TLR4 eiwitexpressie [29, 30] zijn gerapporteerd. Promsudthi et al. toonde aan dat patiënten met periodontitis TLR4 eiwit was verlaagd gingivale epitheel, maar patiënten met zowel periodontitis en diabetes had statistisch significant hogere percentages TLR4-positieve cellen ten opzichte van periodontaal gezonde proefpersonen [29]. Rojo-Botello et al. aangetoond dat patiënten met periodontitis en diabetes hadden een hogere TLR4 eiwit in gingival epitheel dan patiënten met alleen parodontitis. Uiteraard zijn deze studies gericht op de parodontale TLR4 eiwitexpressie, maar onze studie gericht op de TLR4 mRNA expressie.
Het is goed gedocumenteerd dat CD14 expressie is opgereguleerd door LPS en inflammatoire cytokinen in vitro
[43-45] . Echter, de bij de neerwaartse regulatie van CD14 expressie mechanismen niet goed vastgesteld. Naast de remming van CD14 expressie door PMN zoals hierboven beschreven, Imai et al. hebben gerapporteerd dat transformerende groeifactor beta (TGFP) 1 kan remmen LPS gestimuleerde CD14 expressie in macrofagen door vermindering transcriptiefactor activerend eiwit (AP) -1 [46]. Interessant is dat onze recent onderzoek aangetoond dat parodontale TGFB1 expressie is verhoogd bij patiënten met periodontitis [47]. Daarom is het waarschijnlijk dat TGFB1 speelt een rol bij de neerwaartse regulatie van parodontale CD14 expressie in patiënten met parodontitis. Toch blijft het onduidelijk hoe CD14 expressie wordt verder neerwaarts gereguleerd door T2DM en meer studies zijn nodig om de mechanismen die parodontale CD14 expressie wordt neerwaarts gereguleerd door parodontitis en T2DM te helderen.
Conclusies
CD14 expressie werd gedownreguleerd over patiënten met geen van beide parodontitis noch T2DM patiënten met periodontitis alleen, en patiënten met zowel parodontitis en T2DM. Deze bevinding geeft aan dat CD14 expressie is geassocieerd met een gunstig gastheer reactie of onderworpen aan een negatieve feedback regulatie
Afkortingen
TLR.
Toll like receptor
LPS:
Lipopolysaccharide
MyD88:
myeloïde differentiatie primaire reactie gen 88, MD-2, myeloïde differentiatie factor 2
PD:
Probing diepte
AL:
Attachment level
verklaringen
Dankwoord
Dit werk werd ondersteund door National Institute of Dental en Craniofacial Research (NIDCR) /National Institutes of Health (NIH) subsidie DE016353 en Department of Veterans Affairs, Veterans Health Administration, Bureau voor Onderzoek en Ontwikkeling, Biomedische Laboratorium Onderzoek en Ontwikkeling verlenen 5I01BX000854 (tot YH).
Open AccessThis artikel wordt gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution 4.0 International License (http:. //creativecommons org /licenties /door /4. 0 /), die onbeperkt gebruik, de distributie mogelijk maakt, en reproductie in elke vorm, mits u de juiste krediet aan de oorspronkelijke auteur (s) en de bron te geven, een link naar de Creative Commons-licentie, en aangeven of wijzigingen zijn aangebracht. De Creative Commons Public Domain Dedication waiver (http:. //Creativecommons org /publicdomain /zero /1 0 /) van toepassing op de ter beschikking gestelde in dit artikel, tenzij anders vermeld data
Competing. belangen Ondernemingen De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende belangen
auteurs bijdragen
DCH:. Dr. Hedgpeth is een parodontoloog die patiënten gerekruteerd, parodontale weefsels na operaties en verstrekt klinische gegevens verzameld. XZ: Xiaoming is een onderzoeks-specialist die uit RNA-isolatie en genexpressie analyse uitgevoerd met behulp van real-time PCR. JJ: Dr. Jin is een staf wetenschapper die genexpressie analyse uitgevoerd met behulp van real-time PCR en data-analyse. RSL: Dr. Leite is een parodontoloog die patiënten gerekruteerd, parodontale weefsels na operaties, mits klinische gegevens verzameld, en heeft bijgedragen aan de voorbereiding manuscript. JWK: Dr. Krayer is een parodontoloog die hebben bijgedragen aan de voorbereiding manuscript. YH: Dr. Huang is een senior onderzoeker toezicht op het project, waaronder het verkrijgen van ethische goedkeuring, experimenteel ontwerp, data-analyse en manuscript voorbereiding. Alle auteurs gelezen en goedgekeurd het definitieve manuscript.
