Abstracte achtergrond
actinobacillus actinomycetemcomitans
(A.actinomycetemcomitans
) is een belangrijke parodontale pathogeen die kunnen deelnemen aan periodontitis en andere niet-orale infecties. De cytolethal distending toxine (Cdt) is een van de virulentiefactoren die door deze bacterie. Deze studie was de verdeling van A.actinomycetemcomitans Kopen en de prevalentie van de cdtB
gen in Chinese patiënten helderen.
Methods
totaal 255 subgingivale werden verkregen van 30 patiënten. De monsters werden verzameld van parodontale gezonde sites als ondiep, matige en diepe zakken. De absolute hoeveelheid A.actinomycetemcomitans Kopen en cdtB
gen werden bepaald door real-time polymerase chain reaction.
Resultaten
A.actinomycetemcomitans
werd ontdekt in 92 van de 105 (87,6%) monsters agressieve parodontitis (AGP) patiënten in 73 van 79 (92,4%) monsters van chronische periodontitis (CP) patiënten en bij 5 van de 71 (7,0%) monsters van parodontale gezonde proefpersonen. De cdt
B-gen werd ontdekt in 72 sites (78,3%) met AGP geïnfecteerd met A.actinomycetemcomitans
, 54 plaatsen (74,0%) met CP geïnfecteerd met A.actinomycetemcomitans Kopen en niemand bij gezonde plaatsen die besmet zijn met A.actinomycetemcomitans
. Daarnaast hoeveelheid A.actinomycetemcomitans Kopen en CDT
gen in monsters uit diepe zakken waren significant groter dan matig, ondiep en gezonde sites (P & lt; 0,05). In vergelijking met CP werden AGP patiënten die geïnfecteerd zijn met een verhoogd aantal CDT
genotype in diepe pockets (P & lt; 0,05).
Conclusie
Deze studie suggereert dat de cdtB
gen heersen in A. actinomycetemcomitans
, en de verdeling van cdt
genotype stam kan worden gecorreleerd met AGP en ernstige parodontale ontsteking.
Sleutelwoorden
actinobacillus actinomycetemcomitans
Cytolethal distending toxine Subgingivale plaque Real-time PCR Xiaoqian Wang, Lu Li, Yan Xu Ying en zon even bijgedragen aan dit werk
Electronic aanvullend materiaal
De online versie van dit artikel. (doi:. 10 1186 /1472-6831-14-37) bevat aanvullend materiaal, dat beschikbaar voor geautoriseerde gebruikers. achtergrond
Parodontitis is een chronische ontstekingsziekte leiden tot het verlies van periodontale weefsels, die veel voorkomt en is de belangrijkste oorzaak van verlies van tanden bij volwassenen. Een ggressive parodontitis (AGP) wordt gekenmerkt door een snelle ontwikkeling en ernstige botresorptie, over het algemeen van invloed op jongere patiënten dan doet de chronische vorm.
A.actinomycetemcomitans
is een Gram-negatieve, niet-beweeglijke staaf, facultatief anaërobe en commensale bacterie die al lang sterk geassocieerd met AGP en kan ook bijdragen aan chronische periodontitis (CP). Naast orale infectie, heeft deze bacterie ook verantwoordelijk voor een aantal systemische infectieziekten, zoals endocarditic, meningitis, osteomyelitis, glomerulonephritis en artritis zijn [1].
Dit micro-organisme tot expressie aantal potentiële virulentiefactoren die betrokken zijn bij de kolonisatie orale holte, remming van de regeneratie van parodontale weefsels en interferentie met gastheer afweermechanismen. In 1998, Ohguchi [1] aangetoond dat A.actinomycetemcomitans
cytolethal distending toxine (CDT), die werd uitgescheiden in het bacteriële kweeksupernatant kon produceren. Het is duidelijk dat CDT wordt gecodeerd door drie genen aangeduid CDTA
, cdtB
en CDTC
, die zijn ingericht als een schijnbare operon. Deze drie genen specificeren drie polypeptiden respectievelijk aangeduid CDTA, CdtB en CDTC met schijnbare molecuulgewichten van 28, 32 en 20 kDa, waarbij een heterotrimeer holotoxine [2-5] vormen. CDTA CDTC en noodzakelijk zijn voor de uitscheiding van het toxine, terwijl CdtB verantwoordelijk is voor de biologische activiteit [6]. CdtB een sequentie homologie met zoogdier DNase I, wat wijst op een belangrijke rol voor de nuclease-activiteit in gastheer parasiet interacties [7].
Onder parodontale pathogene bacteriën, A.actinomycetemcomitans
is de unieke bacterie die CDT kan produceren. Accumuleren bewijzen tonen aan dat CDT wordt geassocieerd met de persistentie van infectie bij diermodellen [7], verhoogde expressie van RANKL (receptor activering van de kernfactor KB-ligand) en de daaruit osteoclastogenesis [3]. Er was rapport waaruit blijkt dat cdtABC
afwezig was [8] in A.actinomycetemcomitans
geïsoleerd in Japan [9], maar Kawamoto bevestigd dat cdtABC
vaak werd gevonden in het genoom van A.actinomycetemcomitans
[ ,,,0],10].
Tot nu toe zijn er weinig rapporten over de prevalentie van cdt
genotype stam van A.actinomycetemcomitans
in de Chinese parodontitis patiënten. Accumuleren bewijzen tonen aan dat CDT wordt geassocieerd met de persistentie van infectie bij diermodellen [7], verhoogde expressie van RANKL (receptor activering van de kernfactor KB-ligand) en de daaruit osteoclastogenesis [3]. De associatie van CDT genetische diversiteit binnen A.actinomycetemcomitans
beter moeten worden geëvalueerd. In deze studie gedetecteerd we de verdeling van A.actinomycetemcomitans Kopen en de prevalentie van de mogelijke virulentie factor CDT coderende gen cdt
B in subgingivale plaque verkregen van Chinese patiënten met CP en AGP door real-time PCR, om evalueren de associatie van A.actinomycetemcomitans
CDT genetische diversiteit en klinische kenmerken.
Methods
onderwerpen Inloggen Deze studie door de Ethische Commissie van Tandheelkundige Ziekenhuis verbonden aan Nanjing Medical University, Nanjing, China werd goedgekeurd. De doelstellingen en procedures van de studie werden uitgelegd en geïnformeerd toestemming werd verkregen van alle rekruten.
Deelnemers opgenomen in de huidige studie werden gerekruteerd bij de Dental Hospital aangesloten bij Nanjing Medical University, van december 2008 tot maart 2009. 10 CP patiënten, AGP 10 patiënten en 10 gezonde proefpersonen werden gerekruteerd in deze studie Ondernemingen De criteria voor inclusie patiënten waren als volgt:. (i) en etnische Han & lt; 40 jaar oud; (Ii) geen geschiedenis van parodontale behandeling; (Iii) geen systemische antibiotica of anti-inflammatoire geneesmiddelen die binnen 3 maanden; (Iv) gezonde systemische aandoeningen; (V) geen zwangerschap, en (vi) waren niet de huidige gebruikers van tabaksproducten of nicotine vervangende medicijnen [10]. De parodontale gezonde proefpersonen had geen sites met indringende diepte (PD) & gt; 3 mm of klinische aanhechtingsverlies (CAL) & gt; 1 mm, en niet meer dan 10% van de sites met bloeden op indringende (BOP) .De diagnoses van CP en AGP werden gemaakt op basis van criteria die zijn vastgesteld bij de workshop gesponsord door de Amerikaanse Academie voor Parodontologie (AAP) in 1999 [11-13].
Sample plaatsen werden geclassificeerd als oppervlakkig, matig of diep op basis van de niveaus van de PD en CAL. Het niveau van de PD was ongeveer 3 mm of het niveau van CAL was 1-2 mm in ondiep groep; en 4-6 mm PD of 3-4 mm van de CAL in gematigde groep. In diepe groep, het niveau van de PD was meer dan 6 mm of CAL ≥ 5 mm [12].
Klinische metingen
Voordat sampling, een complete parodontale onderzoek werd uitgevoerd om de klinische parodontale parameters vast te leggen met behulp van FP32 probe (Florida probe , USA), met inbegrip van PD, CAL en BOP. Alle metingen werden uitgevoerd door een gekalibreerde examinator. Om eventuele verontreinigingen die kunnen voortvloeien uit bloeden op indringende, klinische indringende en meting werden ten minste 7 dagen van te voren van bacteriën bemonstering uitgevoerd te voorkomen [14].
Sampling van subginginval bacteriën plaque
8-10 monsters werden genomen uit ondiep, matige en diepe plaatsen van elk ingeschreven patiënten CP en AGP en uit gingivale sulci gezonde controles. Na zorgvuldige verwijdering van supragingivale plaque deposito's, werd de prikplaats geïsoleerd met katoenen broodjes en zachtjes de lucht gedroogd. Vervolgens werd een 30 # papier punt [15, 16] werd ingebracht in de zakken /tandvlees sulci en links in plaats voor '30. Het papier punt van elke bemonstering plaats werd onmiddellijk geplaatst in een lege 1,5 ml microfugebuis. Monsters voor PCR-analyse werden opgeslagen bij -80 ° C.
Positieve controle bacteriestammen
A.actinomycetemcomitans
ATCC 29522, ATCC 29523, ATCC 24523 werden anaëroob gekweekt (75% N
2, 10% CO 2, 15% H 2) bij 37 ° C op 5% schapenbloedagar agarplaten (Oxoid, UK), verrijkt met haemine (5 mg /l) en menadion (1 mg /l) voor 3- 5 dagen, en dan geënt in de hersenen het hart infusie bouillon tot uitgegroeid tot de late logaritmische groeifase. De bacteriën werden geoogst door centrifugeren, gewassen in PBS en geresuspendeerd bij een concentratie van optische dichtheid bij 690 nm van 1, overeenkomende met ongeveer 1 x 10 8 kolonievormende eenheden (CFU) /ml [17].
Oligonucleotide primers en TaqMan probes
Identificatie van geconserveerde gebieden werd uitgevoerd door multiple sequence alignment met ClustalW software op basis van de gepubliceerde 16S rDNA en cdtB
sequenties. De fluorescerende kleurstoffen in de 5 'en 3' uiteinden van de probe waren FAM (6-carboxyfluoresceïne; reporter) en TAMRA (6-carboxytetramethylrhodamine, quencher), respectievelijk. Alle primers en probes werden gecontroleerd op mogelijke cross-hybridisatie met bacteriële genen met behulp van de database gelijkenis zoekprogramma BLAST. Primers en probes gebruikt voor het kwantificeren van A actinomycetemcomitans
16S rDNA en CDT
-gen werden weergegeven in tabel 1.Table 1 primers en TaqMan sondes sequenties
Primer
Sequence
producten grootte
Aa
-F
GCTGGTCTGAGAGGATGGC
Aa
-R
CGAAAGAACTTTACAACCCGA
153 bp
Aa
P
CCTACGGGAGGCAGCAGTGG
cdtB
-F
ATTCTTCTGTGCTTCAATCTCG
cdtB
-R
GGTGATGATGGTGATGAGGTAA
151 bp
cdtB
P
CACAGGTGGTTCTGATGCGGTAA
Aa
-F, Aa
-R en Aa
P staan voor primers en TaqMan probe voor A. actinomycetemcomitans
16 s rDNA; cdtB
-F, cdtB
-R en cdtB
P staan voor primers en TaqMan probe voor A.actinomycetemcomitans cdtB
. Standard curves
bouw
Met het oog op de kwantitatieve vast te stellen assay, plasmiden die het doelwit sequenties van A.actinomycetemcomitans
16S rDNA en CDT
-gen werden gekloond met behulp van de PMD 19 T-vector (Takara, Japan). PCR producten A.actinomycetemcomitans
16S rDNA en cdt
gen werden in plasmidevectoren respectievelijk de recombinante vectoren werden getransformeerd in E. coli
. Daarna werden de plasmiden gezuiverd met Mini BEST Plasmid Purification Kit (Takara, Japan). De gezuiverde plasmiden werden gekwantificeerd door spectrofotometrie. Standaard krommen werden geconstrueerd met serieel verdunde gezuiverde plasmiden met voorafbepaalde concentratie op basis van het lineaire verband tussen de Ct en de logaritme van het uitgangsmateriaal gen bedrag. Gevoeligheid van de ontwikkelde real-time PCR werd geëvalueerd door 10 7-10 ° plasmide kopieën van A. actinomycetemcomitans Kopen en cdtB
gen (gegevens niet getoond), maximum van ongeveer 10 cellen werd vastgesteld de PCR-reactiemengsel.
DNA-extractie en real-time PCR
Elk monster werd verdund in 500 pl gedestilleerd water, verspreid in vortex gedurende 1 minuut, haalde de krant punten voor DNA-extractie. Vervolgens werd DNA gezuiverd door de Mini BESTE Bacteria Purification Kit (Takara, Japan) en geëlueerd in 60 ui elutiebuffer.
TaqMan Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems, USA) werd gebruikt voor PCR-analyse. De eindconcentratie werd gebruikt in een totaal volume van 10 gl bevatte 5 pl 2 x Master Mix, 3 ui DNA-matrijs, 0,9 mM van elke primer en 0,25 mM probe. Real-time PCR werd uitgevoerd in duplo in ABI 7900 HT systeem (Applied Biosystems, USA) uitgevoerd met de volgende sequentie: 2 min bij 50 ° C, 10 min bij 95 ° C en 40 cycli van 15 s bij 95 ° C en 1 min bij 60 ° C.
Statistische analyse
Beschrijvende analyse werd uitgevoerd voor alle variabelen. Kwantitatieve variabelen werden door gemiddelde waarden, standaarddeviaties en minimum- en maximumwaarden. Kwalitatieve variabelen werden beschreven door absolute en relatieve frequenties. Er werden vergelijkingen gemaakt tussen groepen (AGP, CP en gezonde proefpersonen) voor de onafhankelijke variabelen (PD) door het toepassen van variantie-analyse (ANOVA). Alle testen werden uitgevoerd met behulp van SPSS voor Windows versie 12.0 (USA) en p-waarden kleiner dan 0,05 werden significant beschouwd.
Resultaten
klinische analyse
we geanalyseerd plaque monsters verzameld van 30 proefpersonen na de hierboven beschreven protocollen. Deze studie bestond uit 255 subgingivale plaque monsters, die werden verzameld van 10 AGP patiënten, 10 CP patiënten en 10 parodontale gezonde proefpersonen. De onderzoekspopulatie had geen voorgeschiedenis van roken of parodontale behandeling. Ondernemingen De gemiddelde waarde van PD, CAL en BOP (%) van monsternemingsplaatsen worden getoond in Tabel 2. Deze resultaten bleek dat er geen statistische verschillen in deze parameters tussen CP en agp groepen, terwijl er significante verschillen tussen beide CP groep of AGP-groep en parodontale gezonde subjects.Table 2 klinische kenmerken van parodontitis patiënten en gezonde controles
H
CP
agp
onderwerpen
10
10
10
Sampling plaatsen
71
79
105
Leeftijd (jaar-oud, gemiddeld ± SD)
27,5 ± 2,1
32,5 ± 1,8
29,7 ± 2,1
Geslacht (man /vrouw)
5/5
5/5
5/5
PD (mm, gemiddelde ± SD)
2,4 ± 0,8
4,1 ± 2,0 *
4,9 ± 1,9 *
CAL (mm, gemiddelde ± SD)
0
4,8 ± 2,0 *
4,5 ± 1.9 *
BOP (%, gemiddelde ± SD)
15,8 ± 0,9
30,8 ± 5,5 *
30,6 ± 7,2 *
agp, CP en H staan voor agressieve parodontitis, chronische parodontitis en parodontale gezonde, respectievelijk. Ondernemingen De gemiddelde indringende diepte, klinische aanhechtingsverlies en bloeden op indringende (%) werden opgenomen in 255 bemonstering sites uit 30 patiënten. * Er waren significante verschillen bij gemiddelde pocketdiepte, klinische aanhechtingsverlies en bloeding na sonderen (%) tussen AGP of CP en H (P & lt; 0,05), maar er was geen significant verschil tussen AGP en CP
Voorkomen en distributie. van A.actinomycetemcomitans
met behulp van real-time PCR, we onderzocht 255 subgingivale plaque samples om de niveaus van A.actinomycetemcomitans
in verschillende status van parodontale websites te evalueren. Onder alle 255 subgingivale monsters A.actinomycetemcomitans
werd gedetecteerd van 170 (66,7%) monsters. Slechts 5 monsters (7,0%) uit de 71 subgingivale monsters uit de parodontaal gezonde personen waren A.actinomycetemcomitans
16 s rDNA positief (tabel 3). 73 van de 79 subgingivale plaque monsters (92,4%) van CP patiënten waren A.actinomycetemcomitans
16 s rDNA positief. En onder de 105 subgingivale plaque monsters AGP patiënten, 92 (87,6%) waren A.actinomycetemcomitans
16 s rDNA positief. Er was geen statistisch verschil van A.actinomycetemcomitans
positieve tarieven tussen CP (92,4%) en agp (87,6%) (P & gt; 0,05) (tabel 3) .table 3 Prevalentie van A.actinomycetemcomitans en CDT in alle monsternemingsplaatsen
AgP
CP
H
Total
105
79
71
Aa
(+)
92
73
5
Aa
(+)/Total(%)
87.6
92.4
7.0
cdt
(+)
72
54
0
cdt
(+)/Aa
(+)(%)
78.3
74.0
0
Quantity-Aa
2.3 ± 1.1 *
2,1 ± 0,9 *
0,8 ± 0,5
Hoeveelheid-cdt
1,6 ± 0,8 **
1,3 ± 0,8 ***
0,4 ± 0,3
Aa
, AGP, CP en H staan voor A.actinomycetemcomitans
, agressieve parodontitis samples , chronische periodontitis parodontale gezonde monsters en monsters respectievelijk pagina Home Er waren significante verschillen hoeveelheid A.actinomycetemcomitans
tussen AGP of CP en H (P & lt 0,05). en geen significante verschillen tussen AGP CP (P & gt; 0,05). ** Hoeveelheid cdt
genotype van A.actinomycetemcomitans
AGP monsters waren significant hoger dan die van CP en H (P & lt; 0,05). *** Hoeveelheid CDT
genotype van A.actinomycetemcomitans
van CP monsters waren significant hoger dan H (P & lt; 0,05).
Gemiddelde log-getransformeerde aantallen A.actinomycetemcomitans
16 s rDNA bij gezonde proefpersonen, CP patiënten en AGP patiënten waren 0,8 ± 0,5, 2,1 ± 0,9 en 2,3 ± 1,1 (tabel 3), respectievelijk. Hogere aantallen A.actinomycetemcomitans
in monsters gedetecteerd periodontitis plaatsen in tegenstelling tot die van gezonde proefpersonen (P & lt; 0,05). Echter, er waren geen significante verschillen tussen deze twee parodontitis groepen (P & gt; 0,05).
Prevalentie en distributie van A.actinomycetemcomitans cdtB
gen
Uit 255 subgingivale monsters, A.actinomycetemcomitans cdtB
werd gedetecteerd in 126 (49,4%) monsters. In de 71 subgingivale monsters van parodontale gezonde individuen geen van de monsters werden cdtB
positief (Tabel 3). Terwijl 54 van de 73 (74,0%) A.actinomycetemcomitans
positieve subgingivale plaque monsters van CP patiënten waren cdtB
positief. Onder de 92 A.actinomycetemcomitans
positieve subgingivale plaque monsters van AGP patiënten, 72 (78,3%) monsters waren A.actinomycetemcomitans cdtB
positief. Er was geen statistisch verschil voor de A.actinomycetemcomitans cdtB
positieve tarieven tussen CP (74,0%) en agp (78,4%) (P & gt; 0,05). Geen van de A.actinomycetemcomitans
16 s rDNA negatieve monsters waren positief voor cdtB.
Niveaus van cdtB
-gen werden ook gedetecteerd in 255 monsters. Gemiddelde log-getransformeerde aantallen cdtB
in CP en AGP waren 1,3 ± 0,8 en 1,6 ± 0,8 (tabel 3). Monsters van agp groep toonde de hogere aantallen cdtB
genotype A.actinomycetemcomitans
tegenstelling tot CP groep en parodontale gezonde proefpersonen (P & lt; 0,05).
Vereniging van A.actinomycetemcomitans Kopen en CDT
distributie met verschillende parodontale status van
Mean-log getransformeerd aantallen A.actinomycetemcomitans Kopen en cdtB
gen in ondiep, matige en diepe zakken waren 1,8 ± 0,9, 2,2 ± 0,8, 3,1 ± 1,2 en 1,3 ± 0,8 , 1,5 ± 0,8 respectievelijk 2,1 ± 1,1 (tabel 4). Hogere hoeveelheid A.actinomycetemcomitans Kopen en cdtB
gen in diepe parodontale pockets werden gedetecteerd dan matige en ondiepe pockets (P & lt; 0,05) .table 4 Prevalentie en distributie van A. actinomycetemcomitans en CDT in parodontitis sampling sites door het indringende diepte
Shallow
Moderate
Deep
Total
100
49
35
Quantity-Aa
1.8 ± 0,9
2,2 ± 0,8 *
3,1 ± 1,2 **
Hoeveelheid-cdt
1,3 ± 0,8
1,5 ± 0,8
2,1 ± 1,1 **
* Mean log-getransformeerde aantallen A.actinomycetemcomitans
16 s rDNA van matig zakken monsters waren significant hoger dan dat uit ondiepe zakken (P & lt; 0,05).
** Mean-log getransformeerd aantallen A.actinomycetemcomitans
16 s rDNA en CDT
genotype van A.actinomycetemcomitans
van diepe zakken monsters waren significant hoger dan die van matig en ondiepe pockets (P & lt; 0,05).
met betrekking tot de verschillende parodontale statussen, bedoel-log getransformeerd aantallen A.actinomycetemcomitans Kopen en cdtB
gen uit CP en AGP in ondiep , matige en diepe zakken werden in figuur 1 respectievelijk. De hoeveelheid A.actinomycetemcomitans Kopen en cdtB
gen in diepe parodontale pockets AGP was hoger dan CP (P & lt; 0,05). Figuur 1 Mean log-getransformeerde aantallen A.actinomycetemcomitans 16s rDNA en cdtB in ondiep, matige en diepe parodontale pockets. een. Mean-log getransformeerd aantallen A.actinomycetemcomitans
16 s rDNA in ondiep (n = 48), matig (n = 20), diep (n = 11) parodontale pockets van CP proefpersonen waren 1,9 ± 0,8, 2,1 ± 0,8 en 2,5 ± 1,0, respectievelijk. Mean-log getransformeerd aantallen A.actinomycetemcomitans
16 s rDNA in ondiep (n = 52), matig (n = 29), diep (n = 24) parodontale pockets AGP proefpersonen waren 1,7 ± 0,8, 2,3 ± 0,8 en 3.4 ± 1.1, respectievelijk. * De hoeveelheid A.actinomycetemcomitans
in diepe parodontale pockets AGP was hoger dan CP (P & lt; 0,05). b. Mean-log getransformeerd aantallen A.actinomycetemcomitans cdtB
in ondiep (n = 48), matig (n = 20), diep (n = 11) parodontale pockets van CP proefpersonen waren 0,8 ± 0,1, 1,5 ± 0,8 en 1,3 ± 0,7, respectievelijk. Mean-log getransformeerd aantallen A.actinomycetemcomitans
16 s rDNA in ondiep (n = 52), matig (n = 29), diep (n = 24) parodontale pockets AGP proefpersonen waren 0,8 ± 0,1, 1,6 ± 0,8 en 2.6 ± 1.0, respectievelijk. * De hoeveelheid A.actinomycetemcomitans cdtB
in diepe parodontale pockets AGP was hoger dan CP (P & lt; 0,05).
Discussie Inloggen Deze onderzoek dat we in dienst TaqMan real-time PCR om direct doelwit kwantificering A. actinomycetemcomitans Kopen en CDT
B-gen in verschillende ernst van parodontitis plaatsen van AGP of CP patients.and het effectief is voor de detectie van pathogenen soorten die zeer moeilijk te cultuur. Daarom kozen we verschillende periodontale plaatsen als doelen voor het voorkomen en de hoeveelheid A.actinomycetemcomitans en zijn coderend gen CDT in Chinese patiënten en verschillende periodontale toestand verkennen. A.actinomycetemcomitans
niet aanwezig kunnen zijn in alle orale sites in een onbehandelde parodontitis patiënt [18]. Het nemen van subgingivale monsters van alle tanden zou de meest betrouwbare manier om A.actinomycetemcomitans
detecteren. Deze werkwijze is tijdrovend en geld- tijdrovende die niet geschikt is voor gebruik in de praktijk. Bemonstering van de diepste kamer van elk kwadrant is aangetoond zeer betrouwbaar voor het detecteren van de subgingivale aanwezigheid van periodontale ziekteverwekkers bij onbehandelde patiënten [18] is. Deze techniek is gebaseerd op individueel niveau. Terwijl een last van parodontitis, agressieve of chronische wijze kan ernst van parodontitis verschillen van plaats tot plaats. Dus evalueerden we de relevantie van A.actinomycetemcomitans
en zijn coderende gen CDT met parodontitis stuates baseren op "site". Ondernemingen De primers gekozen voor de detectie van A.actinomycetemcomitans Kopen en CDT
gen waren gebaseerd op A .actinomycetemcomitans
16 s rDNA-gen en cdtB
gen respectievelijk. De 16 s rDNA gen is gerapporteerd in hoge mate geconserveerd en dit patroon voor detectie van A.actinomycetemcomitans
is goed bewaard gebleven [19, 20]. Bovendien hebben recente gegevens blijkt dat CdtB is de hoofdcomponent en onmisbaar zijn voor de expressie van CDT holotoxine activiteit [6, 8], en de sequentie van cdtB
werd sterk geconserveerd onder soorten A.actinomycetemcomitans
[21] . Zo is de prevalentie van CDT coderende genen werd geëvalueerd met behulp cdtB
specifieke primers en probes.
Standaard curven werden gebruikt in deze studie de absolute kwantificering van A.actinomycetemcomitans Kopen en cdt-gen in monsters
evalueren . Plasmiden die gekloonde doelsequenties werden als standaard stoffen kwantitatieve PCR, die mogelijk de metingen nauwkeuriger en stabiel vergeleken met PCR amplicon standaard stoffen rechtstreeks [22].
Sommige studies de prevalentie van A.actinomycetemcomitan
s in een aantal verschillende populaties [4, 13, 18]. Ons werk is het eerste verslag over de analyse van zowel positief beoordelen en absolute hoeveelheid A.actinomycetemcomitans Kopen en haar CDT
B-gen in het Chinees parodontitis patiënten, en de vereniging van de verdeling van A.actinomycetemcomitans
cdtB hotels met verschillende parodontale toestand.
We vonden dat A.actinomycetemcomitans Kopen en haar cdtB
gen waren significant vaker en met een hogere hoeveelheid in monsters van patiënten die lijden aan AGP of CP dan parodontale gezonde proefpersonen, en A.actinomycetemcomitans Kopen en haar CDT
gen waren ook vaker en met een hogere hoeveelheid in diepe parodontale pockets dan in een gematigd en ondiepe parodontale pockets.
Hoewel A.actinomycetemcomitans
is gekoppeld aan de etiologie van AGP is deze bacterie ook gevonden bij patiënten die gezond zijn of andere vormen van periodontale ziekte [8]. Onze resultaten toonden aan dat slechts 7,0% parodontale gezonde locaties waren A.actinomycetemcomitans
positief; 92,4% CP monsters en 87,6% agp monsters tentoongesteld A.actinomycetemcomitans
positief, waaruit blijkt dat de aanwezigheid van A.actinomycetemcomitans
werd gecorreleerd met parodontitis.
Kwantitatieve gegevens bleek dat de hoeveelheid A.actinomycetemcomitans
in CP en AGP monsters werden observably hoger dan bij gezonde monsters, terwijl er geen verschil tussen de CP en agp. Maar de hoeveelheid cdtB
genotype van stam A.actinomycetemcomitans
van AGP monsters werden remarkablly hoger dan CP en gezonde monsters (Tabel 3). Deze gegevens kunnen aangeven kwantitatieve resultaten meer geschikt zijn om de verdeling van A.actinomycetemcomitans Kopen en zijn cdtB
genotype
analyseren. De cdtB
genotype stam van A. actinomycetemcomitans
wellicht meer relevant met agressieve parodontitis zijn.
Tan en zijn collega's vonden A.actinomycetemcomitans hotels met de cdt
genotype waren op een hogere frequentie van sites verkregen van patiënten met agressieve periodontitis [23]. Onze studie toonde de cdtB
genotype A.actinomycetemcomitans
waren op een grotere hoeveelheid van sites verkregen uit diepe zakken. Hoe hoger optreden en de hoeveelheid van deze bacterie in monsters met ernstige parodontitis-status was niet een verrassende waarneming. A.actinomycetemcomitans
CDT toxine kan vergelijkbaar H.ducreyi
CDT toxine, wat kan bijdragen aan de pathogeniteit van bacteriën bij een hogere concentratie [7] zijn. In vivo studies zijn nog steeds nodig om de exacte pathogene rol van A.actinomycetemcomitans
CDT in de toekomst te verkennen. Onze data toonden A.actinomycetemcomitans Kopen en haar CDT
genotype stam waren wijd verspreid is in diepe en gematigde parodontale pockets. Om een stap verder te gaan, kwantitatieve analyse toonde cdtB
genotype stam van A.actinomycetemcomitans
vaker in diepe parodontale pockets waren. De hoeveelheden CDT
genotype stam van A.actinomycetemcomitans
werden gecorreleerd met ernstige vormen van parodontitis (CP of AGP). Talrijke studies hebben overwogen A.actinomycetemcomitans
als een belangrijke etiologische micro-organismen die betrokken zijn bij AGP [24-26], echter, vanuit een nieuw perspectief, onze gegevens bleek dat cdtB
genotype stam van A.actinomycetemcomitans
was vooral gevonden bij sites met ernstige vormen van parodontitis. A.actinomycetemcomitans hotels met cdtB
genotype wellicht meer virulente menselijke parodontium zijn.
Zoals verwacht, geen van de A.actinomycetemcomitans
16 s rDNA negatieve monsters positief voor cdtB
waren. Dit resultaat bevestigde dat A.actinomycetemcomitans
was de exclusieve lid in de orale microbiële flora geïdentificeerd te dragen en uit te drukken de cytolethal distending toxine locus. Daarnaast waren er 5 van gezonde monsters in onze studie, die positief voor A.actinomycetemcomitans waren
terwijl negatief voor cdt
. Dit kan de resultaten van minuscule hoeveelheid CDT
genotype stam van A. actinomycetemcomitans
in deze 5 subgingivale plaque monsters, terwijl het kan een nieuwe ondersteunende bewijs voor het bestaan van cdt
-negatieve genotype stam van A. zijn actinomycetemcomitans
in de mondholte. Ondernemingen De CDT
gen evenals lktA
(leukotoxine a) van A.actinomycetemcomitans
is een enkele kopie gen [21]. Evenwel 16 s rDNA gen algemeen 4 tot 6 kopieën per cel (bijvoorbeeld 6 exemplaren E. coli
) [22]. Onze resultaten toonden aan dat binnen hetzelfde monster de absolute hoeveelheid A.actinomycetemcomitans
16 s rDNA 1-10 keer waren boven die van cdtB
gen, waaruit bleek dat een parodontale site kan worden besmet met twee of zelfs meer genotypen van A.actinomycetemcomitans
tegelijk. Sommige genotypen van A.actinomycetemcomitans
bezitten cdt
gen, dat CDT activiteit kan uitdrukken; terwijl andere genotypes van A.actinomycetemcomitans
worden cdt
-negatieve, die minder virulent dan CDT
-positieve stammen zou zijn. Yamano [9] gemeld dat 89% van de A.actinomycetemcomitans
stammen bezat de cdt
gen. Een andere studie [4] ontdekte dat 86% van de A.actinomycetemcomitans
isolaten gepresenteerd compleet operon van CDT
-gen en zijn karakteristieke cytotoxische activiteit. Tan en zijn collega's toonden een nauwe samenwerking tussen AGP en CDT
-positieve genotype A.actinomycetemcomitans
stammen [23]. Deze bevindingen suggereerden dat niet alle stammen van A.actinomycetemcomitans
bezat
cdt-gen, dat wil zeggen, niet elke A.actinomycetemcomitans
stammen gepresenteerd CDT cytotoxische activiteit. Net als bij A.actinomycetemcomitans
stammen, Campylobacter spp
., C.jejuni
, H.ducreyi en overig CDT-producerende bacteriën niet CDT activiteit uitdrukkelijk of bevatten alle cdtABC
genen in alle stammen [4].
Conclusie
Onze studie onderzocht de prevalentie en distributie van A.actinomycetemcomitans Kopen en haar CDT
gen in subgingivale plaque van de Chinese parodontitis patiënten. De sterk toegenomen hoeveelheden CDT
-positieve genotype A.actinomycetemcomitans
werden gevonden in AGP parodontale sites en in de diepe zakken van zowel CP en agp patiënten, waaruit bleek dat CDT
gen zou kunnen zijn een potentiële virulentie geassocieerd gen betrokken bij de pathogenese van AGP ernstige parodontitis. Alle auteurs gelezen en goedgekeurd het definitieve manuscript.
